妊娠期子宫内膜微生物群和免疫耐受的研究进展

子宫内膜的容受性是胚胎植入的关键,对胎儿抗原的免疫耐受性和炎症介质调节为基础。妊娠期免疫系统必须经历复杂的适应,同时保护母亲和胎儿免受病原体的侵害,同时抑制母体免疫反应,防止对同种异体胎儿的潜在排斥反应。对胎儿抗原的免疫耐受性和炎症介质调节为基础。最近研究表明,子宫内膜微生物群可能在围孕期和怀孕后期以非常动态的方式与免疫系统相互作用,因此,生态失调可能导致不良妊娠结局。本综述总结了子宫微生物群、母体免疫反应以及临床生殖和产科结局之间的联系。

S1P受体激动剂FTY720干扰孕鼠体内DC分布从而诱导妊娠免疫耐受

目的探讨S1P受体激动剂FTY720在降低自然流产模型孕鼠胚胎丢失率进程中的作用及其可能的机制。方法以自然流产模型孕鼠为研究对象,观察腹腔注射FTY720对自然流产模型孕鼠胚胎丢失率的影响,RT-PCR检测DC表面S1PR的表达,流式细胞术及免疫组化检测孕鼠外周血及局部组织中DC数量、成熟度及其表面相应趋化因子CCL19及其受体CCR7的表达情况,趋化实验验证FTY720对DC细胞趋化能力的影响。结果 1)FTY720对正常妊娠模型孕鼠的胚胎丢失率无明显影响(P<0.05),过继转移FTY720能明显降低自然流产模型孕鼠的胚胎丢失率(P<0.05);2)DC表面存在S1P受体的广泛表达,S1P受体激动剂FTY720减少了DC表面趋化因子及其受体的表达(P<0.05),致使趋化至母胎界面DC的数量显著减少(P<0.05);3)FTY720对DC细胞的分化及凋亡率均无明显影响(P>0.05)。结论 FTY720可能通过下调DC表面趋化因子受体CCR7的表达而使趋化至母胎界面的DC数量减少,最终诱导母胎免疫耐受。

人类白细胞抗原-G和人类白细胞抗原-E在妊娠免疫耐受中的作用

人类白细胞抗原(HLA)-G、-E同属非经典主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ类分子,于母胎界面滋养层细胞高表达,在妊娠免疫耐受中发挥重要作用。HLA-G和HLA-E主要通过和自然杀伤(NK)细胞、T淋巴细胞表面抑制性CD94/NKG2C受体或激活性CD94/NKG2A受体结合,抑制或激活免疫细胞效应,维持正常妊娠免疫耐受。HLA-G和HLA-E基因结构及表达异常可能与妊娠并发症相关,可作为判定正常妊娠和妊娠相关疾病指标。本文综述HLA-G和HLA-E结构和分布、与免疫细胞可能的作用机制以及相关临床应用,讨论其在维持母胎免疫耐受中的作用。

HLA系统与妊娠免疫耐受

保持抗原的差异性和多样性，对种族的生存和进化具有重要意义。在这一前提下，胎儿做为半异体移植物，母体必须对其产生免疫耐受，才能使得妊娠成功。ＨＬＡ－Ｇ抗原多态性最弱，这些分子在妊娠子宫内母体—胎儿交界面的充分表达，可以促进局部免疫耐受的产生，通过抑制ＮＫ细胞杀伤活性等机制，对妊娠起到保护作用。此外，胎儿所继承的父系经典ＨＬＡ抗原，可以诱导母体外周血免疫系统产生抗体，对妊娠进一步起到保护作用，并且对保证ＨＬＡ基因的遗传多样性具有重要意义。

Fas/FasL系统与妊娠免疫耐受

随着免疫学的飞速发展 ,妊娠免疫耐受机制的研究不断深入。在对Fas和FasL相互作用介导的细胞凋亡在免疫特赦部位及外周免疫耐受中所起的重要作用充分认识后 ,Fas FasL系统在妊娠免疫耐受中是否发挥作用日益引起学者的兴趣。研究表明 ,妊娠期 ,FasL在胎盘中高度表达 ,且体外实验证实滋养层细胞可诱导表达Fas的淋巴细胞发生凋亡 ,为妊娠免疫耐受现象的最终阐明提供了另一可能机制。

IL-35及其免疫调节作用与妊娠免疫耐受的关系

新型抑制性细胞因子的发现及生物学功能的研究有助于揭示抗原提呈细胞和机体免疫系统适应性(即免疫耐受)之间的密切关系。IL-35(白细胞介素-35)是新发现的一种独特的免疫抑制性细胞因子,属于IL-12细胞因子家族,主要由活化的调节性T细胞分泌,对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用,参与介导机体免疫耐受的形成。本文对IL-35的结构、受体、免疫抑制作用及其与妊娠免疫耐受形成之间的关系进行了综述。

T细胞亚群及其免疫分子介导的妊娠免疫耐受研究进展

生殖免疫学认为,人类胚胎形成过程类似同种异体移植,胚胎对于母体来说属于半同种异体抗原,能够正常分娩而不被母体排斥是母-胎界面母体和胚胎之间复杂对话的结果,其细胞及细胞因子之间构成相互作用的复杂网络,形成了特有的免疫耐受状态,即成功的妊娠实际是成功的妊娠免疫耐受。复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）

蜕膜组织中调节性T细胞的表达与妊娠期免疫耐受的关系

目的探讨蜕膜组织中调节性T细胞的表达与妊娠期免疫耐受的关系。方法选取2019年5月至2020年10月深圳市人民医院产科收治的原因不明复发性流产(URSA)患者80例作为URSA组,正常早孕人工流产终止妊娠的妇女50例作为对照组。采用流式细胞术(FCM)检测蜕膜组织中CD4+CD25+T细胞(Treg)和辅助性T细胞17(Th17)比例。采用ELISA检测白细胞介素‐17(IL‐17)、白细胞介素‐23(IL‐23)、白细胞介素‐10(IL‐10)、γ干扰素(IFN‐γ)表达。采用Pearson检验分析Treg表达与Th17细胞及巨噬细胞(Mφ)相关因子表达的关系。结果URSA组Th17细胞和CD4^(+)CD25^(+)均显著高于对照组(P<0.05),而CD4^(+)CD25^(bringht)、CD4^(+)CD25^(bringht)/CD4^(+)显著低于对照组(P<0.05);URSA组CD36显著高于对照组(P<0.05),而CD47、凝血酶敏感蛋白1(TSP1)显著低于对照组(P<0.05);URSA组IL‐17、IL‐23、IFN‐γ、IL‐6均显著高于对照组(P<0.05),而IL‐10显著低于对照组(P<0.05);Treg细胞的表达与IL‐17(r=0.54,P<0.05)、IL‐23(r=0.42,P<0.05)、IL‐10(r=-0.47,P<0.05)、IFN‐γ(r=0.51,P<0.05)、IL‐6(r=0.49,P<0.05)均呈现相关性。结论蜕膜组织中调节性T细胞的表达与妊娠期免疫耐受存在显著相关性,其机制可能与参与调控的Th17细胞和巨噬细胞活性有关。

Toll样受体3参与双链RNA对小鼠妊娠结局的影响

目的:探讨Toll样受体3(TLR3)与双链RNA(dsRNA)相互作用对BALB/c和NOD/SCID小鼠妊娠结局的影响。方法:比较经过和未经预先TLR3阻断条件下同基因妊娠的BALB/c和NOD/SCID小鼠在dsRNA刺激后的胚胎吸收率(RR),并采用流式细胞术检测CD45+TLR3+细胞和CD45+CD80+细胞在CD45+细胞群中、以及CD8α+CD80+细胞在CD8α+细胞群中的百分率。结果:在dsRNA刺激下BALB/c小鼠RR显著升高,而对NOD/SCID小鼠无显著影响。BALB/c小鼠胎盘CD45+细胞群中TLR3表达率升高,并伴有CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞百分率的升高。另可检测到CD45+细胞内IL-2表达率增高,而IL-10表达率下降;而在NOD/SCID模型中未观察到这种趋势。阻断TLR3能消除dsRNA对BALB/c小鼠胚胎排斥的诱导作用,并同时降低CD45+细胞群中CD80的表达率。结论:dsRNA与TLR3的相互作用可能参与CD45+CD80+细胞和CD8α+CD80+细胞的动员,随后母-胎界面IL-2表达增强,而IL-10表达减弱,最终导致胚胎被排斥。dsRNA引起的胚胎排斥过程可能需要具有正常功能的T细胞和NK细胞参与。

脂多糖诱发的同基因妊娠BALB/c和NOD/SCID小鼠早产模型

目的:研究脂多糖(LPS)诱发同基因妊娠BALB/c小鼠和非肥胖性糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠早产的机制。方法:在预先阻断或未阻断Toll样受体4(TLR4)的条件下采用LPS刺激,并比较各组BALB/c和NOD/SCID小鼠的早产率和胚胎死亡率。由于预实验显示预期的早产均发生于孕16d,因此,实验中在早产发生之前处死小鼠,收集每只孕鼠的胎盘。采用流式细胞术检测胎盘CD45+细胞表面TLR4、CD80和细胞内TNF-α的表达率。结果:采用LPS可诱发BALB/c小鼠早产,而NOD/SCID小鼠则对LPS的诱导有抵抗。经LPS刺激后,TLR4的表达在BALB/c和NOD/SCID小鼠均无显著改变,但是两组小鼠CD45+CD80+细胞的百分率均升高。相反,LPS刺激后仅BALB/c小鼠CD45+TNF-α+细胞的百分率升高,而NOD/SCID小鼠则否。通过预先阻断TLR4的表达可消除LPS对BALB/c小鼠CD80和TNF-α表达的影响,并显著降低LPS诱发的早产率。结论:虽然LPS未能改变TLR4的表达,但是二者相互作用,可激发CD45+CD80+细胞的动员,导致炎性细胞因子产生增多,并最终导致早产。BALB/c和NOD/SCID小鼠对LPS刺激的敏感性存在差异,提示NOD/SCID小鼠缺乏功能正常的T细胞和NK细胞,可能是这种小鼠对LPS诱发的早产有抵抗的原因之一。

新型免疫抑制剂FTY720通过阻断S1P信号通路诱导母胎免疫耐受的实验研究

目的·探讨新型免疫抑制剂FTY720诱导母胎免疫耐受的效应及机制,为临床治疗不明原因复发性自然流产提供实验依据。方法·以自然流产模型孕鼠为实验对象,观察腹腔注射FTY720对自然流产模型孕鼠胚胎丢失率及蜕膜组织1-磷酸鞘氨醇(S1P)表达的影响。构建S1P基因siRNA慢病毒载体及过表达S1P基因慢病毒载体,并转染小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs);观察过继转移2种慢病毒载体后FTY720对自然流产模型孕鼠胚胎丢失率的影响。结果·FTY720对正常妊娠模型孕鼠的胚胎丢失率无明显影响,腹腔注射FTY720能明显降低自然流产模型孕鼠的胚胎丢失率。自然流产模型孕鼠局部蜕膜组织存在S1P的低表达。过继转移S1PsiRNA慢病毒转染的DCs后,FTY720在一定程度上能降低自然流产模型孕鼠的胚胎丢失率,但效果不及过继转移S1P-siRNA慢病毒转染的DCs前;过继转移过表达S1P基因慢病毒转染DCs后,FTY720能显著降低自然流产模型孕鼠的胚胎丢失率,其效果较过继转移过表达S1P基因慢病毒转染DCs前更为明显。结论·FTY720安全性良好,其诱导妊娠免疫耐受可能与阻断S1P信号通路有关。

小鼠孕早期暴露量子点对妊娠结局和CD4^+ CD25^+ Treg细胞的影响

目的探讨小鼠孕早期暴露硫化锌量子点(QDs)对妊娠结局和外周血CD4^+CD25^+Treg细胞的影响。方法制备成年健康孕鼠并将其随机分为高剂量QDs组、低剂量QDs组和对照组,分别于妊娠第3~5天尾静脉注射0.50和0.05μmol/L QDs,以及生理盐水各100μl,于妊娠第15天观察妊娠结局,并采用流式细胞术分析孕鼠外周血CD4^+CD25^+Treg细胞比例。结果 QDs可引起流产、吸收胎和死胎等不良妊娠结局,高剂量QDs使胚胎平均着床数、胎鼠均重及胎盘均重低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且QDs暴露孕鼠外周血CD4^+CD25^+Treg细胞的比例低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小鼠孕早期暴露QDs具有胚胎毒性,且其毒性机制可能与降低外周血中CD4^+CD25^+Treg细胞比例、扰乱妊娠免疫耐受有关。

NOD/SCID孕鼠脾脏和胎盘CD45^+细胞内细胞因子的表达

目的研究NOD/SCID孕鼠胚胎吸收率(Resorption rate,RR)与母-胎界面局部免疫状况的关系。方法计算并比较孕13.5天同基因妊娠NOD/SCID×NOD/SCID小鼠和非免疫缺陷的BALB/c×BALB/c小鼠的RR,并采用4色流式细胞术检测NOD/SCID小鼠非孕期和孕13.5天脾脏和胎盘细胞内细胞因子的表达状况,以明确其与妊娠耐受相关的淋巴细胞功能亚群。结果NOD/SCID小鼠的RR与对照组BALB/c小鼠相比无显著差异。与此相应,虽然能够证实NOD/SCID小鼠具有多重免疫缺陷,但是孕期母-胎界面多种功能性细胞亚群的百分率发生自发性改变。结论NOD/SCID小鼠脾脏和胎盘某些细胞百分率的自发性改变可能对妊娠结局有利。

NOD/SCID小鼠胎盘DX5^+CD25^+细胞水平

为了研究胎盘DX5+CD25+细胞在维持母-胎耐受状态中的潜在作用。采用流式细胞术检测免疫功能正常的BALB/c和免疫缺陷的NOD/SCID小鼠外周血和胎盘DX5+CD25+细胞,评价这些细胞与小鼠妊娠预后的关系。结果:虽然NOD/SCID小鼠存在严重的免疫缺陷,但是其胚胎吸收率和平均每窝产仔数等生育力指标均基本正常,并且其孕13 d胎盘DX5+CD25+/DX5+细胞百分率与免疫功能正常小鼠相比无显著性差异,并均呈高百分率分布特征(约占DX5+细胞总数的90%)。NOD/SCID小鼠胎盘中高百分率的DX5+CD25+细胞可能是正常生育力预后的免疫学基础。

转录因子FOXP3与生殖研究进展

胎儿作为一种半同种异体移植物植入母体内并不被母体免疫系统排斥,而是产生免疫耐受。这种免疫耐受状态一但被打破,就可能导致流产的发生。FOXP3是X染色体上基因编码的叉头样转录因子家族成员,对于调节性T细胞的分化和发育具有重要作用。CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞是机体维持自身耐受的重要组成部分。大量研究表明,早孕期蜕膜组织和外周血中调节性T细胞数目增加,维持母胎免疫耐受。FOXP3表达下降与反复自然流产、不明原因不孕症以及反复植入失败等相关。CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞治疗已为自身免疫病和移植耐受提供了新的策略,并可能成为妊娠免疫治疗的一种新方法。本文主要就转录因子FOXP3的结构、功能、表达调控及其与生殖的关系作一综述。

重度子痫前期患者胎盘组织趋化因子及其受体的表达和意义

妊娠免疫耐受是正常妊娠时母体形成的一种特殊类型的外周免疫耐受，保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠，这有赖于免疫活性细胞的分化及功能调整。趋化因子（Chemokine，CK）及其受体不但直接参与了淋巴细胞的增殖和活化，还促进母胎界面T淋巴细胞及NK细胞的游走和活化，可影响一系列的细胞活动，包括粘附、血管牛成和扩散[1]。