抗奶牛衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将奶牛衣原体抗原免疫的 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠脾细胞与 Ｓ Ｐ２／ Ｏ 细胞在聚乙二醇作用下融合， 用间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 试验筛选， 以有限稀释法克隆３ 次， 得到６ 株分泌抗奶牛衣原体单克隆抗体（ Ｍｃ Ａｂ） ， 选择抗体分泌较高的 Ｇ２ 、 Ｆ２３ 、 Ａ 株进行详细的研究， 结果表明， 其核内染色体数为９０３５ 、９２１４ 、９４４２ ； 抗体属性为 Ｉｇ Ｇ２ａ 、 Ｉｇ Ｇ１ 、 Ｉｇ Ｍ， 用交叉 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法对３ 株 Ｍｃ Ａｂ 作特异性分析， 该 Ｍｃ Ａｂ 只与奶牛衣原体抗原， 猪衣原体抗原、羊衣原体抗原发生反应，而不与沙眼衣原体抗原、伪狂犬病抗原、布鲁氏杆菌抗原发生反应。

奶牛衣原体ompA基因的克隆及序列分析

以流产奶牛肝组织块内提取的基因组DNA为模板,根据GenBank数据库中的衣原体ompA基因序列设计2对引物,采用套式PCR进行扩增.PCR产物经纯化后连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后,进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:ompA基因的开放阅读框架全长1 170 bp,编码由389个氨基酸组成的多肽,理论分子质量为41.9 ku,等电点为7.61;SMART分析表明,ompA基因编码的氨基酸中,1-22位氨基酸为信号肽序列,另外还有7个保守的半胱氨酸残基形成二硫键;BLAST同源性分析表明,ompA基因的核苷酸序列与已发表的衣原体ompA序列的同源性均达到了98%以上.