甲硫脑啡肽通过阿片受体促进脂多糖作用下奶牛子宫内膜基质细胞的增殖

为明确甲硫脑啡肽(Met-enkephalin,MENK)调控原代奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cell,BESC)增殖的作用机制,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、MENK和阿片受体拮抗剂共处理细胞进行了本试验。本研究使用的阿片受体拮抗剂包括非选择性阿片受体拮抗剂纳洛酮(naloxone,Nx)、δ阿片受体拮抗剂ICI 154129和μ阿片受体拮抗剂CTAP,分组情况:空白对照组,LPS处理组,LPS与MENK(10-10mol·L^(-1))共处理组(LM组),LPS、MENK和阿片受体拮抗剂(Nx、CTAP和ICI 154129,均为10-10mol·L^(-1))共处理组以及LPS与阿片受体拮抗剂共处理组。检测细胞活性、细胞周期、细胞增殖相关因子基因表达以及Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路变化。结果表明:阿片受体拮抗剂单独或与LPS共处理细胞24 h,对细胞活力无影响(P>0.05)。与LM组相比,LPS、MENK和Nx共处理组(LMN组)以及LPS、MENK和ICI 154129共处理组(LMI组)的G1期相对细胞数升高(P<0.05),LMN组以及LPS、MENK和CTAP共处理组(LMC组)S期相对细胞数降低(P<0.05)。与LM组相比,LMN组和LMI组细胞CCN2、TGFB1和TGFB3基因表达下调(P<0.01),LMC组细胞CCN2基因表达下调(P<0.01)。与LM组相比,LMN组cyclinD1和GSK-3β蛋白表达上调(P<0.05),LMI组细胞β-catenin和GSK-3β蛋白表达上调(P<0.01),LMC组细胞cyclinD1蛋白表达上调(P<0.05);与LM组相比,LMN组、LMI组和LMC组AKT磷酸化水平升高(P<0.05)。以上结果说明,μ阿片受体和δ阿片受体均参与MENK对BESC的促增殖作用。

亚精胺对人子宫内膜基质细胞自噬和炎症细胞因子表达的影响

目的:探讨克罗米芬(CC)对子宫内膜基质细胞(hEndoSCs)的损伤作用,并研究亚精胺对受损子宫内膜基质细胞自噬和炎症细胞因子表达的影响。方法:实验分为对照组、亚精胺组、克罗米芬组(CC组)、CC+亚精胺组。MTT法检测hEndoSCs与不同浓度CC或亚精胺共同孵育24 h后细胞的存活率;流式细胞技术检测4组细胞内活性氧(ROS)含量和细胞凋亡水平。Western blot检测自噬途径相关蛋白ULK1、p-ULK1、LC-3Ⅱ和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 3的表达。采用RT-qPCR检测IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达量。结果:与对照组相比,CC组细胞存活率下降,细胞凋亡率、ROS含量、Bax、Cleaved-caspase 3表达量升高,Bcl-2表达量降低,自噬相关蛋白p-ULK1、LC-3Ⅱ/Ⅰ水平降低,炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达升高(P<0.01)。与对照组相比,亚精胺组细胞的存活率无明显变化(P>0.05)。与CC组相比,CC+亚精胺组细胞存活率显著提高,细胞凋亡率、ROS含量、Bax和Cleaved-caspase 3表达量降低,Bcl-2表达量升高,自噬相关蛋白p-ULK1、LC-3Ⅱ/Ⅰ表达升高,炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-αmRNA表达降低(P<0.01)。结论:CC能够抑制子宫内膜基质细胞增殖,促进细胞凋亡,提高炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的转录水平。亚精胺可通过激活细胞自噬,降低CC损伤的子宫内膜基质细胞胞内ROS水平,提高细胞存活率,并抑制炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达。

人脐带间充质干细胞培养上清对米非司酮处理的人子宫内膜基质细胞存活、凋亡和子宫内膜容受性的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞培养上清(hUCMSCs-Sup)对米非司酮(Ms)处理的人子宫内膜基质细胞(hEndoSCs)增殖、凋亡和子宫内膜容受性的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:体外培养hEndoSCs,分为对照组和40、60、80及100μmol·L-1 Ms组,MTT法检测各组细胞存活率。hEndoSCs分为对照组、40μmol·L-1 Ms组和60μmol·L-1 Ms组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平并计算Bcl-2/Bax比值。hUCMSCs-Sup作用后,hEndoSCs分为对照组、Ms组、Ms+hUCMSCs-Sup组和Ms+hUCMSCs-Sup+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ(LC3B-Ⅰ)蛋白表达水平并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中子宫内膜容受性标志分子mRNA表达水平。结果:与对照组比较,40、60、80和100μmol·L-1 Ms组细胞存活率明显降低(P<0.05),且具有时间和剂量依赖性。与对照组比较,40和60μmol·L-1 Ms组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05)。hUCMSCs-Sup作用后,与对照组比较,Ms组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中同源框基因A10 (HOXA10)、白血病抑制因子(LIF)和整合素亚基β3 (ITGB3) mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与Ms组比较,Ms+hUCMSCs-Sup组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05),细胞中HOXA10、LIF和ITGb3 mRNA表达水平表达明显升高(P<0.05);与Ms+hUCMSCs-Sup组比较,Ms+hUCMSCs-Sup+3-MA组细胞存活率和细胞中LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显降低(P<0.05)。结论:hUCMSCs-Sup可提高Ms处理后hEndoSCs的存活率,降低其凋亡率,提高子宫内膜容受性,其机制可能与hUCMSCs-Sup激活hEndoSCs自噬有关。

miR-143-3p对人子宫内膜基质细胞增殖活性和炎性因子表达的影响

目的评估人脐带间充质干细胞外泌体(hUCMSC-Exos)对米非司酮诱导的子宫内膜基质细胞(hESCs)损伤的逆转作用,并筛选hUCMSC-Exos中发挥作用的microRNA。方法以米非司酮(mifepristone)、人脐带间充质干细胞来源外泌体(hHUCMSC-Exos)和miRNA单独或联合作用于子宫内膜基质细胞(hESCs),分为mifepristone组、mifepristone+hHUCMSC-Exos组、mifepristone+miRNA组,加入等量生理盐水的hESCs为对照组。分组干预处理后,MTT法检测hESCs存活率变化;流式细胞术检测hESCs凋亡率变化;实时荧光定量PCR实验检测hESCs中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达水平的影响。结果与对照组比较,随着米非司酮浓度的增加以及作用时间的延长,hESCs存活率下降(P<0.01)。与mifepristone组比较,加入hUCMSC-Exos可以提高hESCs的存活率、降低hESCs的凋亡率,减少hESCs炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达(P<0.01)。与mifepristone组比较,hESCs转染hUCMSC-Exos中相对表达量较高的10种microRNA(miR-143-3p、miR-181-5p、miR-127-3p、miR-423-3p、miR-222-3p、miR-7i-5p、miR-22-3p、miR-221-3p、miR-100-5p、miR-21-5p)后,miR-143-3p可以提高hESCs的存活率(P<0.01)。与mifepristone组比较,转染miR-143-3p降低hESCs的凋亡率、减少hESCs炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达(P<0.01)。结论hUCMSC-Exos通过miR-143-3p提高米非司酮损伤的子宫内膜基质细胞存活,降低凋亡发生以及炎性因子的释放。

慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1沉默调控子宫内膜基质细胞蜕膜化与自噬

目的探讨慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1(SF-1)沉默对人子宫内膜基质细胞(hESCs)蜕膜化进程的影响及机制。方法收集子宫内膜异位症(EM)患者与正常妊娠者的子宫内膜组织,通过Real-time PCR和免疫组织化学染色检测SF-1的差异表达情况。从正常妊娠者的子宫内膜组织中分离并鉴定hESCs,将hESCs分为对照组、雌二醇(E_(2))+孕酮(P4)组、短发夹RNA(shRNA,sh)-正常对照(NC)+E_(2)+P4组、sh-SF-1+E_(2)+P4组,进行对应处理后,倒置显微镜下观察hESCs形态变化,Real-time PCR和Western blotting分别检测细胞内人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)、泌乳素(PRL)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,流式细胞术测定细胞周期分布,免疫荧光染色观察细胞内自噬标记物微管相关蛋白轻链3(LC3)表达情况,Western blotting测定细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平。结果EM患者子宫内膜组织中SF-1 mRNA相对表达量和SF-1蛋白阳性率均高于正常妊娠者子宫内膜组织(P<0.05)。与sh-NC+E_(2)+P4组比较,sh-SF-1+E_(2)+P4组细胞多为长梭形,未见明显蜕膜化,IGFBP1、PRL的mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05),G_(0)/G_(1)期细胞比例显著减少而S期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞内LC3荧光表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05)。结论EM患者子宫内膜组织内SF-1表达升高,通过慢病毒载体介导的SF-1沉默能够抑制hESCs蜕膜化过程,该作用可能与调控细胞自噬水平相关。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨子宫内膜来源间充质干细胞抑制子宫内膜纤维化的机制

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路介导间质上皮转化(EMT)在子宫内膜来源间充质干细胞(eMSCs)抑制子宫内膜纤维化中的作用机制。方法将18只雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组和eMSCs组,每组6只。Sham组的大鼠在剖腹手术后不接受任何形式的子宫介入手术。Model组和eMSCs组建立子宫内粘连大鼠模型。eMSCs组在模型损伤后立即移植eMSCs细胞悬液进行治疗,总量为每子宫0.05 ml(2×107细胞/ml)。3周后收集单侧损伤子宫进行苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色。通过蛋白质印迹分析子宫内膜纤维化、EMT、Wnt/β-catenin通路蛋白表达。结果Model组大鼠宫腔结构破坏,腺体数量明显减少并积聚大量蓝色胶原纤维,但在eMSCs治疗后子宫内膜腺体数量显著增加,并且纤维化面积显著降低。与Sham组相比,Model组中I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平显著增加(P<0.05),但在eMSCs组中均显著减少(P<0.05)。在Model组中,N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达显著增加,而E-cadherin的表达减少。然而,在eMSCs组中,上述分子蛋白质的变化完全相反。与Sham组相比,Model组β-连环蛋白(β-catenin)和C-myc表达增加(P<0.05)。与Model组相比,eMSCs组中周期蛋白E(CyclinE)、β-catenin和C-myc表达增加(P<0.05)。结论eMSCs可以通过抑制EMT和子宫内膜纤维化来促进子宫内粘连大鼠子宫内膜修复,这种作用部分是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来实现。

PVT1通过TGF-β1/SMAD通路促进子宫内膜基质细胞过度纤维化的研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)浆细胞瘤多样异位基因1(PVT1)在调控子宫内膜基质细胞纤维化中的病理生理作用及分子机理。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人子宫内膜基质细胞(HESCs)中PVT1、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ、转化生长因子-β1(TGF-β1)、SMAD2及SMAD3的表达水平。结果PVT1过表达促进HESCs增殖(P<0.05),而PVT1沉默抑制HESCs增殖(P<0.05)。过表达PVT1在HESCs中上调胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白ⅢmRNA的表达(P<0.05),而PVT1被敲除时,胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白ⅢmRNA的表达水平被显著下调(P<0.05)。过表达PVT1在HESCs中可以进一步上调TGF-β1/SMAD信号相关基因(TGF-β1、SMAD2、SMAD3)的表达(P<0.05)。当PVT1被敲除时,TGF-β1/SMAD信号相关基因胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白ⅢmRNA的表达水平被显著下调(P<0.05)。PVT1可诱导HESCs上清液中TGF-β1的产生(P<0.05)。结论PVT1可通过TGF-β1/SMAD通路促进子宫内膜基质细胞过度纤维化而产生胶原蛋白。同时,PVT1可能是一个用于治疗子宫内膜粘连的新靶点。

lncRNA GAS6-AS1靶向调控IL-11对子宫内膜基质细胞向成纤维细胞分化的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异基因转录的反义RNA(GAS6-AS1)靶向调控白细胞介素11(IL-11)对子宫内膜基质细胞(ESCs)向成纤维细胞分化的影响。方法体外传代培养ESCs,取传3~6代、对数生长期、生长状态良好的ESCs,随机分为TGF-β_(1)未干预组和TGF-β_(1)干预组。TGF-β_(1)未干预组不予TGF-β_(1)干预,TGF-β_(1)干预组用无血清培养基饥饿培养后予TGF-β_(1)干预,收集细胞,采用RT-qPCR法检测lncRNA GAS6-AS1、IL-11及纤维化标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)mRNA表达。另取传3~6代、对数生长期、生长状态良好的ESCs,分别转染三条si-GAS6-AS1序列以及si-Control序列,采用RT-qPCR法验证转染效率。将转染si-GAS6-AS1的ESCs用无血清培养基饥饿培养后予TGF-β_(1)干预,收集细胞,采用Western blotting法检测IL-11、α-SMA、COL1A1蛋白表达,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果与TGF-β_(1)未干预组比较,TGF-β_(1)干预组lncRNA GAS6-AS1、IL-11、α-SMA、COL1A1 mRNA相对表达量均显著升高(P均<0.01)。转染si-GAS6-AS1-1、si-GAS6-AS1-2、si-GAS6-AS1-3及si-Control序列的ESCs GAS6-AS1 mRNA相对表达量分别为0.22±0.04、0.27±0.06、0.81±0.07、1.00±0.00。与转染si-Control序列的ESCs比较,转染si-GAS6-AS1-1、si-GAS6-AS1-2序列的ESCs GAS6-AS1 mRNA相对表达量显著降低(P均<0.01),而转染si-GAS6-AS1-3序列的ESCs GAS6-AS1 mRNA相对表达量降低不明显(P>0.05)。因此,选择si-GAS6-AS1-1、si-GAS6-AS1-2序列进行后续实验。与si-Control+TGF-β_(1)组比较,si-GAS6-AS1-1+TGF-β_(1)组和si-GAS6-AS1-2+TGF-β_(1)组IL-11、α-SMA、COL1A1蛋白相对表达量及细胞增殖活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高(P均<0.01)。结论lncRNA GAS6-AS1通过靶向调控IL-11表达抑制ESCs向成纤维细胞分化。

lncRNA HAND2-AS1通过调节miR-21表达对子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨子宫内膜异位症(EMT)患者子宫内膜组织中长链非编码RNAs(lncRNAs)HAND2-AS1对异位子宫内膜(EC)组织中子宫内膜基质细胞(ESCs)增殖、迁移和侵袭能力的影响,并阐明其可能机制。方法:收集30例EMT患者(EMT组)的EC组织和30例健康育龄女性(对照组)的子宫内膜组织,分离子宫内膜组织获取ESCs。采用脂质体转染法转染EMT患者EC组织的ESCs,并将ESCs分为pcDNA组(转染pcDNA空质粒)、HAND2-AS1组(转染HAND2-AS1过表达质粒)、mimic NC组(转染mimic NC)、miR-21 mimic组(转染miR-21 mimic)、pcDNA+mimic NC组(联合转染pcDNA和mimic NC)、HAND2-AS1+mimic NC组(联合转染HAND2-AS1过表达质粒和mimic NC)、pcDNA+miR-21 mimic组(联合转染pcDNA空质粒和miR-21 mimic)和HAND2-AS1+miR-21 mimic组(联合转染HAND2-AS1过表达质粒和miR-21 mimic),另设未转染的细胞为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象子宫内膜组织和ESCs中HAND2-AS1 mRNA和miR-21表达水平,采用Pearson相关系数分析其相关性。采用生物信息学软件Starbase预测lncRNA HAND2-AS1与miR-21的靶向作用关系,荧光素酶基因报告实验进行验证。CCK-8法检测各组ESCs增殖活性,Transwell小室实验检测ESCs的迁移和侵袭数。结果:2组研究对象年龄、体质量指数(BMI)和血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及催乳素(PRL)水平比较差异均无统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,EMT组患者血清中雌二醇(E2)水平升高(P<0.05),EMT组患者EC组织中HAND2-AS1 mRNA表达水平降低(P<0.05),miR-21表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,EMT组ESCs中HAND2-AS1 mRNA表达水平降低(P<0.05),miR-21表达水平明显升高(P<0.01)。Pearson相关系数分析,对照组研究对象HAND2-AS1与miR-21表达水平无明显相关性(r=0.34,P>0.05),EMT组患者ES组织中和ESCs中HAND2-AS1与miR-21表达水平呈负相关关系(r=-0.57,P<0.05)。RT-qPCR法检测,与空白对照组比较,HAND2-AS1组ESCs中HAND2-AS1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),miR-21 mimic组ESCs中miR-21表达水平明显升高(P<0.01),HAND2-AS1+mimic NC组ESCs中miR-21表达水平降低(P<0.05),pcDNA+miR-21 mimic组ESCs中miR-21表达水平明显升高(P<0.01);与pcDNA+miR-21 mimic组比较,HAND2-AS1+miR-21 mimic组ESCs中miR-21表达水平降低(P<0.05)。lncRNA HAND2-AS1与miR-21存在潜在结合位点;双荧光素酶基因报告实验,与mimic NC组比较,miR-21 mimic组HAND2-AS1-WT中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。与空白对照组比较,HAND2-AS1+mimic NC组ESCs增殖活性、迁移和侵袭数均明显降低(P<0.05或P<0.01),pcDNA+miR-21 mimic组ESCs增殖活性、迁移和侵袭数升高(P<0.05);与pcDNA+miR-21 mimic组比较,HAND2-AS1+miR-21 mimic组ESCs增殖活性、迁移和侵袭数均降低(P<0.05)。结论:HAND2-AS1在EMT患者EC组织和ESCs中表达明显降低,其可通过靶向抑制miR-21表达下调EC组织中ESCs的增殖、迁移和侵袭,从而参与EMT的发生发展。

间充质干细胞在子宫内膜异位症中的研究进展

子宫内膜异位症是一种常见的慢性妇科疾病,其发病机制至今尚未完全阐明。间充质干细胞是来源于中胚层的一类具有多向分化潜能的多能干细胞,可分化为多种组织和器官。子宫内膜间充质干细胞、经血源性间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带血间充质干细胞可从细胞增殖分化、异位迁移、血管生成、炎症反应及纤维化形成等方面参与子宫内膜异位症的发病,在疾病的进展中发挥着一定作用。间充质干细胞为阐明子宫内膜异位症的发病机制提供了新的思路,同时也或可成为治疗子宫内膜异位症的潜在方法。

孕酮对子宫蓄脓犬子宫内膜基质细胞增殖的影响

旨在研究子宫蓄脓对犬子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)增殖的影响及孕酮(progesterone,P_(4))的干预作用。收集健康犬和经腹部B超确诊患子宫蓄脓犬的子宫,采用胶原酶消化法分离ESCs,并通过细胞免疫荧光检测进行鉴定;采用CCK-8法检测培养不同时间后两种ESCs的细胞活力及孕酮作用的影响。结果显示,胶原酶消化法可分离获得高纯度的犬ESCs;将分离的ESCs培养24 h和48 h时,子宫蓄脓犬ESCs的细胞活力显著高于健康犬(P<0.01)。用0、5、15、30 ng/mL等不同浓度P_(4)处理两种ESCs,当作用24 h时,两种细胞的活力与相应的对照比均无显著变化(P>0.05);作用48 h时,30 ng/mL的P_(4)可显著促进健康犬ESCs的增殖(P<0.01),而对子宫蓄脓犬ESCs的增殖具有显著的抑制作用(P<0.05);作用72 h时,3种浓度P_(4)均显著促进健康犬ESCs的增殖(P<0.01),但对子宫蓄脓犬ESCs的增殖均无显著影响(P>0.05)。以上结果表明,子宫蓄脓犬ESCs的快速增殖可能与子宫内膜的囊性增生密切相关,P_(4)可促进健康犬ESCs的增殖,但在一定程度上抑制子宫蓄脓犬ESCs的增殖。

甲硫脑啡肽对脂多糖作用下奶牛子宫内膜基质细胞增殖的影响

为研究甲硫脑啡肽(met-enkephalin,MENK)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛子宫内膜基质细胞(bovine endometrial stromal cell,BESC)增殖的影响,采用CCK-8检测细胞增殖活性,细胞划痕试验观察细胞迁移率,流式细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测细胞增殖相关因子(VEGF、CTGF、TGF-β1、TGF-β3)m RNA的变化,Western-blot检测Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路蛋白的表达。结果显示,LPS将细胞的周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞增殖,显著抑制细胞迁移率和增殖相关因子表达(P<0.05),激活Wnt/β-catenin通路(P<0.05),抑制PI3K/AKT通路(P<0.05);而加入MENK后,细胞活性和迁移率无显著变化,Wnt/β-catenin和PI3K/AKT通路蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论:MENK可以促进LPS作用下BESC的增殖,可能是通过调控细胞周期、增殖相关因子及Wnt/β-catenin和PI3K/AKT相关通路发挥作用。

miR-151-3p在子宫内膜异位症组织中的表达及其对子宫内膜基质细胞迁移和侵袭的影响

目的分析miR-151-3p在子宫内膜异位症(EMS)患者子宫内膜组织中的表达水平及其对子宫内膜基质细胞(ESCs)迁移和侵袭的影响。方法收集87份EMS患者的在位子宫内膜组织(eEMS组)和异位子宫内膜组织(nEMS组),同时收集47份因子宫肌瘤等良性妇科疾病进行手术治疗的患者正常子宫内膜组织作为对照组,qRT-PCR法检测各组患者子宫内膜组织中miR-151-3p的表达水平。分离、鉴定、培养人ESCs细胞,再将miR-151-3p mimics、mimics NC、miR-151-3p inhibitors和inhibitors NC分别转染至ESCs细胞中,采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-151-3p表达水平;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭与迁移能力;Western blot检测各组细胞MMP-2和MMP-9以及上皮-间充质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin等蛋白表达水平。利用在线miRNA靶基因预测网站对miR-151-3p下游靶基因进行预测,并结合PPI分析筛选关键靶基因。结果eEMS组(0.79±0.21)和nEMS组(0.62±0.15)miR-151-3p表达水平均显著低于对照组(1.02±0.17),差异有统计学意义(P<0.05),其中nEMS组最低。miR-151-3p过表达可显著上调ESCs细胞中miR-151-3p表达水平,抑制细胞增殖及迁移和侵袭能力,并下调MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin等蛋白表达水平,上调E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05);而抑制miR-151-3p表达显著降低ESCs细胞中miR-151-3p表达水平,促进细胞增殖、迁移和侵袭,并上调MMP-2、MMP-9、N-cadherin和Vimentin等蛋白表达水平,降低E-cadherin蛋白表达水平(P<0.05)。通过数据库预测出miR-151-3p下游34个交集靶基因,结合PPI分析筛选出4个关键靶基因:RC3H1、AGO2、AGO3和FXR1。结论MiR-151-3p可能在EMS患者的nEMS组织中低表达,其过表达可抑制ESCs细胞的迁移和侵袭。

雌激素调控子宫内膜异位症基质细胞侵袭和迁移的机制研究

目的探讨雌激素调节长链非编码RNA-339(lncRNA-339)对子宫内膜异位症(EMs)基质细胞侵袭和迁移的作用机制。方法观察EMs子宫内膜中lncRNA-339的表达。用雌激素受体拮抗剂ICI、白细胞介素-1β(IL-1β)抑制剂ACZ885分别处理经雌二醇(E_(2))刺激的人子宫内膜基质细胞系ThESCs。另外,E_(2)处理条件下对ThESCs细胞进行过表达或沉默lncRNA-339,并且过表达lncRNA-339后用ACZ885处理ThESCs细胞。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA-339的水平。Western blot检测ThESCs中IL-1β的水平,Transwell法检测ThESCs细胞的迁移率和侵袭率。结果lncRNA-339在EMs子宫内膜中表达增加(P<0.05)。E_(2)或者过表达lncRNA-339都能促进ThESCs细胞中lncRNA-339和IL-1β的表达(P<0.05),促进细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。而当抑制E_(2)、沉默lncRNA-339及抑制IL-1β时,细胞迁移率和侵袭率降低(P<0.05),IL-1β的表达明显降低(P<0.05)。结论E_(2)刺激lncRNA-339表达升高,并通过上调IL-1β促进EMs基质细胞迁移与侵袭。

β-烟酰胺单核苷酸对反复着床失败患者子宫内膜基质细胞蜕膜化水平的影响

目的:探讨在体外受精-胚胎移植反复着床失败患者子宫内膜基质细胞中添加β-烟酰胺单核苷酸(β-NMN)对子宫内膜基质细胞蜕膜化水平的影响。方法:活检获得反复着床失败3例患者子宫内膜组织,酶消化分离体外培养后获得了三株原代子宫内膜基质细胞。根据培养过程中添加β-NMN和诱导蜕膜化情况分为实验组、对照组、空白组。实验组在子宫内膜基质细胞蜕膜化培养过程中添加β-NMN,对照组不添加β-NMN,无蜕膜化培养为空白组。比较3组细胞培养过程中蜕膜标志物泌乳素(PRL)和人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)的mRNA表达和分泌水平。结果:实验组PRL(2.38±0.10 ng/nl)、IGFBP-1(1.89±0.12 ng/nl)水平均高于对照组(1.19±0.17 ng/nl、0.99±0.20 ng/nl)(P<0.05),对照组与空白组相比无差异;定量PCR检测蜕膜前后细胞内PRL(15.82±12.92)和IGFBP-1(9.86±8.67)的mRNA表达量上升(P<0.05)。结论:反复着床失败患者子宫内膜基质细胞蜕膜化中添加β-NMN能够提高蜕膜化水平。

痛经宁汤联合西药治疗子宫内膜异位症对细胞外基质和血管形成的影响

目的探讨痛经宁汤联合西药治疗子宫内膜异位症(EMT)的疗效,以及其对细胞外基质和血管形成的影响。方法选取2021年1月至2022年6月该院收治的EMT患者136例,随机分为观察组和对照组,每组68例。对照组予以常规西药治疗,观察组在此基础上予以痛经宁汤。观察两组疗效和不良反应,以及治疗前后卵巢功能指标、子宫动脉血流参数、血清基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、血管内皮生长因子可溶性受体-1(sflt-1)水平的变化。结果观察组总有效率为95.59%,显著高于对照组的80.88%,差异有统计学意义(P<0.05),而两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前窦卵泡数、异位囊肿直径、卵巢体积、子宫动脉的搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、舒张末期流速(EDV)、收缩期最大流速(PSV)、TIMP-1、MMP-9、MCP-1和sflt-1水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),两组治疗后窦卵泡数、卵巢体积、PSV、EDV、TIMP-1和sflt-1水平均较治疗前明显增加/升高(P<0.05),与对照组比较,观察组增加/升高更为明显(P<0.05),而两组异位囊肿直径、PI、RI、MMP-9和MCP-1水平均较治疗前明显降低(P<0.05),与对照组比较,观察组降低更为明显(P<0.05)。结论痛经宁汤联合西药治疗EMT具有疗效显著、不良反应少等特点,其疗效可能与痛经宁汤能够调节细胞外基质平衡、抑制血管形成有关。

子宫内膜息肉组织中基质细胞衍生因子-1、信号转导与转录激活子1表达水平与患者息肉切除术后发生宫腔粘连的关系

目的探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、信号转导与转录激活子1(STAT1)在行子宫内膜息肉切除手术患者息肉组织中的变化,及其与息肉切除术后发生宫腔粘连的关系。方法选取2019年1月至2021年6月在琼海市人民医院行子宫内膜息肉切除手术的338例患者作为研究对象,收集术后切除的子宫内膜息肉组织,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法对组织中SDF-1、STAT1表达水平进行检测;术后进行随访,根据检查结果分为粘连组(发生宫腔粘连,n=101)和未粘连组(未发生宫腔粘连,n=237)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价子宫内膜息肉组织中SDF-1和STAT1水平对术后发生宫腔粘连的诊断价值;采用多因素Logistic回归分析法分析息肉切除术后发生宫腔粘连的影响因素。结果粘连组患者子宫内膜息肉组织中SDF-1、STAT1 mRNA的表达水平均低于未粘连组(P<0.05);Logistic回归分析结果显示,STAT1、SDF-1、孕次、剖宫产史、刮宫史、盆腔炎史、息肉直径均是影响息肉切除术后宫腔粘连发生的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线结果显示,STAT1、SDF-1水平预测子宫内膜息肉患者息肉切除术后发生宫腔粘连的曲线下面积分别为0.909、0.811,对应的灵敏度分别为84.16%、75.25%,特异度分别为87.76%、77.64%,二者联合预测的曲线下面积为0.959,灵敏度为96.04%,特异度为89.45%。结论与未发生宫腔粘连患者相比,发生宫腔粘连患者子宫内膜息肉组织中SDF-1、STAT1表达均降低,且二者是息肉切除术后发生宫腔粘连的独立危险因素,二者联合检测可用于预测术后宫腔粘连的发生。

鼠李糖乳杆菌GR-1缓解大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性反应

为明确鼠李糖乳杆菌GR-1(L.rhamnosus GR-1)在大肠杆菌感染原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)过程中调节炎性反应的机制,本试验将BEECs分为4个组,分别是对照组(加入5 mL培养基)、E.coli攻菌组(加入5 mL浓度为1×10^(5)CFU/mL大肠杆菌)、L.rhamnosus GR-1单独处理组(提前3 h加入5 mL浓度为1×10^(7)CFU/mL L.rhamnosus GR-1)和L.rhamnosus GR-1保护组(加入5 mL浓度为1×10^(7)CFU/mL L.rhamnosus GR-1孵育3 h后去掉上清液,再加入5 mL浓度为1×10^(5)CFU/mL大肠杆菌);采用光学显微镜观察E.coli对BEECs形态的损害情况,实时荧光定量PCR检测相关基因的转录水平,Western blot检测TLR2和NF-κB2的蛋白表达。结果显示,E.coli攻菌6 h后,与E.coli攻菌组相比,L.rhamnosus GR-1保护组BEECs形态保持完整,且TLR2、TLR4、TNF-αmRNA表达量极显著下调(P<0.01或P<0.001),TLR2和NF-κB2的蛋白水平也极显著下降(P<0.001)。结果表明,L.rhamnosus GR-1可能通过TLRs下调BEECs的炎性因子表达,从而缓解E.coli感染造成的奶牛子宫内膜上皮细胞损伤,为奶牛子宫内膜炎的防治提供数据参考。

自噬通量在小檗碱抑制奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡中的作用

为探究小檗碱对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)凋亡的调控机理,首先利用CCK8法确定添加药物的细胞毒性,然后将BEECs分为空白(C)组、脂多糖(LPS)组(1μg/mL)、小檗碱(BBR)组(BBR 10μmol/L+LPS 1μg/mL)、氯喹(CQ)组(CQ 20μmol/L+BBR 10μmol/L+LPS 1μg/mL),用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot检测BAX、BCL2、LC3II、P62蛋白表达量。结果显示:LPS组BEECs凋亡率和BAX/BCL2较空白组升高(P<0.01);BBR组细胞凋亡率和BAX/BCL2低于LPS组(P<0.01);CQ组细胞凋亡率高于其他3组(P<0.01),而BAX/BCL2与空白组差异不显著。LPS组BEECs表达P62高于空白组(P<0.01);BBR组与LPS组相比LC3II升高(P<0.05)、P62降低(P<0.01);CQ组LC3II高于其他3组(P<0.01),CQ组P62与空白组、BBR组差异显著而与LPS组差异不显著。说明LPS降低BEECs自噬通量,BBR使LPS降低的自噬通量升高,但BBR不能挽救CQ抑制的晚期自噬。结果表明,小檗碱通过提高自噬通量抑制脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡。

基底膜基因在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的探究基底膜基因在子宫内膜癌中的表达水平和临床意义及其预后模型的预测价值。方法从癌症基因组图谱数据库中获得子宫内膜癌的mRNA表达矩阵和临床数据,从既往研究中获得基底膜基因。基于差异基因进行单因素和多因素Cox回归分析,筛选预后基因,构建预后模型,并分析其与临床因素的关系。采用功能富集分析,分析差异基因的生物学功能和作用途径。采用荧光定量PCR,验证预后基因的表达情况。结果由ACHE、COL12A1、CD44组成的预后模型与临床因素显著相关。荧光定量PCR证明,ACHE和COL12A1 mRNA表达量在人子宫内膜上皮细胞和人子宫内膜癌细胞间存在显著差异(P<0.05)。结论基于3个基底膜基因构建的模型能较准确地预测子宫内膜癌患者的预后,并为临床治疗提供潜在靶点。