姜黄素联合花色苷对睡眠剥夺合并动脉粥样硬化大鼠模型的影响

为研究姜黄素(curcumin, Cur)联合花色苷(anthocyanin, Ant)对睡眠剥夺(sleep deprivation, SD)合并动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)大鼠模型的保护作用及机制,将42只大鼠随机均分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、动脉粥样硬化+睡眠剥夺模型组、动脉粥样硬化+大平台对照组、姜黄素保护组、蓝莓花色苷保护组和姜黄素联合蓝莓花色苷保护组。除正常对照组外,其余6组高脂饲料喂养构建动脉粥样硬化模型,持续12周后,使用改良多平台水环境法对动脉粥样硬化+睡眠剥夺模型组及各保护组大鼠进行为期2周的睡眠剥夺处理。造模结束后对保护组大鼠进行对应的给药处理。随后,检测血清各项指标,并采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察心脏、胸主动脉变化,采用油红O染色观察胸主动脉弓部动脉粥样硬化斑块沉积情况,采用蛋白质印迹法检测大鼠心肌组织Bcl-2、胱天蛋白酶(caspase)-3和caspase-9的蛋白质表达水平。结果显示,与正常对照组相比,动脉粥样硬化模型组及动脉粥样硬化+睡眠剥夺模型组大鼠血清白细胞介素-6 (interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)水平以及空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)水平均显著升高(P<0.05),心肌细胞和主动脉内皮细胞大量紊乱,且存在大量炎症细胞浸润,出现显著动脉粥样硬化损伤;与动脉粥样硬化模型组相比,经睡眠剥夺处理后的大鼠损伤更为严重;经姜黄素和蓝莓花色苷单独保护后的大鼠,损伤程度与模型组相比有所改善;联合给药组的心脏和主动脉无明显损伤,病变不明显。此外,模型组大鼠心肌组织中caspase-3、caspase-9的表达水平明显高于正常对照组(P<0.05), Bcl-2的表达水平明显低于正常对照组(P<0.05),经药物干预后, caspase-3、caspase-9的表达水平明显下调(P<0.05), Bcl-2的表达水平则明显上调(P<0.05)。上述结果表明,睡眠剥夺会加重动脉粥样硬化大鼠的病情发展,姜黄素和花色苷均可修护睡眠剥夺合并动脉粥样硬化大鼠心肌细胞的损伤,且二者联合使用时的修护效果更佳。

姜黄素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖及氧化应激的影响

目的观察姜黄素（curcumin,Cur）对血管紧张素Ⅱ（AngII）诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及氧化应激的影响。方法原代培养大鼠VSMCs细胞,MTT法测定不同浓度Cur对AngⅡ诱导VSMCs增殖的影响。并分别设对照组、AngⅡ干预组、20μmol/L Cur组及AngⅡ联用不同浓度Cur（5、10、20μmol/L）组,实时定量PCR和Western blot测定各组细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、p47phox mRNA与蛋白的表达;亚硝酸盐含量重氮化反应吸光测定法（Greiss assay）测定细胞内一氧化氮（NO）的表达;DCFH-DA氧化法测定细胞内活性氧（ROS）含量;黄嘌呤氧化酶法检测各试验组细胞上清液中超氧化物歧化酶（SOD）活性;分光光度计检测谷胱甘肽过氧化物酶（Gpx）活性。采用p47phox特异性siRNA干扰VSMCs p47phox的表达,并深入探讨Cur抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖及氧化应激的机制。结果 MTT法观察到Cur在0~80μmol/L浓度范围内对细胞活力无显著影响;Cur（5、10、20μmol/L）可以有效抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖。同时,Cur可有效抑制AngⅡ诱导的NO、iNOS、p47phox、ROS的高表达并有效提高SOD和Gpx的活性,且具有浓度依赖性。采用p47phox特异性siRNA下调p47phox表达,AngⅡ诱导的VSMCs内ROS生成减少。结论 Cur具有抑制AngⅡ诱导VSMCs的增殖及氧化应激作用。这一作用与减少iNOS诱导的NO合成,下调p47phox的表达抑制ROS产生、提高SOD和Gpx的活性,进而抑制AngⅡ诱导的VSMCs内氧化应激反应有关。

姜黄素与博来霉素联用对A549细胞增殖抑制及细胞周期和凋亡的影响

目的:研究姜黄素和博来霉素联合应用对人肺泡Ⅱ型样细胞A549细胞增殖和细胞周期及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素抗博来霉素诱导的肺纤维化机制。方法:采用MTT法观察姜黄素和博来霉素对A549细胞的增殖抑制作用,并用流式检测细胞周期分布,凋亡试剂盒检测细胞凋亡。结果:姜黄素及博来霉素能抑制A549细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性。姜黄素(Cur)浓度为60μmol/L与博来霉素(BLM)2、4、6、8μg/mL联合24h的抑制率显著高于单用博来霉素组;姜黄素可引起体外培养的A549细胞G0/G1期阻滞;而且对G0/G1期阻滞随作用时间延长而增强。单用博来霉素刺激细胞,培养24h和48h,对细胞周期各个时期的影响没有统计学意义;姜黄素联合博来霉素诱导A549细胞凋亡,细胞核变的不规则皱缩,可见凋亡小体。结论:姜黄素联合博来霉素在体外对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,对细胞周期G0/G1期有显著阻滞作用,并可改变细胞凋亡;姜黄素和博来霉素联合应用可能通过改变肺泡上皮细胞细胞周期分布,并通过影响肺泡细胞凋亡从而起到抑制博来霉素治疗过程中肺纤维化的发生发展。

姜黄素减轻急性敌草快中毒肝损伤机制研究

目的探究姜黄素(CUR)对急性敌草快(DQ)中毒大鼠肝损伤的保护作用及其可能机制。方法将60只成年雄性Wistar大鼠分为6组:氯化钠注射液对照组,DQ染毒组,DQ染毒+低、中、高剂量CUR干预组(50、100、200 mg/kg),二甲基亚砜溶剂对照组(DQ+DMSO),每组10只大鼠。造模3 d后各组取大鼠心脏血及肝脏组织标本。采用化学比色法检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)水平,试剂盒检测肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝内核转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎性因子表达情况,Western blot法检测肝内核因子红细胞2相关因子2(Nrf 2)、NF-κB、血红素加氧酶1(HO-1)等蛋白表达情况。结果与对照组相比,DQ组大鼠血清ALT、AST、TBiL、MDA水平以及炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β均升高,而抗氧化酶SOD、CAT表达则下降,差异均有统计学意义(P<0.01);肝组织NF-κB、Nrf 2和HO-1蛋白表达亦见增加(P分别<0.05,<0.01)。与DQ组相比,中、高剂量CUR干预组大鼠血清ALT、AST、TBiL水平以及IL-6、IL-1β、TNF-α炎性因子含量和MDA水平均明显降低(P<0.01),SOD、CAT表达增加(P<0.01),NF-κB蛋白表达明显降低,Nrf 2、HO-1蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论炎症反应及氧化应激是急性DQ中毒肝损伤的重要机制,姜黄素可能通过抑制NF-κB及激活Nrf 2/HO-1信号通路,减轻中毒大鼠肝内炎症和氧化应激反应。

姜黄素羟丙基-β-环糊精包合物的制备及其性质研究

目的制备姜黄素-羟丙基-β-环糊精(CUR-HP-β-CD)包合物,并对其进行性质考察。方法采用搅拌-冷冻干燥法制备CUR-HP-β-CD包合物,以HPLC法测定姜黄素(CUR)的量;运用正交试验法,以包合率和包合物收率为综合指标,优化CUR-HP-β-CD包合物的制备工艺;采用紫外光谱、X射线衍射分析、熔点测定验证包合物;通过相溶解度法考察包合物中主客体分子之间的包合物物质的量之比,并对其油水分配系数、表观溶解度和水溶液的稳定性进行了考察。结果采用搅拌-冷冻干燥法,在温度40℃、CUR与羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)质量比为1∶5(mg/g)、包合时间3 h的条件下制备CUR-HP-β-CD包合物。经验证包合率达97%、包合物得率达99%,其冻干粉经鉴别已形成包合物,工艺优化成功。25℃下能形成物质的量之比为1∶1的包合物,相溶解度图呈AL型,表观溶解度35μg/mL。样品溶液在室温(25～30℃)自然放置50 d后测得包合物质量分数为95%,而CUR原料药则全部分解。结论以最佳工艺条件制备的CUR-HP-β-CD包合物重现性好,工艺稳定,能显著提高CUR的溶解度及稳定性。