骨形态发生蛋白-4对人始基卵泡的作用

【目的】观察骨形态发生蛋白-4(BMP-4)对人卵巢组织体外培养中始基卵泡存活和生长发育的影响。【方法】34例卵巢组织切成2mm×2mm×1mm皮质片,每例标本的皮质片均随机分成3组:研究组(BMP-4组)、对照组和非培养组,培养15d后行组织学检查、雌孕激素测定和凋亡分析。【结果】培养结束后对照组和研究组始基卵泡比例分别为58%±35%和48%±40%,低于非培养组(91%±9%),P<0.05;窦前卵泡比例分别为52%±40%和42%±35%,高于非培养组(9%±9%),P<0.05。研究组间质细胞凋亡指数和培养液孕激素浓度分别为(0.16±0.08)μg/L和(3.6±2.0)μg/L,低于对照组,对照组分别为(0.41±0.16)μg/L和(6±4)μg/L(P<0.05)。【结论】BMP-4可以促进始基卵泡向窦前卵泡转化,降低细胞凋亡率,抑制孕激素分泌,是卵泡生长发育过程中的促进因子。

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠始基卵泡募集及卵泡闭锁相关因子GDF-9表达的影响

目的:观察补肾调冲方对半乳糖致卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)大鼠始基卵泡募集及卵泡闭锁相关因子生长分化因子-9(Growth differentiation factor-9,GDF-9)表达的影响。方法:应用Real-time PCR法检测各组大鼠卵巢内GDF-9基因表达水平;采用Western Blot法检测各组大鼠卵巢内GDF-9蛋白表达水平。应用TUNEL法检测各组大鼠卵巢内细胞凋亡情况。结果:与空白组比较,模型组卵巢内的GDF-9 mRNA与蛋白表达水平明显减少;与模型组比较,治疗组卵巢内的GDF-9基因与蛋白表达明显增加。结论:补肾调冲方可通过调节GDF-9 mRNA与蛋白的表达,促进POF大鼠始基卵泡募集,促进生长卵泡发育,抑制卵泡异常闭锁,从而达到促进排卵,调节卵巢功能,治疗POF的目的。

补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠始基卵泡募集因子GDF-9、AMH表达的影响

目的:研究补肾调冲方对半乳糖致POF大鼠卵巢功能的调节,探讨补肾调冲方通过调控卵巢始基卵泡募集因子GDF-9及AMH调节卵巢功能及治疗POF的机制。方法:建立半乳糖致POF大鼠模型,将造模成功的POF大鼠随机分为模型组与治疗组,每组各20只,另设正常对照组。于PND80开始,治疗组大鼠每日灌服补肾调冲方水溶液,模型组及空白组大鼠每日灌服等体积生理盐水,共4周。实验结束后光镜下计数各组大鼠卵巢内各级卵泡数目,ELISA法检测各组大鼠血清FSH、LH及E2水平,Real-time PCR法检测各组大鼠卵巢内GDF-9及AMH mRNA表达水平。结果:①补肾调冲方可使POF大鼠动情周期趋于正常,并能明显降低血清FSH、LH水平(P<0.05),提高E2水平(P<0.05),从而改善POF大鼠血清高促性腺激素低雌激素状态;组织形态学检测结果显示治疗组大鼠卵巢体积较POF模型组增大,各级卵泡生长较好,颗粒细胞层次多,黄体数目明显增多;始基卵泡、窦前卵泡及窦状卵泡数目均较模型组增多,闭锁卵泡数目则明显减少。②与正常组比较,POF大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平均明显降低(P<0.01),而治疗组大鼠卵巢GDF-9及AMH mRNA水平较模型组明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:补肾调冲方治疗POF的作用机制之一可能是通过上调卵巢局部始基卵泡募集因子GDF-9及AMH的表达,促进卵泡的生长发育,抑制卵泡的过度耗竭与闭锁,恢复始基卵泡的正常募集状态,从而抑制卵巢功能的过早衰竭。

程序化冷冻对人始基卵泡与初级卵泡保存效果的影响

目的:探讨程序化冷冻对人卵巢组织内的始基卵泡与初级卵泡形态与凋亡的影响。方法:采用慢速程序化冷冻保存人的卵巢皮质,采用组织形态学、电镜及原位凋亡检测观察冷冻前后的始基与初级卵泡的形态学变化及凋亡情况。结果:冷冻前后人正常形态的始基卵泡比例无显著变化,而冷冻后形态正常的初级卵泡的比例较新鲜组显著下降(P<0.05)。冷冻后的初级卵泡内线粒体肿胀,胞浆及线粒体出现空泡化,而始基卵泡的超微结构保持良好。冷冻前后2种卵泡的凋亡率比较无差异。结论:程序化冷冻对人初级卵泡的形态损伤严重,对始基卵泡保存较好。

始基卵泡募集的调控机制

始基卵泡募集受卵巢内局部因素的调控。局部生长因子和细胞连接共同参与调节始基卵泡向初级卵泡生长转化。卵母细胞和颗粒细胞之间存在多种信息传递途径,协调细胞相互作用,是调控始基卵泡募集的关键。

调节始基卵泡募集的旁分泌因子

始基卵泡的募集受卵巢内旁分泌因子的调控,这些旁分泌因子包括KL、LIF、bFGF、GDF-9、BMPs、AMH等。它们在卵巢内的表达存在时空特异性,且相互调节形成复杂的网络结构,在调控始基卵泡的募集上起着重要作用。

始基卵泡激活调控的研究进展

以早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)为代表的卵巢功能减退性疾病发生的本质是卵巢中卵泡数量的减少或(和)卵泡质量的降低,严重影响女性的生殖健康。卵巢功能减退患者的卵巢中仍然存在部分始基卵泡(primordial follicles,PFs),激活剩余的PFs,使其发育为成熟卵泡,可作为改善卵巢功能的途径之一。PFs是卵泡发育的起点,其休眠和激活的调节是女性维持生育力的重要基础。因此,本文从分子水平探讨PFs激活相关因子及信号通路对卵巢功能的作用机制,重点围绕维持PFs休眠状态的叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、叉头框转录因子L2(forkhead box L2,FOXL2)、生殖系α因子(factor in the germline alpha,FIGLA)、LIM同源盒基因8(LIM homeobox 8,LHX8)、精卵发生特异性HLH转录因子1/2(spermatogenesis and oogenesis specific basi chelix-loop-helix transcription factor 1/2,SOHLH1/2)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物1B(cyclin-dependent kinase inhibitor 1B,CDKN1B)、促进PFs激活的新生儿卵巢同源盒蛋白(newborn ovary homeobox gene,NOBOX)、生长分化因子9(growth differentiation factor 9,GDF9)、骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF),以及参与PFs激活调控的PI3K/AKT/FOXO3a、mTOR、Hippo、TGF-β、AMPK、Notch、cAMP和Wnt等信号通路进行系统性总结和阐述,以期为卵巢功能减退性疾病的预防和治疗提供理论依据及潜在药物靶点。

雷帕霉素对小鼠始基卵泡激活及生长发育的作用研究

目的 研究哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)特异性抑制剂雷帕霉素对小鼠始基卵泡激活及生长发育的作用.方法 选取C57BL/6雌性小鼠40只,随机分为对照组(n=20,等体积生理盐水)和雷帕霉素处理组(n=20,雷帕霉素5 mg/kg),持续给药30 d后每组分别取7只小鼠,取卵巢组织行石蜡切片,HE染色观察组织形态学变化并进行卵泡分类计数,免疫组织化学法检测DDx4/MVH和Ki-67分子的表达水平,另提取卵巢组织蛋白,Western blotting法检测mTOR及其下游信号分子的表达水平.停用雷帕霉素8周后,对照组和雷帕霉素处理组分别取6只,行始基卵泡计数,免疫组织化学法检测抗苗勒管激素(AMH)和Ki-67分子的表达水平,另取7只,予孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)促排卵,24 h后取材行HE染色观察组织形态学变化.结果 雷帕霉素处理组小鼠始基卵泡数量较对照组显著增多(P=0.040),可见大量始基卵泡聚集,DDx4/MVH分子的表达增加;生长卵泡数量则明显减少(P=0.002),且Ki-67表达水平降低.停用雷帕霉素8周后,雷帕霉素处理组小鼠始基卵泡数量仍明显多于对照组,小鼠卵巢中可见各级生长卵泡,正常表达Ki-67和AMH.促排卵后,雷帕霉素处理组和对照组小鼠卵巢均可见大量成熟卵泡或黄体.Western blotting结果显示雷帕霉素处理组小鼠卵巢mTOR及其下游信号分子p70S6K、rpS6和eIF4B磷酸化水平显著低于对照组(P均<0.05),而总的分子水平未发生明显变化(P>0.05).结论 雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路分子磷酸化水平,抑制始基卵泡的激活,减缓始基卵泡向生长卵泡的转化速率,并抑制卵泡生长发育,从而保护卵泡储备功能.

冻融牛始基卵泡在体外三维培养的最适藻酸盐浓度

目的探讨冻融的牛始基卵泡在体外三维培养的最适藻酸钠浓度。方法玻璃化冷冻牛卵巢组织后复苏,加入Liberase DH酶消化,然后随机挑取始基卵泡,将其分别培养在二维的培养系统中(对照组,A组)和浓度分别为0.5%(B组)、1%(C组)、2%(D组)的藻酸钠三维培养系统中培养8 d,每隔1 d观察卵泡的生长情况,测量卵泡直径以及雌二醇(E_2)的分泌。结果随着培养天数增加,对照组中卵泡的完整性丧失,卵母细胞和颗粒细胞分离,而三维培养组中卵泡仍维持其完整性。体外培养8 d后,D组的卵泡平均直径为(57.7±8.5)μm,大于B组和C组(P<0.05);荧光染色后,D组的未受损卵泡率为68.4%,较B组、C组高,但仅B组、D组间有统计学差异(P<0.05);B组、C组、D组的E_2水平均随培养时间的延长而分泌增加,其中D组中的E_2水平(98.5±7.8)pg/mL最高,较B组、C组高,但仅B组、D组间有统计学差异(P<0.05)。结论藻酸钠三维培养系统较二维培养系统更适合始基卵泡的体外培养,体积浓度为2%的藻酸钠凝胶较低浓度的藻酸钠凝胶更适合始基卵泡的生长发育。

始基卵泡活化的分子机制研究进展

始基卵泡是哺乳动物整个生殖期限中各级卵泡及卵子发育的源头。始基卵泡的激活既需要卵母细胞内如PI3K-PTEN-AKT-FOXO3、mTORC1及p27Kip1-CDK体系等信号通路的正常激活,也需要一些卵母细胞特异性的分子如Nobox和Sohlh1等的参与,除此之外,始基卵泡周围的前颗粒细胞也发挥巨大作用,其首先在m TORC1等信号通路的调节下分化为立方形颗粒细胞,改变自身形态,启动始基卵泡活化,其次可通过分泌KITL与卵细胞表面KIT结合后激活调节卵细胞生长的关键通路——PI3K信号通路,最终导致卵母细胞生长及始基卵泡的正常激活。了解始基卵泡活化过程有助于阐明卵子发生的分子机制,为女性不孕提供新的治疗靶点。

女性卵巢组织体外激活机制与临床应用研究进展

始基卵泡的激活发育是女性配子成熟的关键。早发性卵巢功能不全(POI)患者由于体内卵泡休眠和发育调控失衡的现象,体内无法完成始基卵泡激活发育,导致女性不孕。卵巢组织体外激活(IVA)技术现已成为解决这类无法通过自体激活始基卵泡的患者获得自身成熟卵母细胞的新途径。在IVA的研究中,PI3K/PTEN/Akt和Hippo等信号通路成为当前研究焦点。本综述将对IVA机制的相关研究进展和临床应用研究进行阐述,为卵巢组织体外培养与激活的临床研究提供参考依据。

人卵巢组织冷冻保存的实验研究

目的 :探讨冷冻保存对人卵巢皮质内各级卵泡形态及对组织体外培养的影响。方法 :取手术切除的 30例患者的卵巢皮质 ,放入二甲基亚砜配制的冷冻保护液中 ,应用程序冷冻法保存于液氮内。冷冻前后取部分卵巢皮质行组织学检测 ;同时培养部分组织块观察上清中雌二醇分泌的变化。结果 :冷冻后存活的始基卵泡 ,与新鲜组比较无显著改变 (P >0 .0 5 ) ,初级卵泡的存活率显著下降 (P <0 .0 5 ) ;而冷冻保存不会明显降低始基卵泡与初级卵泡总的存活率 (P >0 .0 5 )。复温后卵巢组织中仅见 1枚形态正常的次级卵泡。冷冻后培养上清中雌二醇水平与新鲜组比较无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :程序冷冻法可以较好地保存人卵巢皮质内的始基卵泡 ,且不影响冷冻后卵巢组织的激素分泌。

激素检测对卵巢储备功能的评价及临床意义

卵巢储备功能是指卵巢皮质内始基卵泡生长发育至可受精卵母细胞的能力，包括卵巢皮质内存留的卵泡数量和卵子质量两方面。随着体外受精一胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）技术的广泛开展，

卵巢动脉收缩期峰速度与卵巢反应性关系的研究

目的:探讨卵巢动脉收缩期峰值血流速度(PSV)对卵巢反应性的预测价值。方法:185例排卵障碍拟行促排卵患者,阴道彩色B超测卵巢动脉PSV并以均数16.56cm/s分成两组;Ⅰ组>16.56cm/s89例,Ⅱ组≤16.56cm/s96例。两组均给予克罗米芬联合尿促性腺激素(HMG)和戊酸雌二醇治疗,比较两组月经第3天血清促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、睾酮(T)、始基卵泡数、绒毛膜促性腺激素(HCG)日平均卵泡E2水平、优势卵泡出现周期、>14mm卵泡数、子宫内膜的厚度、HMG用量和周期妊娠率。结果:两组月经第3天FSH、LH、E2、PRL、T和始基卵泡数差异无显著性(P>0.05);Ⅰ组HCG注射日平均卵泡E2水平、子宫内膜厚度、优势卵泡周期、>14mm卵泡数均高于Ⅱ组(P<0.05);Ⅰ组HMG的用量低于Ⅱ组(P<0.01),两组的妊娠率和防OHSS取消周期无明显差异(P>0.05)。结论:卵巢动脉PVS是有效预测卵巢反应性的指标。

卵巢储备的生理变化

卵巢储备通常指女性产生健康配子的能力，处于静息状态的始基卵泡是卵巢中卵泡发育成熟并提供健康配子的源泉，因此，卵巢中始基卵泡的数目反映着卵巢储备的规模。自胚胎期始基卵泡形成后，由于始基卵泡的激活、丢失、闭锁，卵巢中始基卵泡的数量不断减少，至绝经期则几乎耗竭，从而导致女性生育能力的丧失，卵巢功能缺失。因此，卵巢储备的生理变化直接决定女性卵巢功能，揭示其变化规律对于深入剖析卵巢衰老过程至关重要。因此，我们从始基卵泡的形成、退化及激活等方面，阐述卵巢储备的生理变化。

不同玻璃化冷冻载体对人卵巢组织冷冻效果的影响

目的:比较不同的玻璃化冷冻载体对人卵巢组织冷冻效果的影响,为人卵巢组织玻璃化冷冻方案的选择提供理论基础和实验参考依据。方法:预处理人卵巢皮质切成10 mm×1 mm×1 mm大小,随机分为新鲜组(A组)、针浸润玻璃化冷冻组(B组)、表面玻璃化冷冻组(C组)和直接覆盖玻璃化冷冻组(D组)。A组直接予以固定、组织切片及HE染色;B、C、D 3组采用不同玻璃化冷冻载体冷冻后,投入液氮保存2个月,采用快速复温法解冻后予以固定、切片及染色。行形态学分析,通过计算各组卵巢组织切片中正常形态始基卵泡率,比较各组冷冻效果。结果:4组共计数809个始基卵泡,其中正常形态始基卵泡率分别为:A组96.12%,B组88.14%,C组80.00%,D组81.25%。行玻璃化冷冻的3组卵巢组织正常形态始基卵泡率均明显小于A组(P<0.01);而B组、C组和D组正常形态始基卵泡率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:玻璃化冷冻后人卵巢组织正常形态始基卵泡率较新鲜组织下降,但仍能较好地保存人类卵巢组织,可用于人类卵巢组织的冷冻保存。

玻璃化法冷冻和慢速冷冻对人类卵巢组织的影响

目的比较玻璃化冷冻和慢速冷冻对人类卵巢组织的影响。方法采集19例人类卵巢组织,随机分成3组:玻璃化冷冻组、慢速程序冷冻组、新鲜对照组。对新鲜的和冻融后的卵巢皮质中的间质细胞和卵泡进行光学显微镜观察。同时,通过原位末端转移酶标记技术(TUNEL)实验观察卵泡凋亡的情况。结果慢速程序冷冻组异常卵巢间质细胞比率高于玻璃化冷冻组,差异有统计学意义(P<0.05)。各冷冻组的异常始基卵泡及初级卵泡比率均高于新鲜对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。冷冻组与对照组的卵泡凋亡率差别无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冷冻是人类卵巢组织适宜的冷冻保存方案。

卵巢对女性的重要性

卵巢作为女性的性腺,到底是个什么样的器官?一般认为所有雌性脊椎动物体内都有左右对称的两个卵巢,其功能就是产生卵子和分泌支持生殖活动的性激素等;而在无脊椎动物中,卵巢的形成却随着季节而变化,有些动物体内可同时存在卵巢和睾丸,如刺胞动物。人类卵巢的产生取决于胎儿的基因型和性染色体。

早发性卵巢功能不全的临床诊疗新进展

早发性卵巢功能不全(premature ovarian insuffi-ciency,POI)指女性40岁前由于卵泡数量耗竭或残存卵泡质量下降而出现卵巢功能丧失[1]。POI可引起多系统或器官如生殖、运动、心血管、泌尿、神经精神、消化系统等功能异常,给患者身体及心理带来显著负面影响。目前POI的病因及发病机制尚未完全阐明,随着研究的深入,POI发生过程中始基卵泡过度激活及卵泡异常闭锁的分子调控机制已取得部分进展。