益母草药材生物检定方法的研究(Ⅰ)——动物标准子宫模型建立和测定环境因素筛选

目的:研究益母草缩宫效应,建立动物标准子宫模型,优选影响益母草缩宫效应的环境因素。方法:通过比较益母草对小鼠、大鼠、家兔离体子宫的缩宫效应,确定益母草药材生物检定的标准子宫模型;运用正交试验,对影响益母草缩宫效应的主要环境因素进行筛选。结果:以动情前期大鼠离体子宫为标准子宫模型,益母草药材生物检定最佳环境条件为:子宫负荷1 g,浴液温度32℃,每 1000 ml子宫蓄养液CaCl_2和NaHCO_3含量分别为0.06g和0.25g。结论:优选后的条件,益母草缩宫效应明显,检定误差较小。

2450MHz微波对子宫模型内照射的比吸收率(SAR)分布

通过模型实验，应用热测量法测定了实际尺寸的模拟子宫腔受２４５０ＭＨｚＶ形天线辐照时的ＳＡＲ分布．实验结果表明，腔内最大受热内区域并非出现在子宫腔底部，而是出现在天线馈电点附近，该处每瓦净功率产生的ＳＡＲ为３３．２Ｗ／ｋｇ，为宫腔底的２．７倍．因此在临床应用时，如果输入功率过大。

腹腔镜仿真子宫模型在妇科住院医师培训中的应用

目的对比多角度缝合腹腔镜仿真子宫模型和传统外科手术模型的训练效果,探索出更适用于妇科住院医师培训的腔镜模型。方法选择2021年2月至2023年2月在浙江大学医学院附属邵逸夫医院培训的住院医师48名,分批训练,每批随机平均分为两组,观察组运用传统外科手术模型和普通手术视频进行训练,试验组运用本研究组成员自主研发、可多角度缝合的腹腔镜仿真子宫模型和配套手术视频进行训练。最后对比两组住院医师考核成绩以及对试验组进行问卷调查。采用SPSS 20.0统计软件对结果进行t检验或卡方检验。结果两组住院医师在年龄、性别分布、学历、临床经验方面差异无统计学意义。试验组[(82.63±3.93)分]和观察组[(85.00±6.15)分]理论成绩差异无统计学意义(P>0.05)。在技能考核上,两组前壁考核差异无统计学意义[(83.08±4.47)分vs.(82.79±3.58)分,P=0.804]。但在侧壁和后壁考核时,试验组熟练度、精确度和双手协调程度均优于观察组,总分差异有统计学意义[(64.13±3.34)分vs.(46.75±3.50)分,(62.25±4.41)分vs.(45.00±2.89)分,P<0.001]。在调查问卷中,试验组对腹腔镜仿真子宫模型的满意度高,认为模型仿真度高,可从中受益。结论多角度缝合的腹腔镜仿真子宫模型相较于传统外科模型,能高质量地提高住院医师操作水平,为今后妇科住培腹腔镜模型训练提供了新思路。

临床医学本科生使用子宫三维血管软体模型学习产后出血止血技术的效果评价

目的:使用子宫三维血管软体模型培训实习医师产后出血6项止血技术,并评价效果。方法:2014年1月-2015年1月在本院实习的本科生60名,随机分为研究组和对照组30名,学习6项止血技术,分别使用模型和常规教学视频和图片教学3小时,学习后1h、1周和1月分别考核。结果:学习后1h考核,研究组的合格比率较对照组高;培训后1周和1月,合格人数和比例均有下降,但对照组更明显。结论:使用模型培训效果良好,值得推广。

四物汤对小鼠离体子宫收缩模型的生物效应及物质基础评价研究

目的分析评价四物汤及各分离部位（SW-1～SW-15）对小鼠离体子宫收缩的拮抗效应，并探讨各部位物质基础与效应之间的关系。方法采用大孔吸附树脂法分离制备各部位样品（SW-1～SW-15）；采用小鼠离体子宫收缩模型评价该方及各部位的生物效应；采用HPLC，DAD-ESI-MS法对活性显著部位SW-4中的主要色谱峰进行分析鉴定。结果四物汤拮抗子宫平滑肌收缩的活性部位主要贡献者是SW-4、SW-7、SW-113个部位，部位SW-8、SW-10、SW-13、SW-14也有一定的活性；通过标准化舍物对照及质谱特征对活性显著部位SW-4色谱峰进行了归属和指认，鉴定了其中9个化合物分别为没食子酸、原儿茶酸、香草酸、咖啡酸、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H。结论四物汤拮抗离体子宫收缩效应源于挥发油部位及除去生物大分子的水溶性部位；水溶性小分子部位经大孔树脂吸附醇梯度洗脱得到了30％-40％（SW-7—8）、60％-80％（SW-10—12）两段活性部位。

胶艾汤与四物汤对子宫出血模型大鼠保血功效的比较研究

胶艾汤首载于东汉张仲景《金匮要略》，四物汤首载于唐蔺道人《仙授理伤续断秘方》，由胶艾汤减阿胶、艾叶和甘草三味，干地黄易为熟地，芍药定为白芍而成。胶艾汤衍化为四物汤，主治病症由漏下、半产出血及妊娠下血、妊娠腹痛衍化为血虚血瘀、月经不调。前期试验研究表明胶艾汤衍化为四物汤后活血功效增强［1］，本实验采用子宫出血动物模型评价胶艾汤衍化为四物汤前后的保血效应，以期为阐明两方衍化配伍机制［2］和临床合理用药提供依据。

桂枝茯苓丸对子宫内膜异位症模型大鼠血管内皮生长因子表达的影响

目的采用皮下移植自体子宫内膜组织的方法建立大鼠子宫内膜异位症模型,观察桂枝茯苓丸对大鼠子宫内膜异位症模型血管内皮生长因子表达的影响。方法 50只大鼠随机分为空白对照、模型组、米非司酮组、桂枝茯苓丸A、B组,其中模型组、米非司酮组及桂枝茯苓丸A、B组均制作大鼠子宫内膜异位症模型。术后桂枝茯苓丸A、B组用桂枝茯苓丸灌胃治疗21 d,米非司酮组灌阳性药米非司酮,空白对照组及模型组灌等体积生理盐水。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定大鼠子宫内膜组织VEGF及mRNA、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及HIF-1 mRNA表达,测定血清雌二醇(E2)及白介素-8(IL-8)水平,免疫组织化学法检测细胞增殖核抗原(PCNA)、雌激素受体(ERα)。结果桂枝茯苓丸A、B组VEGF及mRNA、HIF-1α及HIF-1 mRNA在子宫内膜组织上表达下调,E2、IL-8水平及PCNA、ERα表达量均明显降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论桂枝茯苓丸可抑制模型大鼠异位内膜的生长与血管生成,减轻子宫内膜异位症血管内皮炎症反应,对实验性大鼠子宫内膜异位症有治疗作用。

正交试验优化大鼠子宫内膜异位症模型

目的通过正交试验优化子宫内膜异位症大鼠模型的制备方法。方法采用自体移植法复制大鼠子宫内膜异位症模型和四因素二水平的正交设计,以移植物体积大小为评价指标,观察不同影响因素对大鼠子宫内膜异位症模型形成的影响及病理形态学变化。结果子宫内膜最佳种植部位在子宫旁韧带。发情情况及子宫内膜种植方向对实验结果的影响不明显。内膜不与肌肉层分离和外加雌激素对大鼠异位内膜生长起着关键性的作用。4个影响因素重要性依次为注射雌激素>不分离肌肉层>种植方向、发情情况。结论通过优化试验方法,可有效提高子宫内膜异位症大鼠模型的造膜效果,为科学评价子宫内膜异位症的药物研究提供技术平台。

金草片对子宫肌瘤模型大鼠免疫功能的干预作用

目的:探讨金草片对子宫肌瘤模型大鼠免疫功能的干预作用及该模型与临床发病机制的相关性。方法:大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组,金草片高、中、低剂量组,以雌激素和雌、孕激素肌肉注射造成大鼠子宫肌瘤模型,观察模型大鼠胸腺、脾脏、子宫和卵巢质量,用流式细胞仪测定其T细胞亚群CD3,CD4和CD8的水平,用放射配体结合分析法测定雌激素受体水平,进行子宫组织的病理检查。结果:模型组大鼠表现出其免疫器官胸腺质量降低,子宫质量增加,卵巢质量降低;CD3,CD4和CD4/CD8明显降低,CD8明显升高;雌激素及其受体水平升高;子宫组织呈明显病变,金草片剂量组与模型组比较,检测各指标差异显著。结论:金草片对模型大鼠的免疫功能低下状态表现为明显对抗作用,调节免疫功能可能是其治疗子宫肌瘤的作用机制之一。

大鼠子宫肌瘤两种模型比较与免疫功能的相关性研究

目的:比较雌激素和雌、孕激素合用所致大鼠子宫肌瘤模型与其免疫功能的相关性。方法:分别以雌激素和雌、孕激素肌肉注射造成大鼠子宫肌瘤模型,并在此模型上观察大鼠免疫器官,用流式细胞仪测定其T细胞表面分化群CD3、CD4和CD4/CD8的水平,用放射配体结合分析法测定雌激素受体水平。结果:雌、孕激素致大鼠子宫肌瘤模型表现出其免疫器官胸腺重量降低;CD3、CD4和CD4/CD8明显降低,CD8明显升高;雌激素及其受体水平升高。结论:雌、孕激素致子宫肌瘤模型大鼠表现为免疫功能明显低下,雌激素受体水平是其主要影响因素之一。

大鼠子宫异位症模型建立方法的比较

目的将自体子宫内膜组织同时种植于大鼠体内三个不同部位,建立的子宫内膜异位症模型进行比较评估。方法取30只雌性未交配性成熟大鼠,将自体子宫内膜组织种植于左侧腹壁、子宫卵巢韧带和右侧皮下筋膜层与腹壁肌层间,术后第21天取出异位组织,进行组织形态学观察。结果异位内膜可以在大鼠不同部位同时生长,体积和重量均无显著性差异,其种植成功率差异不显著(93%～100%),且种植物组织形态相似。结论此手术方法建立的大鼠子宫内膜异位症模型异位内膜病理改变与EMs患者类似,但皮下种植更简单,更直观,可减小损伤,便于反复实验及连续性观察研究。

丹赤胶囊对子宫内膜异位症模型大鼠腹腔液中IL-8和TNF-α水平的影响

[目的]研究丹赤胶囊对子宫内膜异位症模型大鼠腹腔液中白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的影响。[方法]实验分为丹赤高、中、低剂量组、空白对照组及丹那唑对照组。采用ELISA法,观察子宫内膜异位症模型大鼠腹腔液中IL-8和TNF-α的水平。[结果]丹赤大、中剂量组明显降低IL-8水平,丹赤大剂量组明显降低TNF-α的水平。[结论]丹赤胶囊通过降调参与子宫内膜的黏附种植—血管生成—侵润发展这3个阶段的细胞因子的水平及活性,抑制子宫内膜细胞的黏附、种植和进一步生长。

大黄虫对药对雌孕激素负荷大鼠子宫肌瘤模型雌激素及其受体的影响

目的:研究大黄、虫对大鼠子宫肌瘤模型雌激素(E)及其受体(ER)的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、大黄虫小剂量组、大黄虫中剂量组、大黄虫大剂量组、大黄虫丸组、桂枝茯苓胶囊组,采用雌孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型,放射免疫法测定各组大鼠血清E水平,免疫组化观察大鼠子宫平滑肌细胞ER的表达。结果:与模型组相比,各治疗组血清E含量及子宫ER均下降(P<0.05),大黄虫可降低血清中E水平,抑制平滑肌细胞ER的表达。结论:大黄虫对药通过调节E、ER抑制子宫肌瘤生长。

大黄、虫对药对雌孕激素负荷大鼠子宫肌瘤模型ERα、ERβ的影响

目的:探讨大黄、虫对药对雌、孕激素负荷大鼠子宫肌瘤模型雌激素受体亚型ERα、ERβ的影响及作用机理。方法:70只SD雌性大鼠随机分成正常对照组、模型组、大黄虫小剂量组、大黄虫中剂量组、大黄虫大剂量组、大黄虫丸组、桂枝茯苓胶囊组。采用雌、孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型,用SABC免疫组化法测定大鼠子宫平滑肌细胞ERα、ERβ的表达水平。结果:模型大鼠子宫平滑肌细胞ERα、ERβ的表达显著增高(P<0.01),各治疗组的ERα、ERβ较模型组均下降(P<0.01)。结论:大黄、虫对药可抑制子宫肌瘤平滑肌细胞ERα、ERβ的表达,这可能是该药治疗子宫肌瘤的主要机理之一。

金草片对子宫肌瘤模型大鼠子宫组织一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨金草片对子宫肌瘤模型大鼠子宫组织一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,及该模型与临床发病机理的相关性。方法:以雌激素和雌、孕激素肌肉注射造成大鼠子宫肌瘤模型,测定子宫组织的总型NOS和诱导型NOS(iNOS)的水平;用放射配体结合分析法测定子宫组织雌激素受体(ER)水平;用放射免疫法测定血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平。结果:模型组大鼠子宫组织总型NOS和诱导型iNOS表达均明显增强,E2、ER和P水平升高;P水平与NOS表达相关,与iNOS表达不直接相关。金草片组可明显降低子宫组织NOSi、NOS和ER表达,降低血清E2和P水平,与模型组比较差异显著。结论:金草片可抑制子宫肌瘤模型大鼠子宫组织NOS表达,其作用可能是该品种治疗子宫肌瘤的作用机理之一。

大黄、虫对药对雌孕激素负荷大鼠子宫肌瘤模型孕激素及其受体的影响

目的研究大黄、虫对大鼠子宫肌瘤模型孕激素及其受体的影响。方法将70只SD大鼠随机分为7组:正常对照组、模型组、大黄虫小剂量组、大黄虫中剂量组、大黄虫大剂量组、大黄虫丸组、桂枝茯苓胶囊组,采用雌孕激素负荷法建立大鼠子宫肌瘤模型,放射免疫法测定大鼠血清孕激素(P)水平,免疫组织化学染色观察大鼠子宫平滑肌细胞孕激素受体(PR)的表达。结果模型大鼠血清中P水平,子宫平滑肌细胞PR的表达明显高于正常大鼠,大黄虫可降低血清中P水平,抑制平滑肌细胞PR的表达。结论P及PR在子宫肌瘤生长中起重要作用,这可能是大黄虫治疗子宫肌瘤的机理之一。

子宫肌瘤动物模型相关生物标记物的研究

目的:寻找与大鼠子宫肌瘤模型相关的生物标记物,探讨标志模型成功及药物有效性评价的动态和无损伤性指标。方法:采用基于核磁共振谱(NMR)的代谢组学方法,动态收集大鼠子宫肌瘤模型造模不同时间点的尿液,测定其NMR,并结合组织病理学检查,验证其生物标记物。结果:与空白组比较,在造模不同时间点,模型组大鼠尿液的代谢状态和代谢产物表型有显著性差异,其尿液中与模型相关的乙酸酯、牛磺酸、二甲胺和氧化三甲胺的NMR谱峰在造模后8周有显著改变;空白组、模型组和米非司酮组在主成分分析图上可明显分开,其中米非司酮组位于模型组和空白组之间;同时在造模不同时间点,子宫组织出现不同程度的病理改变。结论:NMR图谱中的谱峰变化能反映不同造模阶段的整体状态,其中乙酸酯、牛磺酸、二甲胺和氧化三甲胺的谱峰改变可作为子宫肌瘤大鼠模型的早期生物标记物及药物有效性评价的动态观察指标。

亮丙瑞林与缩宫素对大鼠子宫内膜异位症模型的疗效比较

目的探讨亮丙瑞林和缩宫素对大鼠子宫内膜异位症模型的治疗作用及其对卵巢功能的影响。方法通过自体子宫移植方法建立大鼠腹壁子宫内膜异位症模型。将建模成功的SD大鼠随机分为实验组A(n=15),实验组B(n=15)和对照组C(n=15)。实验组A每天皮下注射亮丙瑞林20μg/kg,共28 d;实验组B每天肌内注射缩宫素160μg/kg,共28 d;对照组C每天皮下注射生理盐水0.1 ml,共28 d。末次给药24 h内,剖腹测量各组大鼠异位病灶的体积,应用RT-PCR检测大鼠异位病灶组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达量,称量大鼠右侧卵巢湿重,HE染色镜下观察右卵巢卵泡数量。结果 (1)治疗前,A、B两组大鼠异位病灶体积(43.39±11.95 mm^3、43.39±10.96 mm^3)与对照组C(42.52±6.14 mm^3)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗4周后,A、B组大鼠异位病灶体积(13.06±3.22mm^3、13.82±2.98 mm^3)较对照组C(39.31±7.45 mm^3)明显减小(P<0.05),A组较B组低,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)治疗4周后,A、B组大鼠异位病灶组织中VEGF mRNA相对表达量(0.24±0.03、0.38±0.05)均较对照组C(0.96±0.01)明显下降(P<0.05);B组中VEGF mRNA表达量高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)治疗后,A组大鼠卵巢湿重显著低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组大鼠卵巢中各级发育的卵泡数较C组明显减少,且闭锁卵泡数量增多,差异有统计学意义(P<0.05)。而B组大鼠卵巢湿重及卵泡数量较C组变化不明显。结论缩宫素与亮丙瑞林对大鼠子宫内膜异位症模型具有明显的治疗作用,下调VEGF的表达是其可能作用机制之一,缩宫素治疗子宫内膜异位症不影响大鼠卵巢的储备功能。

两种方法建立大鼠子宫内膜异位症模型的探讨

目的探讨在同一大鼠体内采用2种不同方法建立自体大鼠子宫内膜异位症模型的成模率及异位内膜的临床特征。方法随机抽取16只雌性未交配性成熟大鼠,采用内膜移植法将同一大鼠右侧子宫内膜组织移植于腹壁;采用开放宫腔法将左侧宫腔内膜直接开放于宫骶韧带处。术后第28d开腹比较两组建模情况;取出异位组织进行组织形态学和病理学观察。结果移植法建模成功率为87.5%,开放法建模成功率为62.5%;肉眼观移植法成模后的异位内膜呈隆起紫兰色或干酪样物为主,病灶与周围组织几乎无黏连;宫腔开放法异位灶体积明显增大,局部呈隆起暗红色或透亮的小囊状,异位灶与周围组织黏连严重;术后病理检查与肉眼观察符合率移植法为87.5%,开放法为71.43%,两种方法联合建模符合率为100%。结论自体子宫内膜移植法及开放宫腔法均可成功建立内异症大鼠模型而且移植法优于开方法;两种方法结合可提高建模成功率。

宫宁颗粒调控IUD模型大鼠子宫血管重塑机制的实验研究

目的探讨宫宁颗粒调控IUD(宫内节育器)模型大鼠子宫血管重塑机制。方法选定53只SD雌性大鼠,其中3只备用,余50只随机分为模型组、吲哚美辛组、宫宁颗粒组、假手术组、正常对照组。用免疫组化SP法(链霉菌抗生素蛋白过氧化物酶连结法)检测各组大鼠子宫血管平滑肌细胞(VSMC)表型标志物a-SM-肌动蛋白(a-SM-action)和VSMC增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,计算子宫VSMC增殖率(PCNA/a-SM-action阳性细胞数×100%)。结果宫宁颗粒组aSM-action(%)为45.70±6.20、PCNA为41.32±9.28、PCNA/a-SM-action为0.93±0.26,均接近正常对照组。结论宫宁颗粒是通过调控a-SM-action和PCNA的表达,促使VSMC由病理性合成表型VSMC逆转为生理性收缩表型VSMC,从而使IUD模型大鼠受损的子宫内膜血管由病理性重塑逆转为适应性重塑,进而恢复子宫血管正常生理功能。