姜黄素-盐酸阿霉素复方脂质体的制备及评价

目的选择姜黄素(curcumin,Cur)和盐酸阿霉素(adriamycin,ADM)能产生显著协同作用的比例制成复方脂质体(compound liposomes,Lip),并对姜黄素-盐酸阿霉素复方脂质体的制剂学和生物学性质进行评价。方法采用MTT法测定药物体外对MCF-7/ADR细胞的抑制作用,应用金氏公式分析联合用药效果。采用薄膜分散-硫酸铵梯度法制备姜黄素-盐酸阿霉素复方脂质体。采用马尔文动态光散射粒径仪测定平均粒径和Zeta电位。通过葡聚糖凝胶(Sephadex G-50)微柱离心去除游离药物,以HPLC法测定制剂和摄取样品中药物含量。结果姜黄素与盐酸阿霉素在质量浓度比为2:1和1:1时协同作用均较强且Q值无显著性差异。薄膜分散-硫酸铵梯度法制得的制剂符合2种药物质量浓度比例为2:1、1:1的要求。在制剂中包载的姜黄素与盐酸阿霉素质量浓度比例为2:1时,MCF-7/ADR细胞对盐酸阿霉素的摄取量显著增加。结论姜黄素与盐酸阿霉素质量浓度比为2:1时,呈显著的协同效应,按此比例制备的复方脂质体与Cur-ADM-Lip[ρ(Cur):ρ(ADM)=1:1]相比,对于MCF-7/ADR细胞有较大的细胞毒和较多的盐酸阿霉素摄取量。

盐酸表阿霉素-紫杉醇复方脂质体的制备

目的进行盐酸表阿霉素-紫杉醇复方脂质体的制备工艺研究并建立同时测定两药含量的高效液相色谱方法。方法采用薄膜分散-pH梯度法制备复方脂质体。Venusil MP C18色谱柱（250cm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈-甲醇-10mmol/L磷酸盐缓冲液（pH2.5）（36∶32∶32）;检测波长：227nm;流速：1.0ml/min。结果盐酸表阿霉素与紫杉醇出峰时间分别为4.2、14.8min;线性方程分别为Y=216300X-34525（r=0.9998,0.1~25μg/ml）,Y=161480X-84107（r=0.9998,0.3~75μg/ml）。盐酸表阿霉素和紫杉醇的回收率均在99%~101%范围内,日内和日间RSD均〈2%。制备的复方脂质体平均粒径162nm,盐酸表阿霉素与紫杉醇的含量分别为0.27、0.83mg/ml;包封率分别为98.6%、95.5%。结论本研究制备的复方脂质体粒径较小,包封率较高,建立的高效液相色谱法可以同时测定盐酸表阿霉素和紫杉醇的含量。

多糖锚定修饰紫杉醇-阿霉素复方脂质体的制备及体外评价

采用薄膜分散-硫酸铵梯度法制备了紫杉醇-阿霉素复方脂质体,并以N-十二烷基-O-羟乙基两亲性壳聚糖衍生物锚定修饰,透射电镜观察脂质体形态,动态光散射法测定粒径及表面电荷,数字酸度计及渗透压测定仪检测其p H及渗透压,HPLC法测定并计算两种药物包封率、渗漏稳定性、血浆稳定性及体外释放行为。所制备的多糖锚定修饰复方脂质体呈球形,粒径分布均匀,在150 nm左右,p H为5.3~6.1,渗透压为820~870 m Osm/kg,对两种药物皆具有较高的包封率(均大于90%),且和非多糖锚定修饰脂质体相比,药物泄漏率显著降低,血浆稳定性显著提高,缓释能力增强,且在肿瘤模拟p H环境比血液p H环境具有更快的释药速度。本研究制备的多糖修饰复方脂质体具有优良的药物负载、稳定性及缓释能力,在临床联合化疗具有一定的应用前景。

跨膜梯度法制备羟苯磺酸铵-盐酸阿霉素脂质体

目的:以2,5-二羟基苯磺酸铵形成脂质体内外水相跨膜梯度,主动装载盐酸阿霉素。方法:以2,5-二羟基苯磺酸铵溶液为水化介质制备空白脂质体。通过透析法建立空白脂质体跨膜梯度。超滤法结合离子对-高效液相色谱法(IP-HPLC)测定空白脂质体外水相2,5-二羟基苯磺酸铵浓度。将已建立梯度的空白脂质体与盐酸阿霉素溶液50℃孵育20min制备盐酸阿霉素脂质体。结果:脂质体平均粒径约为106.4nm,包封率为28.54%。结论:可以通过建立2,5-二羟基苯磺酸铵跨膜梯度来制备盐酸阿霉素脂质体。

基于近红外光响应性的盐酸阿霉素纳米脂质体的制备工艺优化

目的:建立盐酸阿霉素纳米脂质体药物含量的测定方法,并优化其制备工艺。方法:采用紫外-可见分光光度法测定盐酸阿霉素纳米脂质体的药物含量;采用薄膜分散法制备盐酸阿霉素纳米脂质体。以粒径、包封率、载药量为指标,以磷脂与药物质量比(mg/mg)、磷脂与胆固醇质量比(mg/mg)、超声时间(min)为因素,采用星点设计-响应面法优化制备工艺;采用近红外光照射考察盐酸阿霉素纳米脂质体的光热转换效应。结果:盐酸阿霉素检测质量浓度的线性范围为1.01～16.16μg/mL(r=0.999 7),精密度、稳定性、重复性均符合《中国药典》相关要求。最优制备工艺为磷脂与药物质量比13.30∶1(mg/mg)、磷脂与胆固醇质量比4.09∶1(mg/mg)、超声时间10 min。在此工艺条件下,所得的盐酸阿霉素纳米脂质体的粒径、载药量分别为(200.5±25.1)nm、(11.02±0.20)%,与预测值(196.3 nm、10.68%)的相对误差分别为1.82%、1.63%,实测值与预测值一致性良好。于808 nm近红外光照射下,盐酸阿霉素纳米脂质体具有浓度和时间依赖性的光热转换效应。结论:所建含量测定方法简便、准确度较好,优化所得工艺简单、可行。

聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇氯甲酸酯修饰盐酸阿霉素脂质体的制备及评价

本文评价了两亲性p H敏感聚合物聚(2-乙基-2-噁唑啉)-胆固醇氯甲酸酯[poly(2-ethyl-2-oxazoline)-cholesteryl methyl carbonate,PEOZ-CHMC]的缓冲能力。采用硫酸铵梯度法制备盐酸阿霉素脂质体(doxorubicin hydrochloride liposomes,DOX-L),后插入法制备PEOZ-CHMC和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(polyethylene glycol-distearoyl phosphatidyl ethanolamine,PEG-DSPE)修饰的盐酸阿霉素脂质体(PEOZ-DOX-L和PEG-DOX-L),对盐酸阿霉素脂质体的理化性质、体外释放、细胞抑制作用和细胞内定位情况进行评价。结果显示,PEOZ-CHMC对微酸环境有一定的缓冲能力。利用葡聚糖凝胶微柱离心法测定脂质体的包封率为(97.3±1.4)%,动态光散射法测定脂质体的粒径在120 nm左右,经PEG-DSPE和PEOZ-CHMC修饰后脂质体的包封率和粒径均无明显改变。Zeta电位分析仪结果显示3种脂质体表面电荷均为负值。通过透析实验考察制剂的体外释药行为,结果表明,在p H 7.4的释放介质中,PEOZ-DOX-L释放较为缓慢,而在p H 5.0时,PEOZ-DOX-L快速释药,显示出良好的p H敏感性。激光共聚焦实验表明核内体的微酸环境可以促进脂质体发生核内体逃逸,直接释放盐酸阿霉素进入细胞核,而DOX-L和PEG-DOX-L均无此作用。细胞抑制作用结果显示,PEOZ-DOX-L对细胞的抑制作用随p H降低而增强,但p H的降低对PEG-DOX-L和DOX-L的细胞抑制作用没有影响。因此PEOZ-CHMC构建的p H敏感脂质体能克服PEG链抑制脂质体的细胞摄取和妨碍p H敏感脂质体的核内体逃逸问题。

新型靶向性表阿霉素复方脂质体的研制及其对侵袭性乳腺癌细胞的抑制效应

目的:构建新型靶向性载药脂质体、并考察其对侵袭性乳腺癌细胞的抑制效应。方法:以叶酸类似物雷替曲塞为靶向分子,通过与长循环磷脂材料进行化学合成,制备针对乳腺癌叶酸受体的靶向性功能材料;并将之修饰到脂质体上,以表阿霉素为抗癌药、姜黄素为抗耐药调控剂,制备靶向性表阿霉素复方脂质体;对该脂质体进行理化表征;在人源性低侵袭性乳腺癌MCF-7细胞和高侵袭性乳腺癌MDA-MB-231细胞中,考察其摄取情况和抑制效应。结果:由MALDI-TOF-MS分析证实,成功的制备了DSPE-PEG_(2000)-raltitrexed靶向材料。构建的靶向性表阿霉素复方脂质体粒径约100 nm、分散均一、呈电中性。表阿霉素包封率约为95%,姜黄素包封率约为80%。流式细胞仪测定结果显示,相对于对照制剂,靶向性表阿霉素复方脂质体在2种癌细胞中摄取率均显著提高、对癌细胞抑制效果明显增强。结论:本研究合成了一种新的靶向性功能材料DSPE-PEG_(2000)-raltitrexed,构建的新型靶向性表阿霉素复方脂质体可以明显抑制乳腺癌增殖,表现出抗高侵袭性乳腺癌的潜能。