人脐带间充质干细胞影响子宫内膜异位症细胞的增殖及凋亡

背景:人脐带间充质干细胞可通过旁分泌机制调控细胞的生物学活性。目的:观察人脐带间充质干细胞对子宫内膜异位症细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外原代培养人异位子宫内膜细胞与人脐带间充质干细胞,实验组将脐带间充质干细胞和异位子宫内膜细胞按1×105/1×105比例接种于Transwell共培养板上下室,建立上下双层细胞非接触共培养体系,设1×105单独培养异位子宫内膜细胞为对照组。结果与结论:①MTT法检测异位子宫内膜细胞增殖:与对照组比较,实验组细胞增殖明显受到抑制(P<0.05),且具有时间依赖性(P<0.05)。②流式细胞仪检测异位子宫内膜细胞增殖凋亡:实验组凋亡细胞明显多于对照组(P<0.05),异位子宫内膜细胞由G1期进入S期细胞减少。③RT-PCR法检测异位子宫内膜细胞张力蛋白同源物基因mRNA的表达:实验组明显高于对照组。表明人脐带间充质干细胞可以通过旁分泌机制抑制人异位子宫内膜细胞的体外增殖并促进其凋亡,且可能是通过提高张力蛋白同源物基因基因表达来达到的。

子宫内膜异位症细胞表面特异性结合肽的筛选

目的:利用噬茵体7肽库筛选子宫内膜异位症细胞表面的特异性结合肽。方法:利用噬菌体展示技术体外快速差减筛选子宫内膜异位症异位内膜细胞和在位内膜细胞,经过连续5轮生物淘洗,随机挑选50个噬茵体克隆,通过ELISA筛选并进行DNA测序,再通过噬茵体竞争抑制试验来验证阳性噬菌体的亲和性。结果:(1)经过ELISA实验,其中OD_(450)值大于0.5的共有13个噬菌体克隆被选出,经DNA测序,13个噬菌体克隆中包含6个不同的氨基酸序列,其中5个克隆有共同序列为CGCACCCGCCTGCATACCCGC,其相应的氨基酸序列为RTRLHTR。(2)多肽RTRLHTR与子宫内膜异位症细胞的结合能力呈多肽剂量依赖性降低,而对照组多肽没有显示这种特异性结合活性。结论:噬茵体展示技术筛选的多肽RTRLHTR可望为子宫内膜异位症早期诊断及治疗提供新的方向。

腹壁子宫内膜异位症相关性透明细胞癌的诊治进展

腹壁子宫内膜异位症相关性透明细胞癌(abdominal wall endometriosis-associated clear cell carcinoma,AWECC)发病率低,侵袭性强,预后差,相关文献报道较少。AWECC多由腹壁子宫内膜异位症(abdominal wall endometriosis,AWE)恶变形成。随着剖宫产等进入宫腔的盆腔手术数量增加,AWE的发病率呈上升趋势,但其恶变机制尚不明确。AWECC缺乏特异性的临床特征,临床上易被误诊为AWE,确诊依赖于病理检查。AWECC的治疗多来源于临床医生的个人经验,差异性大,缺乏相应的指南推荐。临床上多采用以扩大腹壁肿瘤切除术为主的手术治疗,化疗和放疗能否使AWECC患者获益尚需进一步探讨。目前关于AWECC的研究多为个案报道,综合国内外文献,探讨AWECC的发病、诊断、治疗及预后,以期引起临床医生对疾病诊断的重视,为临床诊治和随访提供证据。

MiR-17-5p在子宫内膜异位症间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨miR-17-5p在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的影响。方法:MiRNA芯片筛选EMs异位子宫内膜组织中差异表达的miRNA,qRT-PCR验证EMs异位、在位子宫内膜组织和子宫肌瘤正常子宫内膜组织(对照组)中miR-17-5p的表达;提取以上各组组织中原代间质细胞,免疫荧光鉴定表面标志物;qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组间质细胞中miR-17-5p和MMP-2的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-17-5p和MMP-2的靶向关系;EMs异位间质细胞中转染miR-17-5p mimic和inhibitor,qRT-PCR、蛋白质印迹法和明胶酶谱法检测MMP-2的表达,克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwel l实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果:EMs异位子宫内膜组织中miR-17-5p、miR-200b、miR-106b、miR-15b、miR-141、miR-22显著下降,miR-202、miR-150、miR-365表达显著上升;与对照组相比,miR-17-5p在EMs异位、在位子宫内膜组织和间质细胞中表达均显著下降(P<0.05),而MMP-2在EMs异位、在位子宫内膜间质细胞中表达均显著升高(P<0.05);与阴性对照组(negative control,NC)相比,过表达miR-17-5p抑制MMP-2的表达并显著抑制细胞克隆形成数,细胞侵袭数及细胞迁移率(P<0.05),敲低miR-17-5p,结果相反。结论:MiR-17-5p在EMs间质细胞中表达下降,抑制miR-17-5p的表达能够促进MMP-2表达升高同时增强细胞增殖、侵袭和迁移能力。

子宫内膜异位症腹腔液IL-18水平的研究

目的检测子宫内膜异位症(EMs)患者血清和腹腔液白细胞介素-18(IL-18)浓度,探讨IL-18在EMs发病机制中的作用及意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(sandwichELISA)方法测定30例EMs患者和20例对照组血清和腹腔液IL-18浓度。结果血清IL-18浓度在EMs组和对照组之间差异无显著性意义,EMs组腹腔液IL-18浓度显著高于对照组,EMs合并不孕患者显著高于非不孕患者。结论 IL-18可能参与了EMs的发病,腹腔液IL-18浓度的升高可能是内异症形成和发展的重要因素之一。

趋化性细胞因子ENA-78与子宫内膜异位症的关系

目的:检测子宫内膜异位症(EM)患者腹腔液中趋化性细胞因子ENA-78水平及ENA-78在异位组织中的表达,探讨趋化性细胞因子ENA-78在EM发病机制中的作用。方法:用酶联免疫吸附试验测定EM患者(实验组)和子宫肌瘤患者(对照组)腹腔液中ENA-78水平;同时采用免疫组化方法检测异位内膜组织与在位内膜组织ENA-78的蛋白表达。结果:①实验组腹腔液ENA-78水平显著高于对照组(P<0.05),并随着疾病的严重程度而增高(P<0.05);②ENA-78表达于异位腺体细胞、间质细胞及巨噬细胞的胞浆中,表达强度随着疾病的严重程度而增强(P<0.05),不同月经周期中ENA-78表达的差异无统计学意义(P>0.05);③EM患者在位内膜ENA-78表达较对照组强(P<0.05)。结论:ENA-78是一种重要的炎性介质,具有趋化并活化炎性细胞活性及促进异位内膜病灶血管增生,在EM的发生和发展各个环节均发挥作用,并随着疾病进展表达增强,是反映EM侵袭生长的生物学指标。

Effect of Yikun Neiyi Wan on the Expression of Aromatase P450,COX-2,and ER Related Receptor in Endometrial Cells in Vitro from Patients with Endometriosis

To investigate the effect of Yikun Neiyi Wan （益坤内异丸YKNYW） and gestrinone on the expression of aromatase P450 （P450arom）, cyclo-oxygenase-2 （COX-2） and estrogen receptor （ER） in isolated ectopic and normal endometriat stroma cells in vitro. Methods： Digestion and serial filtration were used to isolate and culture the ectopic and eutopic endometrial cells from patients with chocolate cyst in virto Transformation of the cell morphology was observed in a inverted microscope. The effect of YKNYW on the expression of aromatase P450, cyclo-oxygenase-2, estrogen receptor in cultured endometriosis cells were detected by immunohistochemical method. Results： The expression levels of P450arom, COX-2 in glandular epithelium cells in vitro were decreased significantly by YKNYW compared with gestrinone （P〈0.05）. ER expression in mesenchymal cells of endometriosis was increased by YKNYW in the large and medium dosage groups compared with gestrinone. Conclusion： The mechanism by which YKNYW alleviates endometriosis pain is possibly related to the decrease in ectopic endometrial P450 arom and COX-2 expression in glandular epithelium, contrary to gestrinone, and the increase in ER expression in mesenchymalis, consistent with gestrione in patients with endometriosis.