HPLC法测定肠舒片中蔷薇酸和委陵菜酸

目的建立肠舒片(固公果根)中蔷薇酸和委陵菜酸的测定方法。方法采用HPLC法测定,色谱柱为PhenomenexLuna Su C18柱;流动相为水-甲醇(32∶68);体积流量1.0 mL/min;检测波长204 nm;柱温30℃;进样量20μL。结果蔷薇酸和委陵菜酸的标准曲线回归方程分别为:Y=6×106X+75 636(R2=0.999 9),Y=6×106X+510 504(R2=0.999 9),蔷薇酸和委陵菜酸分别在8.24～82.4μg和16.0～160.0μg范围内线性关系良好,蔷薇酸和委陵菜酸的平均回收率分别为103.1%、100.9%。不同批次肠舒片中蔷薇酸质量分数范围为0.254～0.312 mg/g,委陵菜酸质量分数范围为0.572～0.663 mg/g。结论所用方法简便、准确,可用于不同批次肠舒片的质量控制。

榅桲委陵菜酸、熊果酸和齐墩果酸等三萜酸类薄层色谱分离鉴别

目的建立榅桲果实和种子中委陵菜酸、熊果酸和齐墩果酸等三萜酸薄层色谱分离鉴定方法。方法以甲醇为溶剂,超声提取榅桲果实和种子,对展开系统、点样量、薄层板、显色剂等薄层色谱条件进行考察,确定最佳薄层鉴定条件。结果以点样量为4μL,将点于高效硅胶GF254板上的样品点浸入1%碘二氯甲烷溶液中预处理,以甲苯:乙酸乙酯:冰醋酸(体积比:14:4:0.5)为展开剂,10%硫酸乙醇溶液来显色,在366 nm下观察,委陵菜酸、熊果酸和齐墩果酸被同时检识,分离效果好。结论薄层色谱法分辨率高、操作简便、结果可靠,可用于榅桲属中三萜酸类化合物的分离和鉴别。

委陵菜酸调控PI3K/Akt/mTOR通路对肝星状细胞活化增殖的影响

目的 探讨委陵菜酸对人肝星状细胞(LX-2)细胞增殖、活化以及对PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响,分析其抗肝纤维化的作用机制。方法 用人血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激LX-2构建细胞模型。试剂盒检测细胞中LDH水平,MTT法检测LX-2细胞增殖,细胞划痕和集落生成实验观察LX-2细胞迁移和增殖情况,RT-qPCR检测Col-Ⅰ、Col-ⅢmRNA表达,Western blot检测Col-I、PI3K、AKT、mTOR等信号通路相关蛋白表达。结果 与正常组比较,PDGF-BB促进LX-2细胞增殖,增加Col-I mRNA和蛋白表达,提高PI3K、Akt、p70S6K、mTOR蛋白的磷酸化水平;与刺激组比较,委陵菜酸和LY294002均能抑制细胞增殖和迁移,减少Col-I蛋白表达、降低Col-Ⅰ和Col-ⅢmRNA表达,抑制细胞内PI3K、AKT、mTOR蛋白的磷酸化水平。结论 委陵菜酸能抑制LX-2细胞的活化、增殖,减少纤维化胶原的表达,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

HPLC测定委陵菜中委陵菜酸的含量

目的:建立高效液相色谱测定委陵菜药材中委陵菜酸含量的方法,为委陵菜的合理质量控制提供依据。方法:采用Agilent XDB-C_(18)色谱柱(4.6×150mm,5μm),流动相乙腈-水(60∶40,V∶V),检测波长206nm。结果:委陵菜酸在0.104~1.04mg·mL^(-1)范围内线性关系良好,r=0.9997(n=6),加样回收率101.3%,RSD=1.87%(n=6);3批委陵菜药材中委陵菜酸的含量为0.25~0.46mg·g^(-1)。结论:委陵菜酸为委陵菜药材中的特征活性成分,所建立的含测方法操作简便,结果可靠,可作为委陵菜药材质量控制的指标性成分。

高效液相色谱法同时测定榅桲籽中蔷薇酸和委陵菜酸的含量

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定榅桲籽中蔷薇酸和委陵菜酸含量的分析方法。方法样品经石油醚脱脂后,用甲醇超声提取,采用Kromasil 100-5-C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm)色谱柱分离,以甲醇-0.2%磷酸(70:30, V:V)作为流动相,流速1.0 mL/min,柱温30℃,进样体积为10μL,在210nm波长下进行检测。结果蔷薇酸和委陵菜酸分别在7.92~55.44μg/mL和3.76~18.8μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999,加样回收率为90.4%~98.2%(n=6)。结论该方法简便、快速、准确、重现性好,可用于榅桲籽中蔷薇酸和委陵菜酸的快速测定。

委陵菜酸改善前列腺癌的作用及机制研究

目的基于PPARβ/Twist1信号通路,探讨委陵菜酸干预前列腺癌的作用及相关分子机制。方法体外培养人前列腺癌细胞株(LNCaP),加入不同浓度(10、20、40μmol/L)委陵菜酸进行干预。划痕实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测细胞中PPARβ、Twist1、E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达情况。随后在BALB/c-nu裸鼠前列腺腺体背外侧包膜内注射LNCaP细胞悬液继而构建前列腺癌原位移植瘤模型,2周后灌胃不同浓度(0.75、1.5、3mg/kg)委陵菜酸进行治疗。取前列腺组织,测定药物治疗后瘤质量及瘤体积,HE染色法考察组织病理学改变,Western blot检测组织中PSA、PPARβ、Twist1、E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达情况。结果体外实验表明,委陵菜酸可有效抑制前列腺癌细胞迁移及浸润(P<0.01,P<0.05),WB检测结果显示:委陵菜酸可明显上调前列腺癌细胞中E-cadherin的表达水平(P<0.01,P<0.05),下调PPARβ、Twist1、N-cadherin及vimentin的表达水平(P<0.01,P<0.05)。体内实验表明,委陵菜酸可有效降低瘤质量及瘤体积(P<0.01,P<0.05)。结论委陵菜酸通过调控PPARβ/Twist1信号通路,抑制前列腺癌细胞的上皮细胞-间充质转化,从而有效发挥其抗前列腺癌迁移与侵袭的能力。

委陵菜酸通过阻断核因子κB(NF-κB)信号通路抑制LX-2人肝星状细胞增殖并促进其凋亡

目的研究委陵菜酸(TA)对核因子κB(NF-κB)信号通路的调控作用,分析其对LX-2人肝星状细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法将培养的LX-2细胞分为正常组、血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)刺激组(20 ng/mL)、1-吡咯烷二硫代羧酸铵盐(PDTC)组(PDGF-BB联合10 mmol/L PDTC)、TA处理组[PDGF-BB分别联合(35、25、15)μmol/LTA]。噻唑蓝(MTT)法检测TA对细胞增殖的影响,试剂盒检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和总胆红素(TBIL)的活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况。实时定量PCR检测核因子κBp65(NF-κB p65)mRNA水平,Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)、NF-κB p65抑制蛋白α(IκBα)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β(TGF-β)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的蛋白表达。结果与模型组相比,TA明显抑制LX-2细胞的活化增殖,降低α-SMA和TGF-β的蛋白表达;同时,TA处理可降低细胞中ASL、ALT和TBIL的水平,减少细胞损伤;TA明显诱导LX-2细胞凋亡,下调Bcl2表达同时上调BAX的表达。TA能明显抑制NF-κB p65 mRNA和蛋白表达,抑制NF-κB p65和IκBα蛋白的磷酸化。结论TA通过阻断NF-κB信号通路抑制肝星状细胞增殖,促进细胞凋亡。

勘误:委陵菜酸通过阻断核因子κB(NF-κB)信号通路抑制LX-2人肝星状细胞增殖并促进其凋亡

因本文作者失误,发表在《细胞与分子免疫学杂志》2021年第37卷第10期897-903页的“委陵菜酸通过阻断核因子κB(NF-κB)信号通路抑制LX-2人肝星状细胞增殖并促进其凋亡”论文中,图2错用了条带。在本实验开展过程中,我们同时培养了两株细胞(HSC-T6细胞和HSC-LX2细胞),投稿时由于疏忽.

委陵菜酸对幽门螺杆菌诱导GES-1细胞损伤的保护作用

目的探索委陵菜酸对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响。方法GES-1细胞与Hp共培养,给予委陵菜酸和NOD样受体家族3(NOD-like receptor family 3,NLRP3)抑制剂MCC950,考察各组细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率、集落形成、凋亡率、线粒体膜电位和活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化;采用ELISA法检测各组细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)、角质细胞趋化因子(keratinocyte chemokines,KC)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-Iβ(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-18、IL-4和IL-10水平;采用试剂盒检测各组细胞谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用qRT-PCR检测各组细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Bcl-2、Bcl-xl、Bax和BadmRNA表达情况;采用Western blotting法检测各组细胞TLR4/NLRP3/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和线粒体凋亡信号通路相关蛋白表达情况。结果委陵菜酸显著抑制Hp诱导的GES-1细胞LDH释放率(P<0.05、0.01),促进细胞集落形成(P<0.05、0.01),抑制细胞凋亡(P<0.05、0.01);升高细胞线粒体膜电位(P<0.01),降低ROS水平(P<0.01);降低上清液中MCP-1、KC、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18水平(P<0.01),升高IL-4和IL-10水平(P<0.01);升高细胞GSH-Px、SOD和CAT活性(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01);降低细胞TLR4、MyD88、Bax、Bad mRNA表达水平(P<0.01),升高Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达水平和Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bad(P<0.01);下调细胞TLR4、MyD88、磷酸化IκB激酶β(phosphorylated inhibitor kappa B kinaseβ,p-IKKβ)、p-IκBα、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1前体(pro-Caspase-1)、Caspase-1、硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP)、pro-IL-lβ、pro-IL-18、Bax、Bad、细胞色素C、凋亡酶激活因子-1(apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)、剪切型Caspase-9(cleaved Caspase-9)、cleaved Caspase-3和胞核p65蛋白表达水平(P<0.01),上调Bcl-2、Bcl-xl、pro-Caspase-9、pro-Caspase-3和胞质p65蛋白表达水平(P<0.01)。结论委陵菜酸对Hp诱导的GES-1细胞损伤具有明显保护作用,其作用机制可能与增强内源性抗氧化系统功能、抑制氧化应激、炎性反应及TLR4/NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路激活,从而减少线粒体介导的凋亡密切相关。

委陵菜酸药理活性研究现状

19α-羟基乌苏烷型三萜化合物委陵菜酸广泛存在于多种植物中,近年来有关委陵菜酸的药理活性研究也受到广泛关注。文章系统综述了委陵菜酸在抗氧化、肝脏保护、抗炎镇痛、抗菌、抗肿瘤、抗心脑血管系统疾病及糖尿病治疗等方面的研究进展。

委陵菜酸对大鼠肝星状细胞的抑制作用及其机制分析

目的：研究委陵菜酸（tormentic acid,TA）对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）活化增殖及转化生长因子-β（TGF-β）/Smads信号通路的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法：采用细胞活性毒性检测法（CCK-8）观察TA（0,50,60,70,80,90,100μmol·L^-1）作用于HSC-T6细胞24 h时的增殖情况,计算半数抑制率（IC50）并筛选出最适浓度。取对数生长期的HSC-T6细胞,分为正常组,刺激组,TA高、中、低剂量（40,20,10μmol·L^-1）组。利用姬姆萨染色液检测TA对细胞集落形成;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期的变化;免疫组化法检测Ⅲ型胶原蛋白（Col-Ⅲ）的表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Smad4,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。结果：TA能够抑制HSC-T6细胞的增殖,呈剂量依赖性,IC50为81.71μmol·L^-1;与正常组比较,TA呈剂量依赖性地抑制HSC-T6细胞集落的生成,同时,TA能明显地促进细胞凋亡和将细胞阻滞在G2期（P〈0.05,P〈0.01）;此外,还能降低Col-Ⅲ,α-SMA,Smad4蛋白表达（P〈0.05）。结论：委陵菜酸对肝星状细胞有明显的抑制作用,其机制可能与促进细胞凋亡、阻滞细胞周期,以及与阻断TGF-β/Smads通路有关。

RP-HPLC法测定固公果中蔷薇酸和委陵菜酸

目的:利用RP-HPLC方法测定彝族药物固公果中蔷薇酸、委陵菜酸的量。方法:采用UltimatexB-C18(美国Welch公司,150nm×4.6mm,5μm)色谱柱,以甲醇-1.5%磷酸水溶液(33︰67)为流动相,体积流量1.0mL/min,检测波长210nm。结果:固公果中蔷薇酸与委陵菜酸能得到很好的分离。测定线性范围分别为:蔷薇酸77.4～774.3μg/mL,r=0.9999;委陵菜酸54.7～546.9μg/mL,r=0.9999。蔷薇酸平均回收率为102.5%(n=9),委陵菜酸平均回收率为103.7%(n=9)。结论:该法便捷、灵敏、准确,重复性好,可以控制该药材的质量。

委陵菜酸对小鼠急性肝损伤保护作用

目的观察委陵菜酸(TA)对脂多糖(LPS)/D-半乳糖胺(D-Gal N)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能机制。方法雄性C57BL/6小鼠90只,随机分为对照组、模型组、阳性对照组及委陵菜酸低、中、高剂量组,各组小鼠分别灌胃给予受试物,连续3 d,末次给予受试物8 h后,除对照组外,其余小鼠腹腔注射LPS/D-Gal N,1.5 h后眼球取血,6 h后处死小鼠,取肝脏,观察肝组织损伤程度;采用试剂盒测定小鼠血清中门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-10水平;RT-PCR法检测TNF-α和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)基因表达;ELISA法测定NF-κB p65蛋白含量;Western blot法检测细胞色素C和Bcl-2含量;另外,取肝组织匀浆检测caspase-3、8、9活性。结果与对照组比较,模型组小鼠ALT、AST、TNF-α、NO含量[分别为(1 833.5±125.4)、(2 183.5±138.9)U/L、(656.8±64.7)pg/m L、(205.28±16.79)μmol/L]明显升高(P<0.05),肝脏中NF-κB p65表达[(228.9±14.2)pg/mg]升高、Bcl-2蛋白表达(0.18±0.03)下降、Caspase-3蛋白表达(275.3±14.7)升高(P<0.05);与模型组比较,委陵菜酸3 mg/kg组小鼠血清中ALT、AST、TNF-α、NO含量[分别为(991.3±70.2)、(968.5±68.6)U/L、(226.5±35.9)pg/m L、(133.69±9.79)μmol/L]明显降低(P<0.05)、肝脏中NF-κB p65表达[(151.2±6.5)pg/mg]降低、Bcl-2蛋白表达(0.35±0.02)升高、caspase-3蛋白表达(156.3±5.9)下降(P<0.05)。结论委陵菜酸可保护LPS/D-Gal N诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抑制NF-κB信号通路减轻炎症反应、抑制凋亡蛋白表达、继而减少细胞凋亡有关。

刺梨化学成分的研究

从刺梨(Rosa roxburghii Tratt. )中分得八种成分,其中六种鉴定为α-谷甾醇(R-4),euscaphic acid (R-5),委陵菜酸tormentic acid (R-6),原儿茶酸(R-10),以硬脂酸为主的脂肪酸部分(R-2)和以二十一烷酸为主的脂肪酸部分(R-3)。R-5和R-6互为一对五环三萜酸的差向异构体。

畲药搁公扭根中三萜类成分的含量测定及其最佳采收期考察

目的:建立HPLC法测定畲药搁公扭根中三萜类成分蔷薇酸及委陵菜酸含量的方法,并对其不同采收期及不同采集地的累积情况进行分析。方法:采用HPLC法测定,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液,流速为1.0 ml·min^(-1),柱温为30℃;检测波长为210 nm。根据不同月份含量测定结果确定最佳采收期。结果:搁公扭根中蔷薇酸和委陵菜酸分别在26.8~268.0μg·ml^(-1)(r=0.999 9),12.3~123.2μg·ml^(-1)(r=0.999 8)浓度范围内与峰面积呈良好线性关系,其平均加样回收率分别为100.28%(RSD=1.02%)、99.31%(RSD=1.16%)(n=6)。测定结果显示搁公扭根药材中三萜类成分3~6月及9~12月含量较高;不同采集地间的含量差异较大。结论:建立了搁公扭根中三萜类成分蔷薇酸和委陵菜酸的含量测定方法,该方法操作简便、准确、重现性好。以蔷薇酸和委陵菜酸总量为指标,确定9~12月为最佳采收期。

女贞子活性成分抗肝纤维化作用机制研究进展

肝纤维化为“肝病-肝纤维化-肝硬化/肝癌”的中间环节,存在于大部分肝病的发展过程中。有效逆转肝纤维化是防止其进一步发展的重要手段,但是目前还没有治疗肝纤维化的特效药,而女贞子Ligustri Lucidi Fructus作为一种天然药用植物,其活性成分具有抗肝纤维化功能。通过归纳梳理女贞子活性成分通过调控相关信号通路抗肝纤维化作用机制进行综述,为进一步对女贞子靶向治疗肝纤维化的研究提供理论参考。

一测多评法测定枇杷叶有效部位中6种三萜酸成分的量

目的建立枇杷叶有效部位中蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸和熊果酸的一测多评HPLC-ELSD测定方法。方法以熊果酸对照品为内参物,建立其与蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸的相对校正因子,采用校正因子计算这5种三萜酸成分的量,实现一测多评;同时用外标法测定有效部位中该6种成分的量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评的合理性、可行性和重复性。结果 15批有效部位中6种三萜酸成分量的计算值与实测值无显著性差异。结论该方法操作简便,测定结果准确,实现了只用一个对照品同步测定枇杷叶总三萜酸有效部位中6个成分的量,可为中药多指标成分质量评价模式提供参考。

HPLC-ELSD同时测定枇杷叶中6种三萜酸成分的含量

目的:建立HPLC-ELSD同时测定枇杷叶中6种三萜酸成分含量的方法。方法:采用Ultimate XB C18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,蒸发光散射检测器漂移管温度95℃,氮气流速2.5 L·min-1。结果:蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸分别在0.436～2.180,0.392～1.960,0.39～1.960,0.856～4.280,0.424～2.120,1.592～7.960μg,进样质量对数值与峰面积对数值呈良好线性关系;平均回收率分别为98.9%(RSD 3.8%),96.3%(RSD 2.7%),97.7%(RSD 2.6%),97.6%(RSD 3.2%),96.6%(RSD1.9%),102.5%(RSD 2.5%)。结论:建立的含量测定方法简便、准确、分离效果好、重复性好,为更好地控制枇杷叶药材质量提供试验依据。

HPLC-ELSD测定枇杷叶总三萜酸固体分散体片中6种三萜酸含量

目的 建立枇杷叶总三萜酸固体分散体片中6种三萜酸含量测定方法。方法 采用HPLC-ELSD,色谱条件为色谱柱Ultimate XB C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,蒸发光散射检测器漂移管温度100℃,载气流速2.5 L·min-1。结果 6种三萜酸蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸分别在0.583~5.832,0.366~3.664,0.335~3.352,0.533~5.326,0.257~2.570,0.602~6.018μg内峰面积积分值常用对数与进样量常用对数有良好的线性关系;平均回收率分别为101.83%、100.63%、103.42%、103.59%、104.07%、104.56%,RSD分别为1.37%、2.77%、2.03%、1.63%、1.42%、1.84%。结论 本实验所建立的含量测定方法简便、准确、分离效果好、重复性强,可用于枇杷叶总三萜酸固体分散体片的质量控制。

蛇含委陵菜化学成分研究

目的研究蛇含委陵菜Potentilla kleiniana的化学成分。方法经薄层色谱、硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和制备高效液相色谱进行分离纯化,通过理化数据测定、1H-NMR和13C-NMR等谱学技术进行结构鉴定。结果从蛇含委陵菜活性有效部位中分离出14个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、齐墩果酸(3)、熊果醇(4)、3α,19,24-三羟基-12-烯-28-乌苏酸(5)、委陵菜酸(6)、2α-羟基乌苏酸(7)、2α,3α,19α-三羟基-12烯-28-乌苏酸(8)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(9)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(10)、山柰酚-3-O-β-D-鼠李糖苷(11)、2α,3β,19α,23-四羟基-12-烯-28-齐墩果酸(12)、2α,3β,19α,23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸(13)、熊果酸(14)。结论化合物4、12、13为首次从该植物中分离得到。