奶牛神经肽Y基因的克隆及测序

根据GenBank中已公布的奶牛神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)基因序列设计引物,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),以犊牛丘脑组织cDNA为模板,扩增出奶牛NPY的全基因序列,并对其进行了克隆、测序及序列分析。结果表明,试验所设计的引物可以成功用于扩增奶牛NPY的全基因序列,所扩增的序列与GenBank中已有序列的同源性达100%。

TAT-NPY融合蛋白的表达和生物活性检测

为了获得重组TAT-NPY融合蛋白,并研究其生物学活性。利用基因工程技术,从犊牛下丘脑组织中克隆得到神经肽Y基因序列,通过基因比对符合率为100%。同时,在牛神经肽Y基因序列中插入TAT蛋白基因序列,构建原核表达载体pGEX-3X-NPY-PTD,导入到BL21宿主菌中,进行原核表达,并对表达产物进行鉴定、表达条件优化和纯化,并且经过活性检测,融合蛋白对鸡胚血管生成起促进作用。结果表明:含有PTD结构的重组奶牛神经肽Y具有生物功能活性,为下一步的研究提供了物质基础。