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SV40增强子对奶牛β-酪蛋白启动子活性的影响
1
作者
钟宇
邵正
江黎明
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期175-179,187,共6页
该文采用重叠PCR方法在奶牛β-酪蛋白启动子(op0)中插入SV40增强子构建重组启动子op0-SV40enh,并分析其活性。首先PCR扩增op0 5′-端2.1 Kb片段、op0 3′-端1 Kb片段和SV40增强子序列,重叠PCR拼接三种片段得到插入SV40增强子的op0-SV40...
该文采用重叠PCR方法在奶牛β-酪蛋白启动子(op0)中插入SV40增强子构建重组启动子op0-SV40enh,并分析其活性。首先PCR扩增op0 5′-端2.1 Kb片段、op0 3′-端1 Kb片段和SV40增强子序列,重叠PCR拼接三种片段得到插入SV40增强子的op0-SV40enh启动子并测序鉴定后,酶切连接将其插入pGL3-Basic中的指定克隆位点,构建重组载体pGL3-op0-SV40enh。将重组载体pGL3-op0和pGL3-op0-SV40enh分别瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子op0和op0-SV40enh的相对活性。结果显示,重叠PCR拼接出长度为3.4 Kb的片段,测序结果与预期结果一致,表明成功构建了重组载体pGL3-op0-SV40enh;op0-SV40enh启动子的活性远高于op0启动子的活性,表明奶牛β-酪蛋白启动子中插入SV40增强子序列可显著提高其引导荧光素酶报告基因表达的活性。
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关键词
SV4
0
增强子
奶牛op0
双荧光素酶报告基因检测系统
原文传递
题名
SV40增强子对奶牛β-酪蛋白启动子活性的影响
1
作者
钟宇
邵正
江黎明
机构
广东医学院分析中心
广东医学院寄生虫学教研室
广东医学院生物化学与分子生物学研究所
出处
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期175-179,187,共6页
基金
广东省自然科学基金(批准号:5011595)资助的课题~~
文摘
该文采用重叠PCR方法在奶牛β-酪蛋白启动子(op0)中插入SV40增强子构建重组启动子op0-SV40enh,并分析其活性。首先PCR扩增op0 5′-端2.1 Kb片段、op0 3′-端1 Kb片段和SV40增强子序列,重叠PCR拼接三种片段得到插入SV40增强子的op0-SV40enh启动子并测序鉴定后,酶切连接将其插入pGL3-Basic中的指定克隆位点,构建重组载体pGL3-op0-SV40enh。将重组载体pGL3-op0和pGL3-op0-SV40enh分别瞬时转染乳腺癌MCF-7细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子op0和op0-SV40enh的相对活性。结果显示,重叠PCR拼接出长度为3.4 Kb的片段,测序结果与预期结果一致,表明成功构建了重组载体pGL3-op0-SV40enh;op0-SV40enh启动子的活性远高于op0启动子的活性,表明奶牛β-酪蛋白启动子中插入SV40增强子序列可显著提高其引导荧光素酶报告基因表达的活性。
关键词
SV4
0
增强子
奶牛op0
双荧光素酶报告基因检测系统
Keywords
SV4
0
enhancer
cow β--casein promoter
Dual-Luciferase Reporter Assay System
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SV40增强子对奶牛β-酪蛋白启动子活性的影响
钟宇
邵正
江黎明
《中国细胞生物学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
原文传递
已选择
0
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