短链脂肪酸对奶牛瘤胃上皮细胞促炎因子、趋化因子和紧密连接蛋白表达量的影响

【目的】探究不同时间点短链脂肪酸(SCFAs)对奶牛瘤胃上皮细胞促炎因子、趋化因子和紧密连接蛋白表达量的影响.【方法】试验分4组,每组设3个重复,分别在各组瘤胃上皮细胞中添加20 mmol/L的短链脂肪酸,在添加短链脂肪酸0、2、5、8 h后收集细胞提取细胞总RNA.【结果】在添加SCFAs 8 h时,G-蛋白偶联受体41(GPR41)的表达量显著高于其它各组(P<0.05).添加SCFAs 2 h后IL-1β的表达量显著高于0 h组(P<0.05),8 h时IL-1β的表达量最高.添加SCFAs 5、8 h时,CXCL2的表达量显著高于0 h组(P<0.05);在培养2 h后CXCL8的表达量显著高于0 h组(P<0.05).添加SCFAs 2 h后,Claudin-1和Occludin的表达量显著高于0 h组,并且在2 h时表达量最高(P<0.05).【结论】短链脂肪酸能够提高瘤胃上皮细胞促炎因子、免疫趋化因子、紧密连接蛋白以及GPR41的表达量,从而证明短链脂肪酸可以增强瘤胃上皮的免疫机能.

不同浓度短链脂肪酸对奶牛瘤胃上皮细胞免疫反应、紧密连接蛋白和G-蛋白偶联受体41表达的影响

本试验旨在研究不同浓度短链脂肪酸(SCFAs)对奶牛瘤胃上皮细胞(BRECs)免疫反应、紧密连接蛋白和G-蛋白偶联受体41(GPR41)表达的影响以及GPR41与促炎症因子、趋化因子和紧密连接蛋白之间的关系。试验设计4个试验组,分别用20、50、100和150 mmol/L SCFAs培养BRECs 24 h后提取总RNA,每组3个重复。结果显示:1) SCFAs浓度为100和150 mmol/L SCFAs时,促炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA相对表达量显著高于SCFAs浓度为20和50 mmol/L时(P<0.05)。2)随着SCFAs浓度的增加,CXC趋化因子配体3(CXCL3)、CXC趋化因子配体5(CXCL5)和CXC趋化因子配体8(CXCL8)的mRNA相对表达量逐渐下调,以SCFAs浓度为150 mmol/L时最低。SCFAs浓度为100 mmol/L时,GPR41的mRNA相对表达量显著高于SCFAs浓度为20和50 mmol/L时(P<0.05)。3) SCFAs浓度为150 mmol/L时紧密连接蛋白闭合蛋白-1(Claudin-1)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量最低,且显著低于SCFAs浓度为20和50 mmol/L时(P<0.05)。4)相关性分析表明,GPR41的mRNA相对表达量与促炎症因子TNF-α的mRNA相对表达量呈显著正相关(P <0.05),与趋化因子CXCL3、CXCL5和CXCL8的mRNA相对表达量呈显著负相关(P<0.05),与紧密连接蛋白Claudin-1和ZO-1的mRNA相对表达量呈负相关趋势(0.05≤P<0.10)。综上所述,高浓度(100和150 mmol/L)SCFAs诱导BRECs的促炎症反应,抑制趋化因子表达和免疫反应,减少紧密连接蛋白的表达,破坏瘤胃上皮的屏障功能。

奶牛瘤胃上皮细胞分离培养与鉴定

在体外分离培养奶牛瘤胃上皮细胞,可为奶牛瘤胃生理功能和吸收机制研究和永生化奶牛瘤胃上皮细胞奠定基础。通过胰蛋白酶消化法从奶牛瘤胃组织中分离出瘤胃上皮细胞,并通过免疫细胞化学的方法检测细胞角蛋白,CCK-8检测细胞生长曲线,β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞的衰老以及细胞染色体核型分析来鉴定瘤胃上皮细胞。结果表明:1)利用胰蛋白酶消化法可以稳定的培养出瘤胃上皮细胞并且能够在体外传代大约5代;2)通过在显微镜下进行细胞形态的观察呈单层"岛屿状";3)在荧光显微镜下细胞角蛋白抗原能够发出绿色荧光;4)奶牛瘤胃上皮细胞传至第5代,β-半乳糖苷酶被染成蓝色,同时,细胞出现衰老和停滞生长;5)染色体核型分析表明奶牛瘤胃上皮细胞的染色体数为60条。研究发现通过酶消化奶牛瘤胃组织能够获得奶牛瘤胃上皮细胞,但只能传至5代。