姜黄素脂质体的制备及理化性质考察

目的：制备姜黄素脂质体，并进行理化性质初步研究。方法：选用薄膜法制备姜黄素脂质体，以单因素考察优选最佳制备工艺；观察脂质体粒径和形态特征，同时考察其贮存条件。结果：确定最佳工艺卵磷脂和胆固醇的比例为3：1，磷酸缓冲盐溶液的pH值为6．6，离子浓度为0．01moL·L^-1。姜黄素脂质体外观呈完整圆球形或椭圆形的球粒，粒径主要分布于140～425nm，表面电性为负，pH为（6．58±0．2），包封率为69．79％，最佳的贮存条件为3～5℃冷藏保存。结论：薄膜法制备姜黄素脂质体方法可行，其理化性质基本稳定，为进一步研究姜黄素在肿瘤治疗中的应用提供了理论基础。

注射用姜黄素脂质体的制备及其质量评价

目的:制备载药量高、包封率高、粒径均匀、稳定性好的注射用姜黄素脂质体,并对其质量进行评价。方法:采用薄膜分散高压均质法结合冻干工艺制备;考察脂质体的形态、粒径分布、zeta电位,用超滤离心法测定脂质体的包封率;通过加速稳定性实验对脂质体的稳定性进行考察;以自制的姜黄素注射液为参比制剂,比较了对小鼠肝癌瘤株H22和肺癌瘤株Lewis的抑制作用。结果:复溶后,姜黄素脂质体的平均粒径为120.1nm,zeta电位-50.5mV,包封率(95.45±0.86)%,载药量(4.1±0.1)%,加速试验中各项指标未发生明显变化,与姜黄素注射液相比,姜黄素脂质体对小鼠肝癌瘤株H22的抑瘤率可增加31.5%(P<0.01),对小鼠肺癌瘤株Lewis的抑瘤率可增加22.9%(P<0.01)。结论:姜黄素制成脂质体后,能提高稳定性,抑瘤率有显著的提高。

抗肝纤维化姜黄素脂质体的制备及初步稳定性考察

目的:制备姜黄素(Curcumin,Cur)脂质体并考察其包封率及稳定性。方法:采用逆相蒸发法制备Cur脂质体,葡聚糖凝胶柱层析法分离含药脂质体与游离药物并测定包封率;正交设计优选制备处方;离心加速实验与渗漏率的测定考察脂质体的稳定性。结果:所得优化处方为磷脂与药物的重量比60:1,磷脂与胆固醇的重量比4:1,pH6.5的磷酸盐缓冲液水合递质,超声时间为5min。以优化处方制得的脂质体平均包封率达95.06%。结论:选用逆相蒸发法优化Cur脂质体处方合理,工艺简便可行,包封率高,稳定性好。

姜黄素脂质体通过调节miRNA的表达改变乳腺癌细胞对阿霉素的化疗敏感性

目的初步研究姜黄素脂质体(CUR)在人乳腺癌细胞株MCF-7中对阿霉素(ADR)药物敏感性的影响,并分析其通过调控miRNA途径的作用机制。方法以人乳腺癌细胞株MCF-7为亲本细胞,采用低浓度逐步加量法诱导阿霉素耐药株MCF-7/ADR,利用薄膜法制备姜黄素脂质体,MTT法检测姜黄素脂质体增加MCF-7/ADR耐药株敏感性的性能及与阿霉素的协同增效作用,miRNA和mRNA微阵列分析筛选出差异表达的miRNA和mRNA,联合生物信息学预测软件和mRNA微阵列预测差异表达的miRNA可能的靶基因,应用荧光定量PCR验证部分微阵列结果。结果阿霉素与姜黄素脂质体对MCF-7/ADR的细胞抑制率有协同增效作用。芯片结果显示,与耐药株MCF-7/ADR细胞相比,miRNA和mRNA在亲本MCF-7/ADR细胞和经姜黄素脂质体处理后的MCF-7/ADR细胞中的表达差异明显,共发现67个差异表达的miRNA和323个差异表达的mRNA。根据预测软件和mRNA芯片结果发现20个共同靶基因。qPCR进一步验证hsa-miR-29b-1-5p,hsamiR-29b-3p,hsa-miR-6068,hsa-miR-6790-5p,has-miR-4417和DDIT4,EPAS1,VEGFA,RPS14,DCDC2在3株细胞中的表达与芯片结果基本一致。结论姜黄素脂质体能在一定程度上逆转人乳腺癌对阿霉素的耐药性。通过调控miRNA的表达来影响相关信号通路可能是姜黄素脂质体调节乳腺癌细胞对阿霉素药物敏感性的一条重要分子途径。

双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响研究

目的:考察双脱甲氧基姜黄素脂质体对体外培养人肺腺癌A549细胞增殖活性的影响。方法:将双脱甲氧基姜黄素脂质体作用于体外培养人肺腺癌A549细胞,分别应用形态学观察、MTT检测、流式细胞仪检测观察其生长形态、细胞周期等生物学特性变化。结果:显微镜下可见A549细胞形态明显改变;双脱甲氧基姜黄素脂质体对A549细胞增殖有抑制作用,其IC50为12.108μg/ml;流式细胞仪显示细胞周期阻滞在S期。结论:双脱甲氧基姜黄素脂质体可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,在肺腺癌治疗中有一定应用前景。

新型姜黄素脂质体的制备和初步稳定性考察

目的:制备包封率高、粒径小、稳定性好的新型姜黄素脂质体,并对其稳定性进行考察。方法:采用薄膜超声法制备新型姜黄素脂质体,以透射电镜(TEM)观察其形态,动态光散射(DIS)考察粒径分布,用超速离心法测定包封率,并考察其对温度、乙醇、酸碱的耐受性。结果:新型姜黄素脂质体粒径小,平均粒径97.08nm(多分散系数PDI为0.173),包封率为(99.37±0.89)%;稳定性试验证明新型姜黄素脂质体能够耐受热压灭菌(115℃,67kPa,30min)、最终浓度为40%的乙醇和最终浓度为1M的盐酸。结论:和传统脂质体相比,新型脂质体提高了姜黄素的包封率和稳定性,可以使药物更好地发挥作用。

姜黄素脂质体在大鼠体内药代动力学研究

目的研究姜黄素脂质体口服液在大鼠体内的药代动力学行为。并与游离姜黄素溶液进行比较,评价姜黄素脂质体药代动力学特征。方法大鼠灌胃给药,摘眼球取血,HPLC测定血药浓度;采用3P87药代软件模拟房室模型并计算药代动力学参数。结果当姜黄素的给药量1次接近300 mg/kg时,其药代动力学过程为非线性动力学过程。结论姜黄素脂质体口服液比姜黄素混悬液入血速度明显加快,有利于机体的吸收,并且消除减慢,血液中浓度高,在组织中分布广。

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:研究联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒(HC-NPs)对乳腺癌细胞的抑制作用及其机制。方法:制备HC-NPs,培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞。以对数生长期的细胞为研究对象。分成对照组和实验组,对照组及实验组分别予以脂质体纳米颗粒空载(NPs)、HC-NPs处理。测定细胞生长抑制率、移行愈合率,并测定相关蛋白Cyclin D1、Bcl-2、Bax、Survivin、MMP-9、p-STAT3的表达情况。结果:HC-NPs处理人乳腺癌MDA-MB-231后,与NPs对照组相比,可明显抑制细胞的增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。FCM法检测实验组凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期测定有显著差异,P均<0.05。HC-NPs作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞24h后,细胞周期停滞在G_2期。Transwell法检测到HC-NPs处理后,测定侵袭迁移,与对照组比较,HC-NPs组侵袭迁移能力明显低于对照组(P均<0.05)。Western blotting法测定相关蛋白p-STAT3、Cyclin D1、Bcl-2、Survivin、MMP-9的表达情况,HC-NPs组明显降低且低于对照组,而Bax明显增高且高于对照组,总STAT3水平无明显差异。结论:HC-NPs对乳腺癌细胞的抑制作用机制与下调JAK/STAT信号通路有关。

姜黄素脂质体软膏剂设计的初步研究

目的筛选制备姜黄素脂质体的最优处方,并将其制作成软膏剂,考察相应的指标。方法运用薄膜分散法制备姜黄素脂质体,采用单一变量法、正交试验设计、响应面BBD试验设计。结果通过考察姜黄素脂质体的成膜状态、粒径、包封率、载药量,确定使用薄膜分散法制备姜黄素脂质体的最优处方,制备W/O型软膏剂并通过耐寒、耐热及离心实验确定其稳定性,并通过透皮实验确定药物体外释放度及透皮效果。结论姜黄素脂质体最优处方的确定和软膏剂的制备为姜黄素的临床应用和研究奠定了基础,从而有效提高药物疗效。

超声和剪切联合超临界CO_(2)法制备姜黄素脂质体

目的:采用超声和剪切联合超临界CO_(2)法制备得到姜黄素脂质体。方法:采用单因素实验考察超声功率、剪切速度、大豆磷脂添加量、姜黄素添加量对姜黄素脂质体包封率和粒径大小的影响。结果:在压力20 MPa、温度45℃、剪切速度5000 r/min、超声功率45 W、大豆磷脂添加量为83%、姜黄素添加量为3%的条件下,得到包封率94.23%±0.22%,平均粒径171.13 nm±13.60 nm的均匀分布的球形微粒;姜黄素脂质体体外释放率比原料提高10倍。结论:超声和剪切联合超临界CO_(2)法制备的姜黄素脂质体包封率高,粒径小,无溶剂残留,操作简单,具有显著的应用优势。

去甲氧基姜黄素脂质体研究进展

混合物姜黄色素是一种天然食用色素,是世界卫生组织及其众多国家允许使用的一种食品添加剂,同时又具有广泛的药理活性。去甲氧基姜黄素为姜黄色素的单体之一,去甲氧基姜黄素脂质体可明显改善去甲氧基姜黄素,改善去甲氧基姜黄素的水溶性,提高生物利用度。

姜黄素脂质体对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用

目的探讨姜黄素（Cur）脂质体载药体系对前列腺癌PC-3细胞的作用及其机制。方法通过薄膜分散-超声法制备Cur脂质体；采用噻唑蓝（MTT）法检测其对细胞增殖的影响；采用荧光显微镜和高效液相色谱法（HPLC）考察PC-3细胞对Cur与Cur脂质体的摄取；采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）与Western blot法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2mRNA与蛋白水平的变化。结果（1）Cur脂质体与游离Cur比较，对PC-3细胞的抑制率更高（P〈0．05），使细胞形态变圆，并且具有浓度和时间依赖性，浓度为60μmol／L和100μmol／L的Cur和Cur脂质体组间比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。空白脂质体对PC-3细胞增殖无影响。（2）Cur脂质体可以促进PC-3细胞的药物摄取，并且细胞内的荧光强度持续时间长于游离Cur，具有一定的缓释作用；（3）Cur脂质体以浓度依赖性方式降低了PC-3细胞中MMP-2mRNA的表达和MMP-2蛋白的含量，游离Cur组20、60和100μmol／L组MMP-2蛋白表达率分别降低了15．30％、35．63％和44．80％，Cur脂质体组相应浓度组分别降低了19．40％、45．40％和55．10％。Cur脂质体抑制作用高于游离Cur对照组（P〈0．05）。结论Cur脂质体增加了前列腺癌PC-3细胞对含药脂质体的细胞摄取，进而增强了胞内药物的细胞毒性，并且通过下调MMP-2而抑制PC-3细胞的转移能力，该制剂具有一定的长效靶向作用，可以更好地发挥抗前列腺癌作用。

姜黄素-盐酸阿霉素复方脂质体的制备及评价

目的选择姜黄素(curcumin,Cur)和盐酸阿霉素(adriamycin,ADM)能产生显著协同作用的比例制成复方脂质体(compound liposomes,Lip),并对姜黄素-盐酸阿霉素复方脂质体的制剂学和生物学性质进行评价。方法采用MTT法测定药物体外对MCF-7/ADR细胞的抑制作用,应用金氏公式分析联合用药效果。采用薄膜分散-硫酸铵梯度法制备姜黄素-盐酸阿霉素复方脂质体。采用马尔文动态光散射粒径仪测定平均粒径和Zeta电位。通过葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)微柱离心去除游离药物,以HPLC法测定制剂和摄取样品中药物含量。结果姜黄素与盐酸阿霉素在质量浓度比为2:1和1:1时协同作用均较强且Q值无显著性差异。薄膜分散-硫酸铵梯度法制得的制剂符合2种药物质量浓度比例为2:1、1:1的要求。在制剂中包载的姜黄素与盐酸阿霉素质量浓度比例为2:1时,MCF-7/ADR细胞对盐酸阿霉素的摄取量显著增加。结论姜黄素与盐酸阿霉素质量浓度比为2:1时,呈显著的协同效应,按此比例制备的复方脂质体与Cur-ADM-Lip[ρ(Cur):ρ(ADM)=1:1]相比,对于MCF-7/ADR细胞有较大的细胞毒和较多的盐酸阿霉素摄取量。

脂质体姜黄素联合索拉非尼对人肝癌Huh7细胞的抑制作用

目的:探讨脂质体姜黄素联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞的抑制作用。方法:采用脂质体包埋技术制备脂质体姜黄素,并通过Nano-ZS激光粒度测定仪测定其粒径大小及Zeta电位。分别用浓度为10μmol/L脂质体姜黄素、0.1μmol/L索拉非尼单独及联合处理人肝癌Huh7细胞,应用CCK8检测和Ed U检测评价其对Huh7细胞增殖的影响,通过Transwell小室迁移实验检测其对Huh7细胞迁移能力的影响。结果:获得粒径为(118.7±13.6)nm、Zeta电位为(-9.8±1.1)m V的脂质体姜黄素,脂质体姜黄素单独使用可显著抑制Huh7细胞的增殖和迁移,脂质体姜黄素与索拉非尼联合使用可显著提高索拉非尼对Huh7细胞增殖与迁移的抑制能力。结论:脂质体姜黄素与索拉非尼联合使用可显著抑制肝癌Huh7细胞的增殖和迁移,是肝癌治疗的一种潜在策略。

脂质体二甲基姜黄素体内体外抑制大鼠脾淋巴细胞增殖并调节细胞周期

二甲基姜黄素是姜黄素的一种结构衍生物,具有抗炎抗肿瘤作用,具有缓释作用的新剂型脂质体二甲基姜黄素(Lipo-DiMC)有较好的生物利用度和代谢稳定性。淋巴细胞的过度增殖、细胞周期紊乱和细胞凋亡异常是类风湿疾病的病理特征。采用薄膜法制备小粒径(0.2μm)的Lipo-DiMC、建立胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠模型(正常组,CIA模型组和CIA+Lipo-DiMC治疗组)和体外细胞模型,探讨Lipo-DiMC对大鼠脾淋巴细胞增殖和淋巴细胞周期的影响。Lipo-DiMC关节腔注射治疗CIA大鼠(120μg/mL,每3 d关节腔注射治疗一次,每次400μL,共治疗6次)。在CIA发病进程中和Lipo-DiMC治疗过程中,对关节炎严重程度进行生理评估和指数评分;血常规检测外周血中各免疫细胞数量的变化。新鲜提取的大鼠脾淋巴细胞建立体外细胞模型,MTT法检测Lipo-DiMC对大鼠脾淋巴细胞增殖作用,细胞流式仪检测Lipo-DiMC对脾淋巴细胞周期作用。实验结果显示Lipo-DiMC在体内和体外均对大鼠脾淋巴细胞的细胞周期有调节作用。

姜黄素纳米脂质体对糖尿病心肌病的预防作用

目的探讨姜黄素纳米脂质体对糖尿病心肌病的预防作用。方法采用薄膜分散法制备姜黄素纳米脂质体并进行质量考察。随机将60只健康雄性SD大鼠分成正常对照组、模型对照组、空白纳米脂质体组及姜黄素纳米脂质体组,每组15只。除正常对照组外,其他各组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(70 mg·kg^(-1))建立糖尿病模型。模型稳定2周后,姜黄素纳米脂质体组尾静脉注射姜黄素纳米脂质体5 mg·kg^(-1);空白纳米脂质体组尾静脉注射等剂量空白纳米脂质体;模型对照组与正常对照组尾静脉注射等剂量0.9%氯化钠溶液。12周后超声心动图在体评价大鼠心功能,Masson胶原染色及TUNEL凋亡染色测定大鼠心肌细胞胶原容积分数(CVF)及凋亡指数。结果所制备的姜黄素纳米脂质体形态圆整,分散性好,包封率(88.37±1.21)%,稳定性好。超声心功能检测结果显示,与正常对照组比较,模型对照组与空白纳米脂质体组大鼠左心室舒张末内径(LVIDd)、左心室短轴缩短率(LVFS)显著下降(P<0.05),左心室后壁厚度(LVPW)显著升高(P<0.05);与模型对照组及空白纳米脂质体组比较,姜黄素纳米脂质体组大鼠干预12周后心肌LVIDd、LVFS显著升高(P<0.05),LVPW显著下降(P<0.05)。MASSON胶原染色及TUNEL凋亡染色结果显示,与正常对照组大鼠比较,模型对照组及空白纳米脂质体组大鼠心肌细胞CVF及凋亡指数显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,姜黄素纳米脂质体组大鼠心肌CVF及凋亡指数显著下降(P<0.05)。结论姜黄素纳米脂质体能够降低糖尿病模型大鼠心肌细胞纤维化及凋亡指数,改善糖尿病大鼠心功能。

脂质体姜黄素在Lewis肺癌中的抗肿瘤和抗血管作用

目的制备水溶性的脂质体姜黄素,研究其抗肿瘤和抗血管生成的作用。方法采用乙醇注入法制备脂质体姜黄素。MTT法检测脂质体姜黄素对小鼠肺癌细胞LL/2的抑制作用,流式细胞术检测脂质体姜黄素对细胞周期和细胞凋亡的影响。建立小鼠Lewis肺癌模型,检测脂质体姜黄素的抗肿瘤作用。采用藻酸盐实验检测脂质体姜黄素的抗血管生成作用。结果在体外,脂质体姜黄素可以抑制小鼠肺癌细胞LL/2的增殖,阻滞细胞周期,并引起细胞凋亡;在体内,脂质体姜黄素抑制了小鼠Lewis肿瘤的生长,藻酸盐实验验证了脂质体姜黄素能抑制肿瘤内的血管生成。结论脂质体姜黄素能抑制LL/2细胞的增殖并诱导细胞凋亡,通过静脉给药能有效抑制Lewis肺癌在小鼠体内的生长。

甘草次酸修饰姜黄素阳离子脂质体对肿瘤Walker256细胞的影响

目的:研究姜黄素及甘草次酸修饰姜黄素阳离子脂质体对Walker256细胞的影响。方法:不同浓度姜黄素与甘草次酸修饰姜黄素阳离子脂质体处理Walker256细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测细胞吸收、细胞周期变化情况;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot检测Wnt及β-catenin表达水平。结果:姜黄素和甘草次酸修饰姜黄素阳离子脂质体对肿瘤细胞Walker256均具有明显的抑制作用。与游离姜黄素相比,甘草次酸修饰姜黄素阳离子脂质体明显增强细胞对姜黄素的吸收,显著增强对Walker256细胞的增殖抑制、凋亡、细胞周期G2期的阻滞作用,明显下调Wnt及β-catenin的表达。结论:甘草次酸修饰姜黄素阳离子脂质体比游离姜黄素具有更强的抗肿瘤Walker256细胞的作用。

HC-NPs对RAW264.7-4T1共培养体系中乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探索联氨基姜黄素纳米脂质体(hydrazinocurcumin-loaded nanopaticles,HC-NPs)通过抑制STAT3(signal trannsduction and activators oftranscription-3)活化,对RAW264.7-4T1共培养体系中4T1细胞增殖及凋亡的影响。方法:以乳腺癌细胞—巨噬细胞共培养体系中的乳腺癌细胞4T1为研究对象,分PBS对照组和10%NPs对照组、10%HC-NPs处理组采用检测细胞形态学变化,台盼蓝染色计数细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期变化,Western blot检测STAT3、p-STAT3、c-MYC、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平。结果:刘氏染色发现经10%HC-NPs处理后,4T1细胞形态变圆,台盼蓝染色计数显示细胞存活率减低,且与对照组有显著性差异(P<0.05);流式细胞仪检测发现HC-NPs处理组细胞凋亡率为(24.21±2.37)%,细胞周期结果显示HC-NPs组处理的细胞主要阻滞在G_2/M期为(63.70±2.53)%,与对照组有显著性差异(P<0.05);Western blot检测显示,HC-NPs组4T1细胞的p-STAT3、c-MYC表达明显减少,Bcl-2/Bax比值下降,而总STAT3水平无明显变化。结论:HC-NP_s能通过抑制STAT3活化(p-STAF3),影响细胞增殖、凋亡相关基因,抑制共培养体系中乳腺癌细胞4T1的增殖,促进其凋亡。