食用菌姬松茸多糖的分离纯化及结构分析

采用热水煮提、乙醇沉淀和离子交换-凝胶组合柱层析的方法,从食用菌姬松茸中提取分离纯化出了两种电荷和相对分子质量分布均一的姬松茸多糖级分WABM-N-a和WABM-A-b,对两种均一级分的结构进行了研究.结果表明:WABM-N-a级分以1,6-Galp构成主链骨架结构,同时存在较多的1,6-Glcp 1,3-Fucp结构和少量的1,4-Glcp,1,3-Glcp结构连接在Gal的O-3和/或O-4位上,且侧链上的Glc在O-3位上存在少量的分支.WABM-A-b级分为1,6-Glcp连接的葡聚糖结构,Glc在O-2,O-3和/或O-4位上可能均有分支,侧链结构可能为1,3-Glcp,1,4-Glcp,T-Glcp和1,6-Galp.

姬松茸多糖硫酸酯分子量测定方法的研究

利用氯磺酸-吡啶法制备姬松茸多糖硫酸酯,采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)对姬松茸多糖硫酸酯(ABPs)相对分子质量及其分布的测定方法进行了系统的研究。通过实验,得到HPGPC测定的适宜条件为:以0.0125NNaNO3为流动相,柱温35℃,流速0.6mL/min,进样浓度0.30%,进样体积50μL;同时实验结果表明,酯化多糖的测定与电解质的浓度有关。

姬松茸多糖增强免疫作用及急性毒性研究

目的:研究姬松茸多糖对小鼠免疫功能的调节作用及急性毒性作用。方法:通过观察姬松茸多糖对小鼠免疫器官的影响及对网状内皮系统廓清血流中惰性碳粒能力的影响,分析姬松茸多糖对哺乳动物的免疫调节作用;采用改进寇氏法研究姬松茸多糖的急性毒性。结果:1)姬松茸多糖(77~150 mg/kg,灌胃,连续7 d)能促进小鼠胸腺和脾脏的增殖,120 mg/kg的姬松茸多糖能使幼鼠胸腺增长13.1%,脾脏增长8.5%,使成年鼠胸腺增长4.0%,脾脏增长18.3%;150 mg/kg姬松茸多糖使小鼠碳粒吞噬指数提高21.7%,吞噬系数增加11.8%,表明姬松茸多糖对小鼠的免疫功能有促进作用。2)静脉注射姬松茸多糖的LD50为840.8 mg/kg,相当于成人一次静脉注射6.5 g,2周后存活小鼠体质量平均增长61.1%;灌胃给予姬松茸多糖15.0 g/kg,小鼠无一死亡,仅出现轻微的不适,该剂量相当于成人一日摄入115.4 g姬松茸多糖,相当于食入姬松茸881~1 265 g。结论:姬松茸多糖能增强小鼠的免疫调节功能,且急性毒性甚微。

超声波协同复合酶法提取姬松茸多糖

研究了超声波协同复合酶法提取姬松茸多糖的最佳工艺条件。采用均匀设计法分别考察不同时间、pH值、温度、酶浓度、固液比对纤维素酶、果胶酶以及木瓜蛋白酶酶解反应的影响,并研究三种酶联合使用时的加酶方式以及超声波协同提取时的最佳条件。结果表明,超声波协同复合酶法可显著提高姬松茸多糖的提取率,其最佳提取条件为:超声波作用20 min,分步加酶法(先加果胶酶:pH值3.8、温度50℃、时间90 min、加酶量7000 U/g、固液比1∶45;然后加纤维素酶:pH值3.6、温度75℃、时间120 min、加酶量150 U/g、固液比1∶45;最后加木瓜蛋白酶:pH值3.6、温度75℃、时间120 min、加酶量20000 U/g、固液比1∶45),多糖提取率达到14.51%。

姬松茸多糖中β-葡聚糖含量的酶法测定

探讨了酶法测定姬松茸多糖中 β 葡聚糖含量的方法 ,测得它的 β 葡聚糖含量在 3 7%～3 9%之间 ,标样的平均回收率为 86.8%。实验结果表明 ,此方法灵敏度高 ,测定结果可靠。

响应面优化盐析法姬松茸多糖脱蛋白研究

目的:探讨盐析法对姬松茸多糖脱蛋白的最佳工艺。方法:采用盐析法对姬松茸多糖脱蛋白,探讨在磁力搅拌器的影响下,其盐析温度、盐析转数、盐析时间及硫酸铵粉末饱和度对蛋白脱除率和多糖回收率的影响,以单因素实验为基础,通过响应曲面分析确定最佳工艺。结果:各因素对姬松茸多糖蛋白脱除率和多糖回收率的影响由大到小依次为:盐析温度>盐析转数>盐析时间。最佳工艺为:盐析温度为51℃,盐析转数为660 r/min,盐析时间为31 min,硫酸铵粉末饱和度为20%时,蛋白脱除率和多糖回收率分别为80.29%和79.59%。结论:盐析法可安全便捷、快速有效地脱除姬松茸多糖中的蛋白,同时能够得到较高的蛋白脱除率和多糖回收率。

口服姬松茸多糖对鸡疫苗免疫力及红细胞免疫功能影响的研究

本试验的目的在于研究姬松茸多糖对鸡疫苗免疫力和红细胞免疫功能的影响。方法:将试验鸡随机分为3组:对照组用新城疫Ⅳ冻干苗及新城疫灭活疫苗进行免疫;Ⅱ组和Ⅲ组同样进行免疫,同时分别灌服0.6%和3%的姬松茸多糖灭菌溶液1 ml/只,连续3 d。于免疫前及免疫后的第4、111、8 d,分别检测ND抗体效价及红细胞C3b受体花环率。结果:Ⅱ组和Ⅲ组的抗体水平在免疫后第4 d至第18 d一直处于上升趋势,且在免疫后第4 d和第18 d显著高于对照组(P<0.05),Ⅱ组和Ⅲ组间差异不显著;Ⅱ组在免疫后第4 d红细胞花环率显著高于对照组和Ⅲ组(P<0.05),而Ⅲ组在免疫后第11 d红细胞花环率显著高于对照组(P<0.05)。结论:姬松茸多糖具有提高鸡疫苗免疫力和红细胞免疫功能的作用,但未见明显的量效关系。

姬松茸多糖体外免疫及抗肿瘤作用初步研究

研究姬松茸子实体多糖 (FP)、菌丝体多糖 (MP)对静止和激活的脾淋巴细胞增殖作用 ,以及与淋巴细胞共培养上清对肿瘤细胞Daudi的抑制作用。结果表明 ,子实体多糖对静止脾淋巴细胞有明显的促进作用 ,10 0 μg/ml时刺激指数达 1.96;而菌丝体多糖 10 0 μg/ml刺激作用也达 1.5 6;与诱导物ConA一起作用时 ,激活的淋巴细胞刺激指数均增加。而且共培养上清对Daudi也有显著的抑制作用。

基于BP神经网络建立姬松茸多糖超滤分离模型

The non-linear relations exist between the temperature,pressure,and concentration with the flux and retention coefficient of Agaricus Blazei Murill polysaccharide solution during ultrafiltration(UF) separation.The models of UF were built by back-propagation algorithm based on Neural Network Toolbox(NNT)of MATLAB.The parameters of model were discussed,such as the number of hidden layer node,learning method and learning rate.The results show that the network system was 3×13×1,and there is a good agreement between experimental data and modeled data with prediction precision 1.67% and 3.75%.

姬松茸多糖对糖尿病大鼠血清炎症因子和免疫功能的影响

目的探讨姬松茸多糖对糖尿病(DM)大鼠血清炎症因子和免疫功能的影响。方法成年大鼠48只,按DM大鼠模型建模,按质量分层随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组12只,分别以生理盐水、240 mg/kg、300 mg/kg和375 mg/kg浓度姬松茸多糖灌胃给药,持续1 w,末次给药2 h后处死大鼠,对比观察四组一般情况、体重和血糖、脾脏指数、胸腺指数、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+、肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)和白细胞介素(IL)-6。结果中药各剂量组体重均较对照组显著增加,血糖显著降低(P<0.05),且随着给药剂量的增加,体重增加和血糖降低的更显著(P<0.05);中药各剂量组脾脏指数、胸腺指数均较对照组增加,其中中剂量组和高剂量组显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中药各剂量组CD4^+、CD8^+均较对照显著增加(P<0.05),且高剂量组CD4^+、CD8^+均显著高于低剂量组,中剂量组CD4+显著高于低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05);中药各剂量组炎症因子TNF-α、CRP和IL-6均较对照组显著降低(P<0.05),且随着给药剂量的增加,炎症因子TNF-α、CRP和IL-6降低越明显(P<0.05)。结论姬松茸多糖能改善DM大鼠临床症状,降低血糖和炎症反应,增强免疫功能。

低分子量姬松茸多糖对树突细胞Th1型免疫反应的影响

目的探讨姬松茸多糖(LMPAB)对树突细胞(DCs)Th1型免疫反应的影响。方法体外培养ICR小鼠骨髓来源的DCs。应用WST检测LMPAB增强DCs对T淋巴细胞的增殖作用,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LMPAB对DCs分泌的干扰素(IFN-)γ与白细胞介素(IL)-12的影响。结果与正常组(4.84±0.21)比较,LMPAB+卵白蛋白(OVA)组(6.59±0.19)可以增强DCs对T淋巴细胞的增殖作用(P<0.05);与正常组IL-12〔(32.31±2.45)pg/ml〕、IFN-γ〔(657.34±43.41)pg/ml〕比较,LMPAB+OVA组IL-12〔(45.89±1.03)pg/ml、IFN-γ(854.42±35.06)pg/ml〕明显升高(P<0.05)。结论 LMPAB可以增强DCs Th1型免疫反应,可能具有免疫佐剂的调节作用。

低分子姬松茸多糖对Bel-7402细胞端粒酶-RNA mRNA表达的影响

目的探讨低分子姬松茸多糖(a low molecular weight polysaccharide isolated from Agaricus blazei,LMPAB)对人肝癌细胞Bel-7402端粒酶-RNA mRNA表达的影响。方法5,10和20μg.ml-1浓度的LMPAB处理体外培养的Bel-7402细胞48 h后,采用原位杂交法检测端粒酶-RNAmRNA表达。结果LMPAB下调体外培养Bel-7402端粒酶-RNAmR-NA的表达,呈剂量依赖性。与空白对照组比较,端粒酶-RNA mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.01)。结论LMPAB具有下调端粒酶-RNA mRNA表达的作用,进而降低端粒酶活性,抑制肿瘤细胞生长。

姬松茸多糖抗肿瘤作用研究

目的:研究姬松茸多糖(ABP)对肝癌细胞生长的抑制作用。方法:采用MTT法检测ABP体外与肝癌细胞Bel-7402作用48小时的直接细胞毒作用、ABP与小鼠脾细胞共培养上清(ABP-SL-CM)体外与Bel-7402细胞作用48小时的抑制作用;用流式细胞仪分析诱导肿瘤细胞凋亡情况;腹腔注射给药观察对移植性H22小鼠腹水型肝癌模型的抑瘤率。结果:ABP体外无直接细胞毒作用;不同浓度的ABP-SL-CM体外对Bel-7402细胞生长均有抑制作用,其中低剂量组(ABP-SL-CM-L)作用最显著,抑制率为39.65%;诱导Bel-7402细胞凋亡率为21.68%,DNA直方图上可见到亚二倍体峰;体内实验对肿瘤的生长的抑瘤率为45.83%。结论:姬松茸多糖对肝癌细胞生长有一定的抑制作用,其作用机制不是直接的细胞毒作用,而是通过增强小鼠的细胞免疫功能诱导肿瘤细胞凋亡实现的。

姬松茸多糖抗肿瘤的实验研究

应用细胞培养技术 ,观察了姬松茸多糖对K5 6 2和HL - 6 0细胞系的影响。研究结果表明 ,实验组活细胞数、集落形成明显减少 ,荧光显微镜下所见凋亡细胞显著增加。提示姬松茸多糖具有抗肿瘤效果。为了探讨姬松茸多糖抗肿瘤的机理 ,本实验还应用反义寡聚脱氧核糖核酸技术 ,进一步观察了姬松茸多糖与人端粒酶反义核酸协同诱导HL - 6 0细胞系凋亡的作用 ,实验结果表明 ,姬松茸多糖与反义寡核苷酸联合使用 ,可促进HL- 6 0细胞凋亡。

姬松茸多糖对糖尿病大鼠氧自由基及炎症相关因子的影响

目的探讨姬松茸多糖对糖尿病大鼠肾脏氧自由基损伤及血清炎症相关因子的影响。方法将48只健康大鼠按糖尿病大鼠模型建模,随机分为对照组、8%姬松茸多糖组、4%姬松茸多糖组和2%姬松茸多糖组,每组12只。姬松茸多糖三组均按各自浓度皮下注射姬松茸多糖灭菌溶液0.15mL/只,对照组使用同体积生理盐水皮下注射。8周后,检测各组血糖,肾组织中丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、谷光甘肽过氧化酶(GSHPx)活性,同时检测炎症因子C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6。结果与对照组相比,姬松茸多糖治疗组血糖、肾脏MDA含量明显下降(P<0.05),而肾脏SOD、GSH-Px活性则显著上升(P<0.05);姬松茸多糖组炎症因子CRP、TNF-α和IL-6均较对照组显著降低(P<0.05)。结论姬松茸多糖可减轻糖尿病大鼠肾组织氧自由基损伤,改善血糖及炎症反应。

超声强化姬松茸多糖的提取及其机理分析

研究了姬松茸多糖的超声提取条件和强化机理。结果表明:超声提取能提高多糖的提取率0.21%、缩短提取时间0.5h、减小料液比1/3和降低提取液的粘度20%。其主要指标是水浸提2.5h,料液比为1∶20,超声功率为80W,处理时间为13min,多糖的提取率达9.82%。

姬松茸多糖增强免疫功能及抗疲劳作用的研究

探讨姬松茸多糖对小鼠免疫功能和抗疲劳作用的影响。成年小鼠40只随机分为对照组、姬松茸多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。分别以生理盐水、100、150、200 mg/kg浓度姬松茸多糖灌胃给药,持续10 d,对小鼠进行抗疲劳试验和相关免疫指标的测定。姬松茸多糖显著提高小鼠脾脏和胸腺指数(中剂量时P<0.05;高剂量时P<0.01);姬松茸多糖显著提高小鼠脾脏和胸腺指数,增加小鼠血清中IL-6和TNF-α的含量,提高CD4^+、CD8^+细胞计数;并能延长小鼠常压耐缺氧时间和负重游泳时间,提高小鼠血清中SOD活性,降低MDA含量。姬松茸多糖增强能够小鼠免疫功能和抗疲劳作用。

姬松茸多糖对缺氧-缺糖损伤的神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响

为研究姬松茸多糖对受损神经细胞线粒体膜电位和凋亡的影响,以大鼠海马神经细胞缺氧-缺糖再给氧为模型,以水提醇沉法自制姬松茸多糖浸膏处理细胞,应用四氮唑盐比色(MTT)法检测细胞线粒体活性,采用流式细胞仪检测凋亡细胞百分率和线粒体膜电位(MMP)的变化,并测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率。结果显示,与对照组相比,缺氧-缺糖5h后给氧,神经细胞凋亡率和LDH释放率极显著增加,并随给氧时间延长而增高,线粒体活性和MMP则极显著降低,并随给氧时间的延长而进一步下降;姬松茸多糖能明显降低细胞凋亡率和LDH释放率,提高线粒体活性和MMP,与缺氧-缺糖再给氧组相比均有显著差异。表明,姬松茸多糖可抑制缺氧-缺糖再给氧损伤所致的MMP降低,抑制细胞凋亡的发生,而对海马神经细胞发挥保护作用。