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缺氧状态下has-miR-215-5p通过抑制BLCAP的表达调控子宫内膜腺上皮细胞增殖和迁移
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作者 张婉玉 王含必 邓成艳 《生殖医学杂志》 CAS 2024年第4期494-500,共7页
目的探究缺氧状态下的子宫内膜腺上皮细胞(EEC)增殖和迁移的可能机制。方法分别提取缺氧(1%氧浓度,缺氧组)和常氧(21%氧浓度,常氧组)条件下EEC的RNA进行高通量测序(RNA-sequence),分析两组细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达。利... 目的探究缺氧状态下的子宫内膜腺上皮细胞(EEC)增殖和迁移的可能机制。方法分别提取缺氧(1%氧浓度,缺氧组)和常氧(21%氧浓度,常氧组)条件下EEC的RNA进行高通量测序(RNA-sequence),分析两组细胞中微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达。利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法对差异表达的miRNA即has-miR-215-5p进行鉴定,通过miRNA靶基因数据库网站(Target Scan)分析has-miR-215-5p的靶基因。Western Blot检测两组细胞中靶基因膀胱癌相关蛋白(BLCAP)的蛋白表达水平,细胞计数实验检测两组EEC的增殖情况,划痕实验检测两组EEC的迁移能力。结果测序结果显示,缺氧组EEC中has-miR-215-5p表达显著上升(P<0.001),RT-qPCR验证结果与测序结果一致。miRNA Target Scan数据库检索结果显示,BLCAP是has-miR-215-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示has-miR-215-5p与BLCAP-3’-UTR结合,结合位点突变后结合活性消失。Western Blot结果显示,与常氧组相比,缺氧组EEC中的BLCAP蛋白表达显著下降(P<0.001)。CCK-8及划痕实验分别提示与常氧组相比,缺氧组的EEC增殖能力显著降低、迁移能力显著增强(P<0.001)。结论缺氧条件下EEC中has-miR-215-5p可能通过与BLCAP-3’-UTR结合,抑制BLCAP的表达活性,导致EEC的增殖降低与迁移增强。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 缺氧 has-miR-215-5p 膀胱癌相关蛋白 细胞增殖 细胞迁移
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褪黑素通过改善线粒体动力学缓解棕榈酸诱导的牛子宫内膜上皮细胞损伤
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作者 王忆 巩建飞 +9 位作者 衡诺 胡樱凡 王蕊 王欢 朱妮 何维 胡智辉 郝海生 朱化彬 赵善江 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3978-3987,共10页
旨在探究褪黑素对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)线粒体动力学的影响及机制。本试验以BEECs为研究对象,分为3组:对照组、PA组和褪黑素组,其中,对照组添加0.2 mmol·... 旨在探究褪黑素对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)线粒体动力学的影响及机制。本试验以BEECs为研究对象,分为3组:对照组、PA组和褪黑素组,其中,对照组添加0.2 mmol·L^(-1)BSA溶剂,PA组添加0.2 mmol·L^(-1)PA,褪黑素组同时添加0.2 mmol·L^(-1)PA和100 nmol·L^(-1)褪黑素。本研究通过CCK8法(n=4)和Annexin V-FITC/PI双染法(n=3)检测细胞活力和凋亡情况;利用细胞流式术检测细胞线粒体内的ROS水平(n=3);进一步使用Seahorse XFe96细胞代谢呼吸动态分析仪检测耗氧率、基础呼吸值、ATP合成能力等线粒体呼吸功能的相关指标(n=4);qRT-PCR法检测线粒体动力学相关基因MFN1、DRP 1和PGC1-α的mRNA表达变化量(n=3);最后通过Western-Blot法检测线粒体动力学相关蛋白MFN1、p-DRP1、DRP1和PGC1-α的表达变化量(n=3)。结果显示:与PA组相比,1)添加褪黑素能显著降低BEECs线粒体ROS水平(P<0.05),并显著提高BEECs活力和显著降低BEECs凋亡率(P<0.05);2)Seahorse结果提示,添加褪黑素能显著提高线粒体基础呼吸值、ATP产量和最大耗氧量(P<0.05),此结果表明褪黑素能改善线粒体功能,促进线粒体有氧呼吸,增加ATP产量;3)qRT-PCR结果表明,添加褪黑素能显著降低MFN1、DRP 1的mRNA表达量,显著提高PGC1-α的mRNA表达量(P<0.05);4)Western-Blot检测发现褪黑素组中MFN1蛋白表达量显著下降(P<0.05),p-DRP1/DRP1和PGC1-α蛋白表达量显著上升(P<0.05)。综上,本研究表明褪黑素可能通过改善BEECs线粒体动力学功能,从而缓解PA诱导下的线粒体氧化应激和提高线粒体呼吸功能,最终增强BEECs活力和降低BEECs凋亡;本研究初步探究了褪黑素对PA诱导BEECs损伤的作用机制,为提高严重NEB奶牛低繁殖力提供了理论依据。 展开更多
关键词 褪黑素 棕榈酸 子宫内膜上皮细胞 线粒体动力学 凋亡
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过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响
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作者 姚伟佳 罗春海 +4 位作者 刘佳金 王薇 李丹阳 刘炳琦 付世新 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3635-3642,共8页
[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理... [目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 奶牛 miRNA-424-5p AKT3 子宫内膜上皮细胞 凋亡
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NE激活Nrf2/HO-1信号通路调节人子宫内膜上皮细胞的氧化应激
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作者 杨雪 马瑞欣 +3 位作者 李佳鑫 孔雪瑞 李军平 罗彦 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期767-773,共7页
目的明确去甲肾上腺素(NE)是否能通过核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)调控培养的人子宫内膜上皮细胞(hEECs)的氧化应激状态。方法培养hEECs,通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测α和β肾上腺素能受体在hEECs的表达;细... 目的明确去甲肾上腺素(NE)是否能通过核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)调控培养的人子宫内膜上皮细胞(hEECs)的氧化应激状态。方法培养hEECs,通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测α和β肾上腺素能受体在hEECs的表达;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验确定NE处理对细胞活性的影响,根据结果将细胞分为处理组和对照组,选择合适浓度进行处理;通过Western blot实验,检测闭锁蛋白(Occludin),闭锁小带蛋白-1(ZO-1),凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),抗氧化应激蛋白Nrf2、HO-1的表达,流式细胞术检测NE处理后细胞凋亡的情况;酶联免疫吸附试验试剂盒(ELISA)检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平。结果在hEECs上检测到α1 a、α1 b、α2 a、α2 b、α2 c、β1、β3肾上腺素能受体的表达。NE处理后,在低浓度(5、10μmol/L)不明显影响细胞活力,而15、20μmol/L NE处理细胞6 h或24 h均明显增加细胞活性。紧密连接蛋白ZO-1和Occludin在15μmol/L 24 h处理组显著升高。ZO-1在6 h处理组下降,15μmol/L处理显著下降,同时Occludin在6 h处理组升高。NE处理后与对照相比,细胞凋亡率升高,15μmol/L NE处理细胞6 h凋亡率显著升高,处理24 h后细胞凋亡率有所下降,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax>1。NE处理后,上调Nrf2及HO-1,细胞培养基上清液中的MDA水平没有明显升高,同时SOD水平明显上调。结论NE处理细胞后可通过激活Nrf2/HO-1信号,上调SOD,发挥抗氧化应激、抗凋亡的作用。 展开更多
关键词 去甲肾上腺素 NRF2 HO-1 子宫内膜上皮细胞 ZO-1 OCCLUDIN Bax Bcl-2
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肉牛ISG20基因编码区的克隆及其在子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达分析
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作者 姚妮 罗仍卓么 +2 位作者 包斌武 杨易 王兴平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期184-191,共8页
为探究干扰素刺激外切酶基因20(ISG20)在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达及功能分析。采用RT-PCR结合测序技术获得肉牛ISG20基因的CDS区,利用生物信息学在线工具进行了ISG20基因及其所编码的蛋白质的序列分析,并利用qRT-PCR检测... 为探究干扰素刺激外切酶基因20(ISG20)在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达及功能分析。采用RT-PCR结合测序技术获得肉牛ISG20基因的CDS区,利用生物信息学在线工具进行了ISG20基因及其所编码的蛋白质的序列分析,并利用qRT-PCR检测了ISG20基因及其相关基因在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量。结果显示,ISG20基因的CDS区长度为516 bp,可编码一条由176个氨基酸组成的无跨膜结构域且不稳定的碱性亲水性单体蛋白质。该蛋白质含有1个DEDD核酸外切酶超家族结构域,与ISG15和MX2等10种蛋白质相互作用,主要在细胞质中发挥作用。此外,qRT-PCR结果表明,与对照组相比,ISG20基因及其相关的ISG15和MX2在孕酮(P4)联合干扰素-tau(IFN-τ)诱导的肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量均显著上调。ISG20可能参与肉牛子宫内膜上皮细胞容受态的形成,并在早期妊娠等生物学过程中发挥作用。 展开更多
关键词 肉牛 ISG20 子宫内膜上皮细胞 细胞容受性 生物信息学分析
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子宫内膜上皮细胞类器官在生殖领域的研究进展
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作者 曹志文 颜桂军 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期576-582,共7页
近年来,子宫内膜上皮细胞类器官研究在生殖领域取得了显著进展。传统的二维细胞培养模型和动物实验难以准确还原子宫内膜的三维结构和生理功能,从而限制了对子宫内膜上皮细胞正常生理机制和相关疾病机制的深入研究。新兴的类器官技术为... 近年来,子宫内膜上皮细胞类器官研究在生殖领域取得了显著进展。传统的二维细胞培养模型和动物实验难以准确还原子宫内膜的三维结构和生理功能,从而限制了对子宫内膜上皮细胞正常生理机制和相关疾病机制的深入研究。新兴的类器官技术为此提供了新途径,子宫内膜上皮细胞类器官通过干细胞或前体细胞在三维培养基中自行组织形成,成功地高度还原了在体子宫内膜腺体的特征。这种类器官模型不仅能够模拟子宫内膜上皮细胞在不同周期阶段的生理变化,还能够模拟囊胚与子宫内膜之间的复杂互动过程。此外,子宫内膜上皮细胞类器官系统为生殖领域的基础研究和临床研究提供了重要工具,包括生殖相关基础研究、疾病机制探索、药物筛选及靶向治疗研究等。这些研究可为深入了解子宫内膜的生物学特性、疾病机制以及相关疾病的治疗策略提供全新的思路和方法。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 类器官 药物筛选
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孕酮调控奶牛子宫内膜上皮细胞容受性基因表达的研究
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作者 唐颖 李琦 +3 位作者 王红战 李博 陈艳茹 郑鹏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4711-4721,共11页
【目的】探讨孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞容受性标志基因表达的影响,为研究孕酮与子宫内膜容受性的关系及其调控机制提供理论依据。【方法】用0、10、100μg/L孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过显微镜观察细胞形态,利用CCK8试验检测细... 【目的】探讨孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞容受性标志基因表达的影响,为研究孕酮与子宫内膜容受性的关系及其调控机制提供理论依据。【方法】用0、10、100μg/L孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过显微镜观察细胞形态,利用CCK8试验检测细胞增殖水平,使用实时荧光定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)和同源盒结构基因10(HOXa10)的mRNA表达水平,筛选孕酮最佳作用浓度。用孕酮、转录激活因子3(STAT3)抑制剂(1.5μmol/L)、孕酮+STAT3抑制剂分别处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平。使用Lipofectamine 3000将VEGF的靶向miRNA(miR-497 mimic、miR-497 inhibitor)、HOXa10的靶向miRNA(miR-27a-3p mimic、miR-27a-3p inhibitor)以及阴性对照(mimic-NC、inhibitor-NC)分别转染奶牛子宫内膜上皮细胞,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-497、miR-27a-3p以及VEGF和HOXa10的表达情况。【结果】与0μg/L组相比,10和100μg/L孕酮处理组细胞增殖水平、PI 3 K和Akt基因的mRNA表达水平没有显著差异(P>0.05),VEGF和HOXa 10基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05),后续选用10μg/L孕酮进行试验。与10μg/L孕酮处理组相比,STAT3抑制剂处理组和孕酮+STAT3抑制剂联合处理组细胞中VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),但与对照组无显著差异(P>0.05)。与mimic-NC组相比,转染miR-497 mimic、miR-27a-3p mimic后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);与inhibitor-NC组相比,转染miR-497 inhibitor、miR-27a-3p inhibitor后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。【结论】孕酮通过激活STAT3信号通路调节奶牛子宫内膜上皮细胞中VEGF和HOXa 10基因的表达,miR-497负调控VEGF基因的表达,miR-27a-3p负调控HOXa 10基因的表达。 展开更多
关键词 孕酮 奶牛子宫内膜上皮细胞 容受性基因
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高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡机制的研究
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作者 温小庆 罗春海 +2 位作者 曹一鸣 李美娟 付世新 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第5期56-62,共7页
为揭示高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的机制,研究通过添加0、0.2、1.2 mM的NEFA刺激奶牛子宫内膜上皮细胞12 h,应用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,应用WB和qRT-PCR技术检测FoxO1、pFoxO1、Caspase-3、Bcl-2... 为揭示高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的机制,研究通过添加0、0.2、1.2 mM的NEFA刺激奶牛子宫内膜上皮细胞12 h,应用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,应用WB和qRT-PCR技术检测FoxO1、pFoxO1、Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白和mRNA表达水平。结果显示:NEFA在低浓度0.2 m M时细胞凋亡无明显变化,在高浓度1.2 mM时细胞凋亡极显著增多(P<0.01);NEFA在高浓度1.2 mM时极显著上调G1期细胞数量,显著下调G2期细胞数量;NEFA在低浓度0.2 mM时对细胞内Caspase-3、Bcl-2、Bax、FoxO1和p-FoxO1蛋白表达无显著影响(P>0.05);NEFA在1.2 mM时极显著上调细胞内Caspase-3、Bax、FoxO1和p-FoxO1的蛋白表达(P<0.01),NEFA在高浓度1.2 mM时极显著下调Bcl-2的蛋白表达(P<0.01)。NEFA在低浓度0.2 mM时对细胞内Caspase-3、Bcl-2、Bax、FoxO1的mRNA表达无显著影响(P>0.05);NEFA在1.2 mM时极显著上调细胞内Caspase-3、Bax和FoxO1的mRNA表达水平(P<0.01),极显著下调Bcl-2的mRNA水平(P<0.01)。研究表明,高浓度NEFA可以通过FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡和细胞周期阻滞。 展开更多
关键词 非酯化脂肪酸 细胞凋亡 奶牛子宫内膜上皮细胞 叉头盒O蛋白1
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牛碱性成纤维细胞生长因子联合子宫颈LEEP治疗子宫颈鳞状上皮内病变的临床观察
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作者 罗琦 万和平 《中国医学创新》 CAS 2024年第20期27-30,共4页
目的:探究子宫颈鳞状上皮内病变(SIL)应用牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合子宫颈环形电切术(LEEP)治疗的效果。方法:采用随机数字表法将2021年1月—2023年8月抚州市第一人民医院收治的80例SIL患者分为研究组(n=40)及对照组(n=40)。... 目的:探究子宫颈鳞状上皮内病变(SIL)应用牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合子宫颈环形电切术(LEEP)治疗的效果。方法:采用随机数字表法将2021年1月—2023年8月抚州市第一人民医院收治的80例SIL患者分为研究组(n=40)及对照组(n=40)。对照组采用子宫颈LEEP治疗,研究组予以子宫颈LEEP联合bFGF治疗。对比两组临床疗效、创面愈合情况、炎症因子水平及并发症发生情况。结果:相比于对照组(77.50%),研究组治疗总有效率(97.50%)高,差异有统计学意义(P<0.05)。相比于对照组,研究组阴道出血量少,阴道出血持续时间和阴道流液时间均短,术后C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)水平均低,差异均有统计学意义(P<0.05)。相比于对照组(17.50%),研究组并发症发生率(2.50%)低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SIL患者应用bFGF联合子宫颈LEEP治疗,效果显著,有助于促进创面愈合,并可降低炎症因子水平和并发症发生率,安全性较高。 展开更多
关键词 子宫颈鳞上皮内病变 牛碱性成纤维细胞生长因子 子宫颈环形电切术 并发症
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TNC基因敲除对绵羊子宫内膜上皮细胞迁移的影响
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作者 汪林丽 朱亚宁 +2 位作者 艾越 张效生 韩红兵 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期143-152,共10页
本研究旨在探究TNC(Tenascin-C)基因敲除对绵羊子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)迁移功能的影响及其内在信号通路,为研究胚胎附植及改善子宫内膜容受性提供借鉴。在TNC外显子3和5设计和筛选高活性sgRNA,转染绵羊EEC... 本研究旨在探究TNC(Tenascin-C)基因敲除对绵羊子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)迁移功能的影响及其内在信号通路,为研究胚胎附植及改善子宫内膜容受性提供借鉴。在TNC外显子3和5设计和筛选高活性sgRNA,转染绵羊EECs后,通过PCR和RT-PCR鉴定出TNC 6.1 kb片段缺失的绵羊EECs,即plate 1-G3和plate 2-B5。通过划痕实验检测plate 1-G3和plate 2-B5迁移功能变化,并通过RNA-seq和生物信息学分析筛选共差异表达基因(co-Differentially Expressed Genes,co-DEGs),进行GO分析、KEGG分析以及PPI分析。结果表明,TNC基因敲除促进了绵羊EECs的迁移,通过RNAseq和生物信息学分析筛选出2326个co-DEGs,包括1304个上调co-DEGs和1022个下调co-DEGs。GO分析显示,co-DEGs富集到细胞迁移、粘附、细胞-底物连接等。KEGG分析显示,co-DEGs富集在PI3KAkt信号通路、ECM-受体相互作用、Rap1信号通路、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等。GO条目中225个迁移相关co-DEGs的KEGG分析也富集到类似信号通路。迁移相关DEGs的PPI分析显示,中心枢纽基因有PIK3R3、FN1、FGFR1、ITGB3、PDGFRA等。TNC基因敲除导致绵羊EECs的迁移功能增强并揭示了其相关通路和关键基因,为研究胚胎附植及改善子宫内膜容受性提供了新思路。 展开更多
关键词 TNC 子宫内膜上皮细胞 RNA-SEQ 细胞迁移 功能富集分析
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LIF调控奶牛子宫内膜上皮细胞容受性基因表达研究
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作者 王红战 陈艳茹 +3 位作者 李琦 唐颖 李博 郑鹏 《黑龙江动物繁殖》 2024年第1期1-6,共6页
接受态的子宫内膜对于奶牛胚胎的成功植入至关重要。为探讨白血病抑制因子(LIF)对奶牛子宫内膜容受性的调控机制,试验将奶牛子宫内膜上皮细胞分为对照组、LIF处理组、LIF+STAT3共处理组,研究了LIF对子宫内膜容受性的作用和STAT3信号通... 接受态的子宫内膜对于奶牛胚胎的成功植入至关重要。为探讨白血病抑制因子(LIF)对奶牛子宫内膜容受性的调控机制,试验将奶牛子宫内膜上皮细胞分为对照组、LIF处理组、LIF+STAT3共处理组,研究了LIF对子宫内膜容受性的作用和STAT3信号通路对奶牛子宫内膜容受性的调控。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测容受性相关基因HOXa10、VEGF和炎症相关基因TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白表达变化。结果表明:与对照组相比,LIF处理组奶牛子宫内膜上皮细胞的容受性相关基因HOXa10、VEGF的表达量显著增加(P<0.05),炎症相关基因TLR4、NF-κB的表达量显著增加(P<0.05)。LIF+STAT3共处理组的HOXa10、VEGF的表达量与LIF处理组比较显著降低(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05);TLR4、NF-κB的表达量与LIF处理组比较无显著差异(P>0.05),显著高于对照组(P<0.05)。说明LIF通过激活STAT3信号通路调控子宫内膜上皮细胞HOXa10、VEGF的表达,能够增强子宫内膜的容受性。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 容受性 胚胎附植 STAT3抑制剂 白血病抑制因子(LIF)
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干扰FABP4基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响
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作者 陈岩 刘畅 +3 位作者 魏盼盼 喻恒彬 张童 胡广东 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第15期51-56,共6页
研究旨在探究脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响。设计3条FABP4干扰片段,将片段与pGBplv-U6-mcherry-puro连接构建干扰载体,以空载质粒为对照(NC组),3条干扰重组质粒分别为FABP4-shRNA1、FABP4-shR... 研究旨在探究脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响。设计3条FABP4干扰片段,将片段与pGBplv-U6-mcherry-puro连接构建干扰载体,以空载质粒为对照(NC组),3条干扰重组质粒分别为FABP4-shRNA1、FABP4-shRNA2、FABP4-shRNA3,对重组质粒进行酶切鉴定。质粒转染后RT-qPCR鉴定干扰效率,Western Blot对载体干扰效果进行进一步验证。将载体转染至体外培养的子宫内膜上皮细胞中,BODIPY法检测脂滴聚集情况,使用试剂盒检测细胞中甘油三酯含量,RT-qPCR检测脂代谢及增殖迁移相关基因,细胞划痕试验检测细胞迁移情况。结果显示:所有载体均可有效干扰FABP4基因的表达,其中FABP4-shRNA2载体干扰效果最好。在干扰子宫内膜上皮细胞FABP4基因表达后,与NC组相比,细胞中脂滴聚集能力下降,甘油三酯含量降低,细胞脂质代谢和增殖迁移相关基因mRNA表达下降,划痕愈合速度降低;降低子宫内膜上皮细胞FABP4基因表达后,细胞脂质积累水平及细胞迁移能力下降。研究表明,FABP4基因可能对绵羊妊娠和胚胎正常发育具有重要作用,值得在育种实践中进行更深入研究。 展开更多
关键词 绵羊 子宫内膜上皮细胞 FABP4 RNAI
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子宫颈鳞状细胞癌扩散累及子宫内膜1例报道
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作者 王胜国 《诊断病理学杂志》 2024年第9期932-933,共2页
目的 探讨子宫颈鳞状细胞癌扩散累及子宫内膜的临床病理特征、诊断及鉴别诊断、治疗及预后,旨在提高临床和病理医师对该类病变的认识水平。方法 回顾性分析1例子宫颈鳞状细胞癌扩散累及子宫内膜临床资料、病理学特征及免疫表型,并复习... 目的 探讨子宫颈鳞状细胞癌扩散累及子宫内膜的临床病理特征、诊断及鉴别诊断、治疗及预后,旨在提高临床和病理医师对该类病变的认识水平。方法 回顾性分析1例子宫颈鳞状细胞癌扩散累及子宫内膜临床资料、病理学特征及免疫表型,并复习相关文献。结果 子宫颈浸润性非角化型鳞状细胞癌扩散累及子宫内膜,子宫肌层微浸润。免疫组化:子宫颈肿物p16、CK5/6、p63均阳性;子宫内膜肿物p16、CK5/6、p63均阳性。结论 子宫颈鳞状细胞癌扩散累及子宫内膜的情况非常罕见,在这种情况下正常子宫内膜广泛被鳞状细胞癌所取代。子宫肌层常不受累,有时伴微浸润。 展开更多
关键词 子宫颈肿物 细胞 子宫内膜 表面扩散
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DIRAS3诱导猪子宫内膜上皮细胞自噬及对容受性相关基因表达的影响 被引量:1
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作者 周泉勇 刘敬 +3 位作者 刘晨龙 谢欣 季华员 柯尝玲 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期169-178,共10页
【目的】旨在探究DIRAS3对猪子宫内膜上皮细胞自噬的调控作用,并分析其对子宫内膜上皮细胞增殖凋亡及子宫内膜容受性相关基因表达的影响,为揭示DIRAS3在猪胚胎附植过程中发挥的功能提供科学依据。【方法】通过构建DIRAS3基因慢病毒载体... 【目的】旨在探究DIRAS3对猪子宫内膜上皮细胞自噬的调控作用,并分析其对子宫内膜上皮细胞增殖凋亡及子宫内膜容受性相关基因表达的影响,为揭示DIRAS3在猪胚胎附植过程中发挥的功能提供科学依据。【方法】通过构建DIRAS3基因慢病毒载体感染猪子宫内膜上皮细胞,利用Realtime PCR方法检测自噬标志基因LC3-Ⅱ和P62、自噬调节因子mTOR及子宫内膜容受性相关基因COX2、HOXA10、LIF和MSX1的表达水平,并利用CCK-8与流式细胞法分别检测细胞增殖、细胞凋亡情况。【结果】在猪子宫内膜上皮细胞中,DIRAS3可上调LC3-Ⅱ的表达,下调P62的表达,诱导自噬的发生。同时,转染慢病毒干扰载体至子宫内膜上皮细胞发现,DIRAS3表达的抑制,可明显促进细胞中mTOR表达,并诱导细胞增殖,降低细胞凋亡率,且可极显著提高COX2、HOXA10和LIF的表达水平,降低MSX1的表达水平,而此过程中添加雷帕霉素(mTOR抑制剂)处理阻断mTOR通路后,子宫内膜上皮细胞中自噬水平无明显变化,且DIRAS3调控细胞增殖凋亡和容受性相关基因表达的能力受到抑制。【结论】DIRAS3可能通过参与调控mTOR介导的细胞自噬从而影响子宫内膜容受性的建立,进而在猪胚胎附植中发挥重要功能。 展开更多
关键词 DIRAS3 子宫内膜上皮细胞 细胞自噬 子宫内膜容受性
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小鼠囊胚胞外囊泡对子宫内膜上皮细胞E-cadherin和vimentin表达的影响 被引量:2
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作者 刘颖 段乳侠 +1 位作者 张浩栋 方廖琼 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期345-351,共7页
目的:探讨小鼠囊胚细胞外囊泡(EVs)对小鼠子宫内膜上皮细胞(mEECs)上皮钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达的影响。方法:以孕4.5 d的BABL/c小鼠囊胚为材料,利用超高速离心分离纯化小鼠囊胚EVs,粒度仪分析粒径,透射电子显微镜... 目的:探讨小鼠囊胚细胞外囊泡(EVs)对小鼠子宫内膜上皮细胞(mEECs)上皮钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达的影响。方法:以孕4.5 d的BABL/c小鼠囊胚为材料,利用超高速离心分离纯化小鼠囊胚EVs,粒度仪分析粒径,透射电子显微镜观察形态,Western blot分析Tsg101和CD63的表达;酶消化结合差速贴壁筛选法制备原代mEECs,流式细胞术分析细胞角蛋白8(CK8)的阳性率鉴定mEECs纯度。建立囊胚EVs与mEECs共培养模型,共聚焦显微镜观察PKH26标记的囊胚EVs进入mEECs的形态过程,Western blot和细胞免疫化学法分析共培养中mEECs中E-cadherin和vimentin表达的变化。结果:(1)小鼠囊胚EVs平均粒径(226.6±3.8) nm,表现囊泡超微形态,表达Tsg101和CD63蛋白标志物。(2)原代mEECs形态均匀,CK8阳性细胞率80%以上。(3)与0 h相比,mEECs与囊胚EVs共培养48和96 h时E-cadherin表达水平显著降低(P<0.01),vimentin表达水平显著升高(P<0.01)。结论:小鼠囊胚EVs可下调E-cadherin表达,上调vimentin表达,诱导mEECs发生上皮-间充质转化。 展开更多
关键词 囊胚 细胞外囊泡 子宫内膜上皮细胞 上皮-间充质转化
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家畜子宫内膜纤维化的细胞分子机制研究进展
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作者 褚婷婷 张晓宇 +3 位作者 孙磊 童嘉顺 张磊 宋宇轩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2334-2344,共11页
子宫内膜纤维化是子宫内膜受到持续损伤刺激导致其修复障碍引发的,以细胞外基质过度沉积为特征,可能导致子宫内膜结构破坏和功能障碍甚至衰竭,影响家畜繁殖力和生殖质量。因此,解析子宫内膜纤维化的形成机制对提高家畜繁殖力具有一定意... 子宫内膜纤维化是子宫内膜受到持续损伤刺激导致其修复障碍引发的,以细胞外基质过度沉积为特征,可能导致子宫内膜结构破坏和功能障碍甚至衰竭,影响家畜繁殖力和生殖质量。因此,解析子宫内膜纤维化的形成机制对提高家畜繁殖力具有一定意义。本文阐述了纤维化发生的触发因素,形成的细胞分子机制及细胞代谢调节与细胞外基质之间的关系,并探讨了纤维化的治疗策略和未来研究方向,旨在为家畜子宫内膜纤维化的研究提供参考。 展开更多
关键词 子宫内膜纤维化 细胞外基质 肌成纤维细胞 上皮间充质转化 应激 细胞代谢
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鼠李糖乳杆菌GR-1缓解大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性反应
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作者 张亦弛 黄东风 +5 位作者 吕艳秋 姚学军 胡鑫 高晓波 王雪 王天坤 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期6-11,共6页
为明确鼠李糖乳杆菌GR-1(L.rhamnosus GR-1)在大肠杆菌感染原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)过程中调节炎性反应的机制,本试验将BEECs分为4个组,分别是对照组(加入5 mL培养基)、E.coli攻菌组(加入5 mL浓度为1×10^(5)CFU/mL大肠杆菌... 为明确鼠李糖乳杆菌GR-1(L.rhamnosus GR-1)在大肠杆菌感染原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)过程中调节炎性反应的机制,本试验将BEECs分为4个组,分别是对照组(加入5 mL培养基)、E.coli攻菌组(加入5 mL浓度为1×10^(5)CFU/mL大肠杆菌)、L.rhamnosus GR-1单独处理组(提前3 h加入5 mL浓度为1×10^(7)CFU/mL L.rhamnosus GR-1)和L.rhamnosus GR-1保护组(加入5 mL浓度为1×10^(7)CFU/mL L.rhamnosus GR-1孵育3 h后去掉上清液,再加入5 mL浓度为1×10^(5)CFU/mL大肠杆菌);采用光学显微镜观察E.coli对BEECs形态的损害情况,实时荧光定量PCR检测相关基因的转录水平,Western blot检测TLR2和NF-κB2的蛋白表达。结果显示,E.coli攻菌6 h后,与E.coli攻菌组相比,L.rhamnosus GR-1保护组BEECs形态保持完整,且TLR2、TLR4、TNF-αmRNA表达量极显著下调(P<0.01或P<0.001),TLR2和NF-κB2的蛋白水平也极显著下降(P<0.001)。结果表明,L.rhamnosus GR-1可能通过TLRs下调BEECs的炎性因子表达,从而缓解E.coli感染造成的奶牛子宫内膜上皮细胞损伤,为奶牛子宫内膜炎的防治提供数据参考。 展开更多
关键词 鼠李糖乳杆菌GR-1 大肠杆菌 奶牛子宫内膜上皮细胞 TLR NF-κB2
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自噬通量在小檗碱抑制奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡中的作用
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作者 王继芳 梅莲 +3 位作者 宫本芝 李艳 付开强 曹荣峰 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期258-263,共6页
为探究小檗碱对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)凋亡的调控机理,首先利用CCK8法确定添加药物的细胞毒性,然后将BEECs分为空白(C)组、脂多糖(LPS)组(1μg/mL)、小檗碱(BBR)组(BBR 10μmol/L+LPS 1μg/mL)、氯喹(CQ)组(CQ 20μmol/... 为探究小檗碱对脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)凋亡的调控机理,首先利用CCK8法确定添加药物的细胞毒性,然后将BEECs分为空白(C)组、脂多糖(LPS)组(1μg/mL)、小檗碱(BBR)组(BBR 10μmol/L+LPS 1μg/mL)、氯喹(CQ)组(CQ 20μmol/L+BBR 10μmol/L+LPS 1μg/mL),用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot检测BAX、BCL2、LC3II、P62蛋白表达量。结果显示:LPS组BEECs凋亡率和BAX/BCL2较空白组升高(P<0.01);BBR组细胞凋亡率和BAX/BCL2低于LPS组(P<0.01);CQ组细胞凋亡率高于其他3组(P<0.01),而BAX/BCL2与空白组差异不显著。LPS组BEECs表达P62高于空白组(P<0.01);BBR组与LPS组相比LC3II升高(P<0.05)、P62降低(P<0.01);CQ组LC3II高于其他3组(P<0.01),CQ组P62与空白组、BBR组差异显著而与LPS组差异不显著。说明LPS降低BEECs自噬通量,BBR使LPS降低的自噬通量升高,但BBR不能挽救CQ抑制的晚期自噬。结果表明,小檗碱通过提高自噬通量抑制脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 小檗碱 奶牛子宫内膜上皮细胞 自噬通量 细胞凋亡 脂多糖
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基于Wnt/β-catenin信号通路探讨子宫内膜来源间充质干细胞抑制子宫内膜纤维化的机制
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作者 靳涛 颜望碧 殷琦 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第4期640-646,共7页
目的探讨Wnt/β-catenin信号通路介导间质上皮转化(EMT)在子宫内膜来源间充质干细胞(eMSCs)抑制子宫内膜纤维化中的作用机制。方法将18只雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组和eMSCs组,每组6只。Sham组的大鼠在剖腹手术后... 目的探讨Wnt/β-catenin信号通路介导间质上皮转化(EMT)在子宫内膜来源间充质干细胞(eMSCs)抑制子宫内膜纤维化中的作用机制。方法将18只雌性SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组和eMSCs组,每组6只。Sham组的大鼠在剖腹手术后不接受任何形式的子宫介入手术。Model组和eMSCs组建立子宫内粘连大鼠模型。eMSCs组在模型损伤后立即移植eMSCs细胞悬液进行治疗,总量为每子宫0.05 ml(2×107细胞/ml)。3周后收集单侧损伤子宫进行苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色。通过蛋白质印迹分析子宫内膜纤维化、EMT、Wnt/β-catenin通路蛋白表达。结果Model组大鼠宫腔结构破坏,腺体数量明显减少并积聚大量蓝色胶原纤维,但在eMSCs治疗后子宫内膜腺体数量显著增加,并且纤维化面积显著降低。与Sham组相比,Model组中I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达水平显著增加(P<0.05),但在eMSCs组中均显著减少(P<0.05)。在Model组中,N-cadherin、Vimentin和ZEB1的表达显著增加,而E-cadherin的表达减少。然而,在eMSCs组中,上述分子蛋白质的变化完全相反。与Sham组相比,Model组β-连环蛋白(β-catenin)和C-myc表达增加(P<0.05)。与Model组相比,eMSCs组中周期蛋白E(CyclinE)、β-catenin和C-myc表达增加(P<0.05)。结论eMSCs可以通过抑制EMT和子宫内膜纤维化来促进子宫内粘连大鼠子宫内膜修复,这种作用部分是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来实现。 展开更多
关键词 WNT/Β-CATENIN信号通路 间质上皮转化 子宫内膜来源间充质干细胞 子宫内膜纤维化 大鼠 子宫内粘连模型
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缺氧环境下HIF-1调控PAD4介导的H3cit促进子宫内膜腺上皮细胞凋亡
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作者 黄勇 罗书 +1 位作者 廖源 王开举 《河北医学》 CAS 2023年第9期1432-1438,共7页
目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水... 目的:探究缺氧环境下HIF-1以及PAD4对子宫内膜腺上皮细胞凋亡的作用及其相关机制。方法:常氧和缺氧环境培养宫内膜腺上皮细胞CM-H058,qRT-PCR和Western blot检测HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达,流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过慢病毒转染法将sh-NC、sh-HIF-1、oe-NC、oe-PAD4转染至CM-H058,缺氧环境培养并分组为:sh-NC组、sh-HIF-1组、sh-HIF-1+oe-NC组和sh-HIF-1+oe-PAD4组,检测各组细胞HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达和细胞凋亡水平;检测PAD4、H3cit和H3K27ac在Caspase3、Caspase7 TSS富集水平。结果:与常氧组比较,缺氧组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。与sh-NC组比较,sh-HIF-1组HIF-1、PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达降低(P<0.05),细胞凋亡水平降低(P<0.05),HIF-1在PAD4 TSS富集水平降低(P<0.05)。与sh-HIF-1+oe-NC组比较,sh-HIF-1+oe-PAD4组PAD4、H3cit、Caspase3、Caspase7表达升高(P<0.05),细胞凋亡水平升高(P<0.05)。结论:缺氧环境下HIF-1促进PAD4表达。PAD4及其催化的H3cit进一步在Caspase3、Caspase7 TSS富集,促进Caspase3、Caspase7转录和表达,最终诱导子宫内膜腺上皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 缺氧环境 缺氧诱导因子1 精氨酸脱亚胺酶4 子宫内膜上皮细胞 凋亡
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