米非司酮对孕激素受体M阳性子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的观察米非司酮对孕激素受体M(PR-M)阳性子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法收集因子宫肌瘤行全子宫切除术患者的子宫肌瘤标本,原代培养子宫肌瘤细胞成功后,采用Western blotting法筛选出PR-M阳性细胞(阳性组)和PR-M阴性细胞(阴性组)。取对数生长期的两组细胞,分别加入0、1×10^(-6)、1×10^(-5)、1×10^(-4)mol/L的米非司酮,培养48 h后采用MTT法观察细胞增殖抑制情况,采用流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果米非司酮作用24 h后子宫肌瘤细胞生长明显减慢,细胞开始皱缩,48 h后细胞开始碎解。随米非司酮浓度增加,两组细胞增殖抑制率和凋亡率均逐渐增加(P均<0.05)。当米非司酮浓度>1×10-6mol/L时,阳性组细胞增殖抑制率和凋亡率低于阴性组(P均<0.05)。结论米非司酮用药后PR-M阳性的子宫肌瘤细胞增殖受到抑制、凋亡增多,但与PR-M阴性细胞相比,增殖、凋亡变化程度较小。

左炔诺孕酮对人子宫肌瘤细胞体外增殖与凋亡的影响

目的:建立稳定、成功率高的人子宫肌瘤细胞原代培养方法,探讨不同浓度左炔诺孕酮(levonorgestrel,LNG)对体外培养人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别采用酶解法和贴块法原代培养人子宫肌瘤细胞(uterine leiomyoma cell,UtLMC),以α-Actin单抗进行免疫组织化学染色鉴定原代细胞;细胞传代后,加入不同浓度左炔诺孕酮,H-E染色和透射电镜观察细胞的形态学改变,MTT法检测LNG对细胞增殖的调节作用,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR技术分析LNG对人子宫肌瘤细胞凋亡相关基因Bcl-2、IGF-1及Survivin mRNA表达的影响。结果:酶解法和贴块法均成功获得UtLMC,经免疫组化鉴定,纯度达95%以上,并能稳定传12代;5μg/ml左炔诺孕酮对子宫肌瘤细胞无明显作用,当质量浓度达到10μg/ml时可显著抑制细胞增殖,并呈时间、剂量依赖;随着药物浓度的增加,细胞凋亡率亦逐渐升高,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);10μg/ml和20μg/ml左炔诺孕酮作用UtLMC后,Bcl-2、IGF-1及Survivin mRNA表达下降。结论:酶解法和贴块法均能获得功能良好的人子宫肌瘤细胞,一定浓度的左炔诺孕酮可抑制其增殖并诱导凋亡,机制与下调Bcl-2、IGF-1及Survivin基因表达有关。

橘荔散结丸有效部位对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的观察橘荔散结丸有效部位对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用胶原酶消化法培养子宫肌瘤细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定子宫肌瘤细胞;将不同浓度的橘荔散结丸各提取部位组作用于子宫肌瘤细胞24 h后,用倒置显微镜观察细胞的形态变化,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果原代培养的子宫肌瘤细胞纯度接近100%;基质组对细胞活力无明显影响(P>0.05),而不同浓度的橘荔散结丸提取部位组能显著降低子宫肌瘤细胞的增殖活力(P<0.05),且呈浓度依赖关系(P<0.05);橘荔散结丸醇提物组则能提高其凋亡率(P<0.05)。结论橘荔散结丸的各提取部位组通过降低子宫肌瘤细胞的增殖能力,其醇提物组能诱导子宫肌瘤细胞凋亡而使子宫肌瘤自然缩小或消退,可能是橘荔散结丸治疗子宫肌瘤的主要机理之一。

姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的人子宫肌瘤细胞分为两组,观察组加入终浓度分别为10、50、100μmol/L的姜黄素,对照组加入1‰的二甲基亚砜(DM-SO),分别于培养12、24、48、72 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率。将对数生长期的细胞随机分为3组,A组加入终浓度100μmol/L的姜黄素,B组加入100μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪及100μmol/L的姜黄素,C组加500μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-羟基癸酸脱氢酶(5-HD)及100μmol/L的姜黄素;培养48 h后,分别采用MTT法和流式细胞仪测算细胞增殖抑制率和凋亡率。结果随着姜黄素浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐减低(P均<0.05),而细胞凋亡率逐渐增加(P均<0.05)。A组细胞增殖抑制率和凋亡率分别为75.65%±9.42%、41.82%±6.12%,B组分别为17.66%±2.45%、32.46%±6.71%,C组分别为40.67%±5.46%、74.42%±8.47%,B组与A、C组比较,P均<0.05。结论姜黄素可抑制人子宫肌瘤细胞增殖并促进其凋亡,该作用可能与姜黄素抑制线粒体ATP敏感钾通道有关。

外源性硫化氢对子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察外源性硫化氢对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法将对数生长期的人子宫肌瘤细胞分为对照组和观察组,观察组加入终浓度分别为10-5、10-4、10-3mol/L的硫氢化钠(NaHS),分别于培养12、24、48 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用实时定量PCR和Western blot分别检测p53、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果随着NaHS浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐增加(P均<0.05),细胞凋亡率逐渐增加(P均<0.05)。观察组随着NaHS浓度的增加和作用时间的延长,p53 mRNA和蛋白的表达逐渐增加(P均<0.05),而Bcl-2 mRNA和蛋白的表达逐渐降低(P均<0.05)。结论外源性硫化氢可抑制人子宫肌瘤细胞增殖,促进其凋亡,该作用可能与硫化氢上调p53的表达而下调Bcl-2的表达有关。

子宫肌瘤细胞中孕激素受体M、A/B及porin蛋白表达观察

目的观察子宫肌瘤细胞中孕激素受体M(PR-M)、孕激素受体A/B(PR-A/B)及porin蛋白的表达变化,并探讨其意义。方法子宫肌瘤切除术中切取子宫肌瘤组织及瘤旁正常子宫平滑肌组织后冰上尽快送实验室,原代培养子宫肌瘤细胞和正常子宫平滑肌细胞并鉴定。取第3代子宫肌瘤细胞(实验组)和正常平滑肌细胞(对照组),采用Western blotting法检测细胞中的PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白,分析PR-M、PR-A、PR-B蛋白与porin蛋白表达的相关性。结果实验组细胞中PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白相对表达量分别为0.130±0.012、0.432±0.052、0.456±0.045、0.525±0.082,对照组分别为0.086±0.015、0.223±0.036、0.269±0.026、0.202±0.034,实验组细胞中PR-M、PR-A、PR-B蛋白和porin蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.01)。实验组中PRM蛋白与porin蛋白相对表达量呈正相关关系(r=0.464,P<0.05)。结论子宫肌瘤细胞中PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白表达升高,PR-M、PR-A、PR-B、porin蛋白表达异常可能与子宫肌瘤的发病有关,且PR-M蛋白与porin蛋白可能在子宫肌瘤发病中起协同作用。

含消癥丸大鼠血清对体外培养人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡作用的研究

目的 研究消癥丸抑制人子宫平滑肌瘤(以下简称子宫肌瘤)细胞增殖的作用。方法 用5％、10％、20％ 三种浓度的消癥丸含药血清分别作用于原代培养的子宫肌瘤细胞,用倒置相差显微镜、MTT比色法观察和检测子 宫肌瘤细胞形态变化及增殖情况。结果 含药血清组肌瘤细胞的形态出现明显退行性改变;MTT 法显示:含药血 清组细胞抑制率明显高于完全培养液组和空白血清组(P<0．05),且20％含药血清组细胞抑制率明显高于其他两组 含药血清组(P<0．0 5);在5％-20％浓度范围内,消癥丸含药血清浓度越高细胞抑制率越高。结论 含消癥丸大鼠 血清能抑制人子宫肌瘤细胞的增殖;在5％-20％浓度范围内人子宫肌瘤细胞抑制率存在浓度依赖性。

外源性硫化氢通过ATP敏感钾通道诱导人子宫肌瘤细胞凋亡

目的探讨ATP敏感钾通道(KATP)在外源性硫化氢(H2S)诱导人子宫肌瘤细胞凋亡中的作用。方法用硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体处理原代培养的人子宫肌瘤细胞,KATP通道抑制剂格列本脲(Gly)预处理细胞。实验分为对照组、不同浓度NaHS组、ATP敏感性钾通道(KATP)抑制剂组和Gly+NaHS组。用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用实时定量PCR和Western blot分别检测p53和bcl-2 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,NaHS(10-4和10-3mol/L)处理人子宫肌瘤细胞24和48 h后以剂量和时间依赖的方式增加了细胞的凋亡率(均P<0.05)。与对照组比较,NaHS(10-4mol/L)处理人子宫肌瘤细胞24 h后p53的表达显著增加(P<0.05),而bcl-2表达显著降低(P<0.05)。Gly没有影响人子宫肌瘤细胞的凋亡率、p53和bcl-2的表达,但部分地拮抗NaHS的致凋亡作用以及NaHS诱导的子宫肌瘤细胞中p53表达的上调和bcl-2表达的下调(均P<0.05)。结论外源性H2S诱导子宫肌瘤细胞凋亡,其机制与H2S开放KATP通道有关。

来曲唑通过cAMP-PKA信号通路影响子宫肌瘤细胞中MMP-2和TIMP-2的表达

目的探讨cAMP-PKA信号通路在来曲唑影响子宫肌瘤细胞中MMP-2和TIMP-2表达中的作用。方法cAMP-PKA信号通路抑制剂H-89(10μmol/L)处理原代培养的人子宫肌瘤细胞30 min后,来曲唑(10-8、10-7、10-6和10-5mol/L)处理24、48和72 h。采用实时定量PCR和Western blot分别检测MMP-2和TIMP-2 mRNA和蛋白的表达。结果来曲唑以浓度和时间依赖的方式下调了人子宫肌瘤细胞中MMP-2 mRNA和蛋白的表达,上调了TIMP-2 mRNA和蛋白的表达(P均<0.05)。H-89部分取消了来曲唑诱导的人子宫肌瘤细胞中MMP-2表达的下调和TIMP-2表达的上调(P均<0.05)。结论来曲唑通过cAMP-PKA信号通路影响子宫肌瘤细胞中MMP-2和TIMP-2的表达。

罗格列酮对人子宫肌瘤细胞凋亡和雌激素受体表达的影响

目的:探讨罗格列酮对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法:不同浓度的罗格列酮(10-8,10-7和10-6mol/L)处理原代培养的人子宫肌瘤细胞24,48和72h。用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tet-razolium,MTT)法测定细胞生长曲线,用流式细胞术测定细胞凋亡率,采用放射免疫法测定培养液中雌二醇水平,实时定量PCR和Western免疫印迹分别检测雌激素受体α和β的表达。结果:罗格列酮(10-8,10-7和10-6mol/L)处理48和72h后以浓度和时间依赖的方式抑制了子宫肌瘤细胞的增殖,而罗格列酮(10-8,10-7和10-6mol/L)处理24h对子宫肌瘤细胞增殖的影响没有显著性。罗格列酮(10-8,10-7和10-6mol/L)处理72h以浓度依赖的方式促进了子宫肌瘤细胞的凋亡,同时以浓度依赖的方式降低了子宫肌瘤细胞雌二醇的分泌和雌激素受体α和βmRNA和蛋白的表达。结论:罗格列酮可抑制子宫肌瘤细胞增殖,促进其凋亡,其机制与罗格列酮降低子宫肌瘤细胞雌二醇的分泌和减少子宫肌瘤细胞中雌激素受体α和β的表达有关。

苦参碱通过TLR3下调PI3K/Akt通路抑制子宫肌瘤细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:探讨苦参碱抑制子宫肌瘤细胞凋亡、侵袭和迁移的机制。方法:将子宫肌瘤细胞分为对照组(不做任何处理)、苦参碱低、中、高剂量组(分别用0.5、1.0、2.0 mg/ml的苦参碱处理)、pcDNA3.1/TLR3质粒(TLR3)+高剂量苦参碱组(2.0 mg/ml苦参碱处理)、NC组(转染空质粒+2.0 mg/ml苦参碱处理)。RT-qPCR检测各组细胞TLR3、PI3K mRNA表达;CCK-8法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测各组细胞迁移;Transwell检测各组细胞侵袭能力;Western blot检测各组细胞TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果:与对照组相比,苦参碱低、中、高剂量组TLR3 mRNA、PI3K mRNA、TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9表达及细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与苦参碱高剂量组相比,TLR3+苦参碱高剂量组TLR3 mRNA、PI3K mRNA、TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9表达与细胞增殖、迁移和侵袭能力提高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05),TLR3-NC+苦参碱高剂量组与苦参碱高剂量组TLR3 mRNA、PI3K mRNA、TLR3、PI3K、p-Akt、MMP-2、MMP-9表达、细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论:苦参碱通过下调TLR3表达下调P13K/Akt通路,抑制子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和迁移。

三种药物对体外培养子宫肌瘤细胞增殖凋亡及调控因子影响

目的 :探讨化瘤方、桂枝茯苓胶囊、RU4 86药物血清在体外培养的子宫肌瘤细胞中的作用机制。方法 :制作化瘤方、桂枝茯苓胶囊、RU4 86药物血清作用于体外培养的子宫肌瘤细胞 ,观察药物作用后子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及其对调控因子的影响。结果 :在体外培养的子宫肌瘤细胞中应用化瘤方、桂枝茯苓胶囊、RU4 86药物血清后均能够使细胞的凋亡率增加 ,出现亚G1峰 ,降低S -M期的细胞比例 ,其作用以化瘤方最明显。此外三种药物血清均能降低体外培养的子宫肌瘤细胞的Bcl- 2表达 ,并增强Fas、Fas -L的表达。从基础实验中为药物的疗效性提供了客观依据。

分析雌激素受体(ER)与IP3R在子宫肌瘤细胞中的表达价值

目的分析雌激素受体(ER)与IP3R在子宫肌瘤细胞中的表达价值。方法选择2012年12月至2013年5月于我院治疗的40例子宫肌瘤患者为实验组,并以同期于我院治疗的40例非子宫肌瘤患者作对照组进行观察。比较两组患者治疗前后的雌激素受体(ER)和IP3R水平。结果治疗前对照组患者体内雌激素受体(ER)、IP3R水平明显优于实验组组(P<0.05);手术治疗后实验组患者雌激素受体(ER)、IP3R水平有所好转,但仍比对照组差(P<0.05)。结论子宫肌瘤细胞中雌激素受体(ER)与IP3R在子宫肌瘤的临床中具有特异型,值得临床进一步研究。

米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞作用的形态学观察

目的观察不同浓度米非司酮作用下体外培养的子宫肌瘤细胞的形态学变化,寻找治疗子宫肌瘤的最佳米非司酮浓度。方法光镜及电镜下观察不同浓度米非司酮(10-8～10-4mol/L)下体外培养的子宫肌瘤细胞的其形态学变化。结果 10-8～10-7mol/L米非司酮对细胞生长无影响,10-6mol/L以上浓度肌瘤细胞萎缩,10-4mol/L抑制作用最强。结论米非司酮破坏肌瘤细胞结构,干扰核膜、胞膜、细胞器、及染色体,并与米非司酮浓度成正相关。

来曲唑通过下调bcl-2和上调caspase-3的表达促进人子宫肌瘤细胞调亡

目的探讨来曲唑对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡以及bcl-2和caspase-3表达的影响。方法来曲唑处理原代培养的人子宫肌瘤细胞,用MTT法测定细胞生长曲线,流式细胞术测定细胞凋亡率,放射免疫法测定培养基中雌二醇水平,用实时定量聚合酶链反应和蛋白印迹检测bcl-2和caspase-3表达。结果来曲唑呈浓度和时间依赖性抑制子宫肌瘤细胞的增殖,降低子宫肌瘤细胞的凋亡率,同时呈浓度依赖性降低子宫肌瘤细胞雌二醇的分泌。来曲唑呈浓度依赖性降低bcl-2的表达,增加caspase-3的表达。结论来曲唑抑制子宫肌瘤细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与来曲唑减少雌二醇的分泌、降低bcl-2表达和增加caspase-3表达有关。

米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞增殖与凋亡的作用

目的研究米非司酮(mifepristone,MIF)对体外培养子宫肌瘤细胞(LSMCs)增殖与凋亡的作用。方法应用MTT比色法观察MIF对LSMCs生长的影响;采用DNA缺口原位末端标记法(TUNEL)观察MIF作用前后LSMCs细胞增殖与凋亡变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞Bcl-2、Bax的mRNA水平。结果不同浓度MIF均能抑制LSMCs细胞生长,MIF≥1×10-7mol.L-1对细胞生长产生剂量依赖性抑制作用。用1×10-5mol·L-1的MIF处理72 h后,LSMCs细胞的增殖降低、凋亡率增加,P<0.05;且伴随Bax/Bcl-2表达的上升。结论 MIF具有抑制LSMCs增殖、诱导LSMCs凋亡的作用。

PPAR激动剂罗格列酮对人子宫肌瘤细胞的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROT)对人子宫肌瘤的增值抑制作用及分子机制。方法给予原代培养的子宫肌瘤不同浓度的罗格列酮处理,以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法测定细胞生长抑制率;以半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PPARγm RNA以及凋亡基因Bax、Bcl-2在子宫肌瘤细胞中的表达及罗格列酮对子宫肌瘤细胞增殖活化的影响。结果罗格列酮可抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,呈时间和剂量依赖性。RT-PCR提示罗格列酮可促进PPARγm RNA、Bax表达,抑制Bcl-2表达。结论过氧化物酶增殖物激活受体激动剂罗格列酮抑制子宫肌瘤的增值可能是通过上调PPARγ、Bax的表达及下调Bcl-2的表达来发挥作用的。

妇科再造丸含药血清对人子宫肌瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨妇科再造丸(FKW)含药血清对体外培养人子宫肌瘤细胞凋亡相关蛋白Bax和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响。方法:对人子宫肌瘤细胞进行原代培养、传代并进行鉴定;60只SD雌性大鼠随机均分为空白组(无药血清组),FKW高、中、低剂量组和桂枝茯苓胶囊(GZFL)组,利用各组大鼠制备无药血清和含药血清分别作用于子宫肌瘤细胞72h时,采用WesternBlot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:培养的细胞经鉴定证实为人子宫肌瘤细胞;与无药血清组比较,FKW含药血清各剂量组均能增加Bax蛋白相对表达量,降低Bcl-2蛋白相对表达量(P<0.05或P<0.01),且作用随剂量的增加而有增强的趋势(P<0.05或P<0.01)。结论:FKW含药血清可影响人子宫肌瘤细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,这可能是FKW临床应用时缓解子宫肌瘤症状的机制之一。

选择性COX-2抑制剂celecoxib对子宫肌瘤细胞的增殖抑制及其分子机制

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对子宫肌瘤细胞的增殖抑制作用和分子机制。方法给予原代培养的子宫肌瘤细胞不同浓度的celecoxib处理,MTT法测定细胞生长抑制率;半定量RT-PCR法检测子宫肌瘤细胞Wnt信号通路的关键基因Wnt5b、β-catenin、c-myc的表达及塞来昔布对子宫肌瘤细胞增殖活化的影响。结果塞来昔布可显著抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,随着药物剂量的增加和时间的延长,子宫肌瘤细胞的增殖和活化明显抑制,呈剂量和时间依赖性,而这种作用是通过抑制Wnt信号通路实现的。结论子宫肌瘤细胞中存在Wnt信号通路且celecoxib在体外能抑制此通路活化,从而抑制肌瘤细胞的增殖。

MiR-106b对子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及与SULT2A1的靶向关系

目的:探讨微小RNA(miR)-106b在子宫肌瘤细胞增殖、侵袭和凋亡中的作用与潜在机制。方法:将体外培养的人子宫肌瘤细胞分为阴性对照(NC)组(转染miR-106b模拟物阴性对照)、miR-106b组(转染miR-106b模拟物)、反义(anti)-NC组(转染miR-106b抑制剂阴性对照)和anti-miR-106b组(转染miR-106b抑制剂),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中miR-106b的表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力,Transwell小室检测细胞侵袭,流式细胞仪检测细胞凋亡;生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因实验检测miR-106b和磺基转移酶2A1(SULT2A1)的靶向关系,免疫印迹(Western blotting)法检测miR-106b对SULT2A1蛋白的调控作用。结果:与NC组比较,miR-106b组细胞中miR-106b的表达水平、细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率和SULT2A1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);与anti-NC组比较,anti-miR-106b组细胞中miR-106b的表达水平、细胞存活率、克隆形成率、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率和SULT2A1蛋白的表达水平均明显升高(P<0.05)。生物信息学软件Target Scan预测到miR-106b与SULT2A1 3’UTR存在互补的结合位点;双荧光素酶报告基因实验证实SULT2A1是miR-106b的靶基因。结论:miR-106b可促进子宫肌瘤细胞增殖、侵袭并抑制其凋亡,其作用机制可能与靶向调控SULT2A1表达有关。