绵羊绒毛膜滋养层细胞与子宫内膜腔上皮细胞共培养体系的建立

本研究旨在探索绵羊绒毛膜滋养层细胞(sheep trophoblast cells, STCs)和子宫内膜腔上皮细胞(endometrial luminal epithelial cells, ELECs)的共培养条件,为绵羊胎盘绒毛膜滋养层多核细胞的形成提供试验依据。在屠宰场采集妊娠45～60 d的健康绵羊子宫及胎盘组织,用酶消化法体外分离培养STCs和ELECs,并进行细胞免疫荧光鉴定,同时利用姬姆萨氏染色法确定STCs和ELECs最佳的共培养条件;然后转染空质粒pEGFP-C1到ELECs 48 h后,与STCs共培养,并利用激光共聚焦显微镜观察滋养层多核细胞的形态。结果显示:STCs CK-7与ELECs CK-18均呈阳性;当STCs与ELECs细胞数量比值为2∶1,共培养48 h,多核细胞数量最多,且与对照组相比差异显著(P<0.05);CK-7在STCs中表达呈红色荧光,且细胞中有pEGFP-C1标记的绿色荧光,胞核蓝染,3种荧光共表达呈现出了白光。综上表明,本研究建立了STCs和ELECs共培养条件,ELECs参与绵羊滋养层多核细胞的形成。