PD-L1激活NF-κB促进子宫内膜癌细胞上皮间质转化的作用研究

目的探讨程序性死亡蛋白配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)过表达对子宫内膜癌细胞Ishikawa上皮间质转化的影响及可能机制。方法使用实验室构建的PD-L1过表达稳转细胞株Ishikawa/PD-L1及稳转空载对照组Ishikawa/EV,qPCR及Western blot法检测PD-L1过表达效率,Transwell和划痕实验检测细胞迁移能力和侵袭活性,Western blot法检测上皮间质转化相关蛋白表达和核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)磷酸化水平。结果与对照组相比,Ishikawa/PD-L1迁移能力与侵袭活性显著增强,Vimentin、N-cadherin、p-p65蛋白表达明显升高,E-cadherin表达明显下调。结论PD-L1可通过诱导NF-κB信号通路激活,促进上皮间质转化,进而增强子宫内膜癌细胞的迁移、侵袭能力。

金雀黄素诱导人子宫内膜癌细胞HEC-1B凋亡及机制的研究

目的研究金雀黄素(Genistein,GEN)诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1B凋亡,探讨金雀黄素诱导HEC-1B细胞凋亡与抑癌基因PTEN之间的关系。方法应用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用流式细胞仪检测抑癌基因PTEN蛋白的表达,两者之间的相关性。结果金雀黄素诱导HEC-1B细胞的凋亡,其作用随剂量增加而增强;金雀黄素可上调HEC-1B细胞抑癌基因PTEN蛋白的表达,其作用随剂量增加而增强。结论金雀黄素能够诱导HEC-1B细胞凋亡,其机制可能是通过上调HEC-1B细胞PTEN的表达而实现。

染料木黄酮抑制子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖作用的研究

目的研究染料木黄酮(Gen iste in,GST)对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B的作用。方法应用MTT法测定染料木黄酮对HEC-1B的生长抑制率,流式细胞术检测是否发生细胞凋亡。结果染料木黄酮能够明显抑制人子宫内膜癌细胞株HEC-1B细胞增殖,其作用随时间的延长和剂量的增加而增强,并引起HEC-1B的凋亡。结论染料木黄酮抑制HEC-1B的增殖,诱导凋亡。

miR-195-5p靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞恶性生物学行为

目的:探讨miR-195-5p通过靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的分子机制。方法:HEC-1B细胞培养与转染完成后分为4组:HEC-1B组、miR-195-5p mimic组、p LV-FGF2组和miR-195-5p+FGF2组。q RT-PCR检测细胞miR-195-5p和FGF2 m RNA水平,荧光素酶实验验证miR-195-5p与FGF2的靶向关系,Western blotting检测FGF2表达水平,CCK-8法检测HEC-1B细胞增殖水平,流式细胞术检测HEC-1B细胞凋亡率,Transwell实验检测HEC-1B细胞侵袭能力,划痕实验检测HEC-1B细胞迁移能力。结果:与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组miR-195-5p表达升高、FGF2 m RNA水平下降(均P<0.01);miR-195-5p可直接靶向FGF2。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组FGF2的蛋白表达水平下降,p LV-FGF2组FGF2的蛋白水平明显上升,且miR-195-5p+FGF2组FGF2的蛋白表达水平低于p LV-FGF2组(均P<0.01)。miR-195-5p mimic组细胞增殖水平低于HEC-1B组,p LV-FGF2组细胞增殖水平高于HEC-1B组(均P<0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组细胞凋亡率增加,p LV-FGF2组细胞凋亡率降低,且miR-195-5p+FGF2组细胞凋亡率高于p LV-FGF2组(均P<0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降,p LV-FGF2组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率上升,且miR-195-5p+FGF2组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于p LV-FGF2组(均P<0.01)。结论:miR-195-5p通过靶向FGF2抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡,其作为子宫内膜癌的治疗靶点。

青蒿琥酯抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖及诱导其凋亡的机制

目的研究青蒿琥酯对人子宫内膜癌HEC-1B细胞的作用及其抗癌机制。方法 MTT法观察细胞毒作用,流式细胞术测定细胞凋亡率并进行细胞周期分析,RT-PCR法检测人子宫内膜癌HEC-1B细胞用药组与对照组Livin、Caspase-3mRNA表达。结果 MTT检测显示青蒿琥酯抑制HEC-1B细胞生长且生长抑制作用呈剂量-时间依赖性;流式细胞仪检测示青蒿琥酯作用使G0/G1期细胞比例上升(P<0.05),G2/M期细胞比例下降(P<0.05);对照组、5、20、80mg/L青蒿琥酯组细胞48h凋亡率(%)分别为6.64±0.19、6.92±0.28、36.42±0.77和11.77±0.58。实验组与对照组相比,5mg/L青蒿琥酯组凋亡率无统计学差异,20、80mg/L青蒿琥酯组凋亡率均有统计学差异(P<0.05);RT-PCR结果显示,青蒿琥酯组Livin mRNA表达下调,Caspase-3mRNA表达上调。结论青蒿琥酯体外抑制人子宫内膜癌细胞HEC-1B的生长;青蒿琥酯可能通过抑制Livin mRNA表达、进而增加Caspase-3mRNA表达,诱导子宫内膜癌HEC-1B细胞发生细胞周期阻滞,促进其凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。

过表达miR-125b对子宫内膜癌HEC-1B细胞周期、增殖和凋亡的影响及其可能的机制

目的:探讨miR-125b过表达对子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)HEC-1B细胞增殖及凋亡的影响及其可能的机制。方法:收集2012年11月至2013年11月间四川省妇幼保健医院收治的30例子宫内膜样腺癌患者肿瘤及其癌旁组织标本,Real-time PCR检测肿瘤组织及培养细胞中miR-125b的表达水平。脂质体转染法分别将miR-125b模拟片段(mimic)与无关序列(scramble mimic)转染入HEC-1B细胞作为miR-125b组和对照组,以野生型HEC-1B细胞为未处理组。流式细胞术和CCK-8法分别检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞周期、凋亡和增殖的影响,Western blotting检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞中PIK3CD、p-AKT以及总AKT表达的影响。结果:人EC组织中miR-125b表达量较癌旁组织显著下调(P<0.05)。HEC-1B细胞转染mimic片段后,其miR-125b的表达上调820倍以上。转染48 h后,miR-125b组细胞的增殖能力显著低于对照组和未处理组(0.53±0.06 vs 0.82±0.07、0.89±0.08,P<0.01)、细胞凋亡率显著升高[(21.5±3.2)%vs(14.2±2.3)%、(13.5±2.1)%,均P<0.01],并且miR-125b组细胞周期阻滞于G1期;miR-125b组HEC-1B细胞中PIK3CD及其下游p-AKT蛋白表达较对照组和未处理组显著降低(均P<0.01),而总AKT表达无明显变化(均P>0.05)。结论:miR-125b在EC组织中普遍低表达,其在HEC-1B细胞中过表达能够明显抑制细胞增殖和周期进程,促进细胞早期凋亡,这可能与miR-125过表达抑制细胞内PI3K/AKT信号通路有关。

养精种玉汤对薄型子宫内膜大鼠白细胞介素-1β、核因子κB的影响

目的:探讨养精种玉汤对薄型子宫内膜大鼠炎症介质的影响。方法:选取动情周期规律的24只无特定病原体(SPF)级斯泼累格·多雷(SD)雌性大鼠随机分为空白组、中药组与模型组,每组8只。中药组与模型组通过向子宫腔内注射95%无水乙醇建立薄型子宫内膜模型,空白组大鼠不干预。造模后,中药组大鼠予以养精种玉汤灌胃,空白组与模型组以蒸馏水灌胃。灌胃3个动情周期后取子宫组织及动脉血,进行子宫内膜厚度测量,用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠子宫内膜组织形态,用酶联免疫吸附试验法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、核因子κB(NF-κB)水平,用定量PCR检测子宫组织IL-1βmRNA、NF-κBmRNA相对表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠子宫湿重、子宫脏器指数、内膜厚度、腺体数明显降低(P<0.01),血清IL-1β及NF-κB水平、子宫组织IL-1βmRNA及NF-κB mRNA相对表达量明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组大鼠子宫湿重、子宫脏器指数、内膜厚度、腺体数明显升高(P<0.01),血清IL-1β及NF-κB水平、子宫组织IL-1βmRNA及NF-κB mRNA相对表达量明显降低(P<0.05)。结论:养精种玉汤可增加薄型子宫内膜大鼠的子宫内膜厚度,其作用机制可能与抑制NF-κB、IL-1β有关,即降低炎症介质水平,促进子宫内膜细胞的增殖。

四种人子宫内膜癌细胞系中IGFBP-rP1的定位及表达

目的:检测不同子宫内膜癌细胞系中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-r P1)的定位及表达情况。方法:体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa、RL95-2、HEC-1B和HEC-1A,细胞免疫荧光法检测IGFBP-r P1在4种子宫内膜癌细胞中的定位;实时荧光定量PCR法与Western blot法检测4种子宫内膜癌细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白的表达水平。结果:细胞免疫荧光染色示IGFBP-r P1主要定位于4种子宫内膜癌细胞的胞浆。子宫内膜癌Ishikawa、RL95-2细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达水平明显高于HEC-1A、HEC-1B细胞(P<0.001)。HEC-1A细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达量最低,Ishikawa细胞中表达量最高(P均<0.05)。结论:4种子宫内膜癌细胞系中均表达IGFBP-r P1。

FOXM1促进子宫内膜癌细胞系HEC-1B增殖、迁移和侵袭

目的探讨抑制叉头框蛋白M1(FOXM1)基因的表达对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法选择人子宫内膜癌细胞系HEC-1B,将细胞分为3组:空白对照组、阴性对照组、siRNA-FOXM1组;实时荧光定量PCR检测各组细胞FOXM1、血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA表达水平;CCK8法检测各组细胞增殖能力;细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力;Transwell小室法检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞VEGF和bFGF基因的蛋白表达。结果与HEECs细胞相比,HEC-1B细胞FOXM1 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);干扰FOXM1表达后,FOXM1 mRNA和蛋白表达、HEC-1B细胞增殖、迁移和侵袭能力与空白对照组和阴性对照组相比均显著降低(P<0.05);抑制FOXM1表达后,HEC-1B细胞VEGF、bFGF mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论抑制FOXM1的表达可以抑制HEC-1B细胞增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与抑制VEGF、bFGF的表达有关。

Rap1b在子宫内膜癌组织中的表达及介导自噬调控人子宫内膜癌细胞化疗敏感性的研究

目的检测子宫内膜癌(EC)组织中Ras相关蛋白1b(Rap1b)表达,观察其对EC细胞Ishikawa化疗敏感性的影响及机制。方法选取2016年9月至2019年1月江门市中心医院诊治的60例EC患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EC组织与癌旁组织中Rap1b mRNA表达,免疫组化染色检测组织中Rap1b与自噬相关蛋白Beclin1、LC3表达。建立Ishikawa/DDP耐药细胞株,脂质体介导细胞转染法构建Rap1b低表达的Ishikawa/DDP细胞,以转染NC-siRNA的Ishikawa/DDP细胞作为阴性转染组,未转染的Ishikawa/DDP细胞作为对照组;qRT-PCR和Western blot检测细胞中Rap1b的表达;CCK-8实验检测DDP处理后细胞存活率,并计算IC50值;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光染色检测LC3表达;Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin1及P62蛋白表达。结果与癌旁组织比较,EC组织中Rap1b mRNA与蛋白表达均升高,Beclin1、LC3表达也升高(P<0.05);与对照组和NC-siRNA组相比,Rap1bsiRNA组细胞中Rap1b mRNA和蛋白相对表达量均下降,25、50、100μmol/L DDP处理后细胞存活率下降,IC50值降低,细胞凋亡率升高,LC3荧光染色强度减弱,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率下降,Beclin1蛋白表达水平下降而P62蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论Rap1b在EC组织中表达水平较高,降低Rap1b表达可提高Ishikawa细胞的化疗敏感性,其机制可能与抑制自噬相关。

紫杉醇对子宫内膜癌细胞CYP1B1基因表达的影响

目的:探讨子宫内膜癌细胞CYP1B1基因表达对紫杉醇化疗耐药性的相关性。方法:以Ishikawa细胞经过细胞培养诱导其表达,在不同时间、不同浓度的给予紫杉醇,采用MTT法测定细胞生长,通过PCR技术检测CYP1B1 mRNA表达检测、Western blot检测蛋白表达,观察CYP1B1基因表达情况。结果:子宫内膜癌Ishikawa细胞可以诱导CYP1B1基因表达。紫杉醇了明显抑制子宫内膜癌细胞,不同浓度抑制率不同。在0、0.1、1.0、5.0、10.0、30.0μg/m L抑制率分别为1.38%、25.41%、40.37%、59.78%、73.67%、89.34%。随着药物浓度和时间的增加,细胞存活呈负相关(P<0.05)。结论:CYP1B1基因在子宫内膜癌细胞中呈高表达,在子宫内膜癌Ishikawa细胞体外化疗中起抑制作用。

miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

目的探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b和FOXO1的表达;运用RT-PCR的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 m RNA的变化,Western blotting检测在FOXO1蛋白的变化。结果 miR-135b在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高(P<0.05),FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低(P<0.05)。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖(P<0.05)。上调miR-135b能够降低FOXO1 m RNA和蛋白的表达(P<0.05),下调miR-135b能够提高FOXO1 m RNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 miR-135b在子宫内膜癌的发生发展中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。

小干扰RNA抑制HMGB1表达对子宫内膜癌细胞侵袭与迁移的影响

目的:探讨靶向HMGB1的shRNA对HMGB1表达改变的影响及其与子宫内膜癌细胞侵袭与迁移力改变的关系。方法:运用RNA干扰技术,构建HMGB1短发夹RNA(pshRNA-1/HMGB1,pshRNA-2/HMGB1,pshRNA-3/HMGB1),同时设置转染非特异性质粒的阴性对照组(HMGB1/p-NC)和脂质体转染组(Lipo组),用脂质体法转染人子宫内膜癌细胞(HEC-1A),利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测转染后48 h各组细胞HMGB1在mRNA和蛋白水平的表达,Transwell小室法观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的侵袭情况,细胞划痕实验观察转染HMGB1 shRNA后HEC-1A细胞的迁移情况。结果:RT-PCR显示:3组重组质粒HMGB1-pshRNAs转染后,HMGB1 mRNA相对表达水平分别是0.192±0.006,0.055±0.002和0.123±0.086,较Lipo组(0.268±0.008)和HMGB1/p-NC组(0.270±0.004)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达28.4%,79.5%和54.1%。Western印迹显示:HMGB1蛋白相对表达水平分别是0.259±0.129,0.032±0.002和0.104±0.007,较Lipo组(0.347±0.007)和HMGB1/p-NC组(0.349±0.007)明显减少(P<0.05),最大抑制率分别达25.4%,90.8%和70.0%。实验组在接种后48 h,穿过Transwell小室膜的细胞数显著少于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P<0.05)。划痕愈合实验亦显示实验组划痕愈合率明显低于HMGB1/p-NC组和Lipo组(P<0.05)。结论:靶向干扰HMGB1的shRNA可以抑制HMGB1的表达,转染后的子宫内膜癌细胞侵袭与迁移能力明显下降。

牛蒡子苷元对子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖抑制作用及机制

目的:探讨牛蒡子苷元(ARG)对子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖抑制作用及机制。方法:HEC-1B细胞分为观察组和对照组,观察组用终浓度为10、20、30、40、60、100μmol/L的ARG干预,对照组用0.5%二甲基亚砜(DMSO)干预。48 h后,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:10、20、30、40、60、100μmol/L ARG干预48 h,HEC-1B细胞的相对生存率分别为(92.36±0.52)%、(89.59±0.74)%、(78.49±0.68)%、(56.47±0.59)%、(40.12±0.69)%、(37.52±0.58)%,且随着ARG作用浓度的升高,HEC-1B细胞的相对生存率呈逐渐降低趋势,差异有统计学意义(P<0.05),干预48 h HEC-1B细胞50%抑制浓度(IC50)为50μmol/L。对照组和观察组(50μmol/L ARG)细胞凋亡率分别为(2.89±0.56)%、(26.58±3.26)%,观察组细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。但观察组细胞周期分布与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组(50μmol/L ARG)细胞p65、p-IκB-α蛋白表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),2组间IκB-α蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ARG可抑制HEC-1B细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制与可能与降低NF-κB通路相关蛋白表达水平,抑制NF-κB通路活化有关。

MOB1B过表达对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及机制研究

目的 子宫内膜癌(Endometrial Cancer, EC)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,但其发生发展的分子机制目前尚不十分明确。MOB1B(Mps One Binder Kinase Activator 1B)是Hippo通路激酶级联反应的核心组成部分,是一个肿瘤抑制因子,而其在EC中的分子作用尚未有文献报道。尝试阐明MOB1B对EC细胞生物学行为的影响及可能的分子机制,将为临床治疗EC提供新的实验依据和理论基础。方法 利用starBase数据库分析MOB1B、CCND1(Cyclin D1)和XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis)在EC中的mRNA表达水平,以及运用在线生物信息学软件Kaplan-Meier Plotter分析MOB1B的表达水平与EC患者生存率的关系;qRT-PCR和Western Blot检测EC细胞系Ishikawa中转染MOB1B过表达质粒后MOB1B、CCND1和XIAP的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8、细胞集落形成、Transwell和划痕实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力。结果 starBase数据库分析发现:在EC患者肿瘤组织中MOB1B的mRNA表达水平显著降低(P<0.05);利用Kaplan-Meier Plotter数据库进一步分析后发现:MOB1B低表达的EC患者生存率明显降低(P<0.05);在EC细胞中转染MOB1B过表达质粒后,MOB1B的mRNA和蛋白表达水平显著升高,而促癌因子CCND1和XIAP的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与对照组相比,过表达MOB1B后EC细胞的增殖、侵袭和迁移能力被显著抑制(P<0.05)。结论 MOB1B过表达可抑制EC的细胞增殖、侵袭和迁移能力,其分子机制可能与抑制促癌因子CCND1和XIAP的表达有关。

高迁移率族蛋白B1过表达对子宫内膜癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMG)B1过表达对子宫内膜癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制。方法:将对数生长期的Ishikawa细胞分为三组:pcDNA3.0组、pcDNA3.0-HMGB1组与对照组。pcDNA3.0组、pcDNA3.0-HMGB1组分别转染pcDNA3.0载体与pcDNA3.0-HMGB1载体,对照组以等体积的磷酸盐缓冲液进行转染。采用MTT法检测细胞增殖指数、Transwell小室检测细胞侵袭与转移指数、流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期、Western blot检测蛋白表达。结果:转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的细胞增殖指数高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05),细胞凋亡指数低于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的G_(0)/G_(1)期比例高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05),S期和G_(2)/M期比例低于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的细胞侵袭与转移指数高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。转染后36、72 h,pcDNA3.0-HMGB1组的B细胞特异性小鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)、HMGB1蛋白相对表达水平高于pcDNA3.0组与对照组(均P<0.05)。结论:HMGB1过表达能促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、转移及Bmi-1蛋白表达,抑制细胞凋亡,调节细胞周期。

IFN-α1b对人子宫内膜腺癌细胞系JEC增殖的影响及机制

目的 研究 IFN-α1b对子宫内膜腺癌细胞系 JEC增殖及细胞周期的影响。方法 不同浓度的IFN-α1b作用24h后,通过细胞计数观察对 JEC的抗增殖效应,应用流式细胞技术分析细胞周期改变和细胞周期调控因子 p21,cyclin A和cyclin E的表达。结果 不同浓度的 IFN-α1b对 JEC均有抗增殖作用,其中500 U/ml抗增殖作用最强。流式细胞仪(FCM)检测显示S期细胞积累,p21的表达增加和 cy clin A表达减少,而cyclin E的表达增加。结论 IFN-α1b能够抑制子宫内膜腺癌细胞系JEC的增殖,其机理可能与 p21的表达增加和cyclin A表达减少,导致S期细胞积累有关。

沉默HMGB1对子宫内膜癌细胞生物活性和MMP-9、VEGF表达的影响

目的探讨沉默高迁移率族蛋白(HMG)B1对子宫内膜癌细胞生物活性和基质金属蛋白酶(MMP)-9、血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法选取子宫内膜癌患者83例分为转移组(25例)及未转移组(58例),选取同期健康子宫内膜病理检查患者40例为健康组,将HEC-1A细胞分为KK组(空白组)、BB组(HMGB1空转染组)、ZZ组(HMGB1 siRNA转染组);免疫组化检测HMGB1阳性率;逆转录(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测HMGB1、MMP-9 mRNA表达;噻唑蓝(MTT)、流式细胞仪及Transwell法检测HEC-1A细胞增殖、凋亡及迁移能力;Western印迹检测VEGF、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)7蛋白表达水平。结果健康组HMGB1阳性率明显低于转移组及非转移组(均P<0.05),非转移组HMGB1阳性率明显低于转移组(P<0.05);HMGB1、MMP-9 mRNA表达水平在KK组与BB组HEC-1A细胞中表达差异无统计学意义(P>0.05),ZZ组HEC-1A细胞中HMGB1、MMP-9 mRNA表达水平较KK组、BB组明显升高(P<0.05);KK组与BB组HEC-1A细胞在0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 d时A值比较无明显差距(P>0.05);在各时间点ZZ组HEC-1A细胞A值明显低于KK组、BB组(P<0.05);48 h时KK组HEC-1A细胞凋亡率与BB组差异无统计学意义(P>0.05);ZZ组HEC-1A细胞凋亡率明显高于KK组与BB组(P<0.05);KK组HEC-1A细胞迁移数量与BB组差异无统计学意义(P>0.05);ZZ组HEC-1A细胞迁移数量较KK组与BB组明显减少(P<0.05);VEGF、IGFBP7在KK组、BB组HEC-1A细胞中的表达差异无统计学意义(P>0.05);ZZ组HEC-1A细胞中VEGF、IGFBP7表达水平明显低于KK组与BB组(P<0.05)。结论沉默HMGB1后子宫内膜癌细胞的生物活性降低,凋亡加剧,其作用机制可能与降低了MMP-9、VEGF、IGFBP7表达水平有关。

氧化苦参碱通过调控SIRT1-TSC2抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞生长及Wnt信号通路的研究

目的探究氧化苦参碱通过调控SIRT1-TSC2抑制人子宫内膜癌HEC-1B细胞生长及Wnt信号通路。方法采取MTT法对不同浓度50、100、200、400μmol/L下氧化苦参碱对HEC-1B细胞抑制率;氧化苦参碱+pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、氧化苦参碱+pcDNA3.1-SIRT1-TSC2组(转染pcDNA3.1-SIRT1)均用脂质体法转染,加入氧化苦参碱(200μmol/L)处理;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法、Western blotting法对细胞内信息调节因子1(SIRT1)、TSC2、β-catenin、c-Myc的mRNA水平与蛋白表达分别进行检测和评估,予以流式细胞术对细胞凋亡率进行检测。结果相比对照组,予以不同浓度50、100、200、400μmol/L下氧化苦参碱各组的细胞增殖抑制率与凋亡率均呈增高趋势(P<0.05),氧化苦参碱(200μmol/L)组细胞内SIRT1、TSC2的mRNA和蛋白水平均呈显著降低趋势(P<0.05);过表达SIRT1-TSC2可逆转氧化苦参碱对HEC-1B细胞增殖、Wnt信号通路失活效果。结论氧化苦参碱可调控SIRT1-TSC2抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,其促凋亡机制可能与失活Wnt信号通路有关,为子宫内膜癌的早期诊治提供新的策略。

ASF1B对子宫内膜癌细胞恶性行为的影响及相关机制

目的探究ASF1B在子宫内膜癌中的表达情况及其与细胞恶性行为的关系。方法收集68例子宫内膜癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,qPCR检测组织中ASF1B的表达水平。培养人子宫内膜癌细胞HEC-151及KLE,通过细胞转染技术将HEC-151细胞分为对照组、过表达组及回复组;KLE细胞分为无意义组及干扰组;Transwell实验检测各组细胞侵袭迁移能力;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;Western Blotting及qPCR检测各组细胞中ASF1B、FOXM1、CDK6及VEGFB的表达含量。结果qPCR结果提示ASF1B在子宫内膜癌组织中表达水平显著升高,并与患者高临床分期、淋巴结转移及预后不良相关,相关性分析发现ASF1B与FOXM1表达正相关(P<0.05);相比对照组,过表达组细胞体外增殖及转移能力显著增强,FOXM1、CDK6及VEGFB的蛋白表达水平显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);而相比过表达组,回复组细胞体外增殖及转移能力显著减弱,FOXM1、CDK6及VEGFB的蛋白表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。相比无意义组,干扰组细胞体外增殖及转移能力显著减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。FOXM1、CDK6及VEGFB的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ASF1B可促进FOXM1的表达,并促进子宫内膜癌细胞的增殖及转移能力,增强其恶性表型。