大鼠侧脑室注射瘦素对卵巢摘除给予雌激素子宫腔液2-DE图谱分析

瘦素(leptin)通过动物下丘脑-垂体轴对其生殖活动予以调节,但瘦素通过下丘脑对子宫调节作用仍不清楚.本研究在大鼠侧脑室微量注射瘦素6 h后,采用双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分离、鉴定了卵巢摘除给予雌激素的子宫腔液蛋白质表达谱.我们获得了分辨率较高、重复性较好的2-DE图谱;质谱分析结合Swiss Prot蛋白数据库检索,共鉴定了24个差异表达的蛋白质与生理盐水注射(对照)比较,侧脑室微量注射瘦素引起22个蛋白质分子显著上调,2个显著下调.重要的是,在上调的蛋白质分子中包括转铁蛋白、基质金属蛋白酶7、膜联蛋白A1、补体B因子、磷酸甘油酸酯变位酶1、烯醇酶、冠蛋白-1A等15个蛋白质分子,下调的2个蛋白质分子是补体C3、溶解物载体家族4成员3.这些蛋白质分子涉及细胞分化、细胞迁移、细胞凋亡,以及炎症反应等功能.实验结果提示,瘦素可能通过下丘脑-垂体轴参与免疫调节、雌性生殖及炎症反应等,从而对子宫发挥调节作用.本研究将为加深对瘦素调节子宫作用的认识,并为深入研究女性生殖系统疾病提供新的启示.

侧脑室微量注射瘦素对OEP大鼠子宫腔液蛋白表达的影响

目的:探讨瘦素通过下丘脑-垂体轴对子宫的调节作用。方法:应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离OEP大鼠侧脑室微量注射瘦素及生理盐水6h后的子宫腔液总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定。结果:与生理盐水对照组相比,瘦素实验组有6个差异表达蛋白质,其中5个蛋白点升高,1个蛋白点降低。经过质谱分析结合数据库检索,获得有意义的蛋白点,上调蛋白点为补体B因子、冠蛋白、肌动蛋白结合蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1、烯醇酶,下调蛋白点为补体C3。结论:这些差异表达蛋白涉及炎症反应、细胞分化、细胞迁移、细胞凋亡等功能,瘦素可能通过下丘脑-垂体轴从免疫、生殖等方面对子宫发挥调节作用。

侧脑室注射促性腺激素抑制激素/RF酰胺相关肽-3对卵巢摘除术后补充雌激素大鼠子宫腔液影响的蛋白质组学分析

目的运用生物信息学方法分析侧脑室注射促性腺激素抑制激素(GnIH)/RF酰胺相关肽-3(RFRP-3)对卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠子宫腔液蛋白的影响,探索GnIH/RFRP-3影响子宫的分子机制。方法本研究通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术结合生物信息学分析侧脑室微量注射GnIH对OEP模型大鼠(n=30)子宫腔液蛋白的影响。比较侧脑室注射GnIH/RFRP-3实验组(n=15,给予2 g/L RFRP-3,16μl/kg)与生理盐水对照组(n=15,给予生理盐水16μl/kg) 6 h后子宫腔液的蛋白质组分,利用Uni Prot数据库筛选差异蛋白并对所得差异蛋白进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路分析。从STRING数据库获得蛋白相互作用数据,利用Cytoscape 3.7.1软件构建蛋白相互作用网络(PPI)并筛选中心节点蛋白。结果应用LC-MS/MS技术所得质谱数据利用Uni Prot数据库进行搜索鉴定,筛选出差异蛋白419个,其中279个上调,138个下调;GO功能富集分析显示,差异蛋白主要富集于对有机物质的反应,对内源性刺激的反应,对含氧化合物的反应等生物过程;KEGG通路分析显示,差异蛋白在糖酵解、碳代谢、肌动蛋白骨架调节、甲状腺激素合成等代谢途径富集(P<0.05);分析蛋白相互作用网络获得5个中心节点蛋白:白蛋白(Alb)、α-烯醇化酶1(Eno1)、过氧化物酶6(Prdx6)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(Timp1)、Ras相关C3肉毒素底物1 (Rac1)。结论本实验结果提示,GnIH可能通过下丘脑-垂体生殖轴调节子宫腔液蛋白的分泌,并可能通过上调Alb、Eno1和Prdx6,下调Timp1和Rac1,调节子宫生理及病理过程。

侧脑室注射瘦素对OEP大鼠子宫腔液MMP-7蛋白的调节作用

目的:观察侧脑室微量注射瘦素(leptin)对雌性OEP大鼠子宫腔液基质金属蛋白酶-7(MMP-7)的影响。方法:建立卵巢摘除给予雌激素大鼠(OEP)模型,随机分为瘦素注射组(大鼠侧脑室注射瘦素4μl)及生理盐水注射组(大鼠侧脑室注射生理盐水4μl),每组8只大鼠。侧脑室微量注射6h后,提取两组大鼠子宫腔液;采用双向凝胶电泳(2-DE)法分离子宫腔液蛋白,并对其中差异表达蛋白进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术鉴定;最后采用蛋白印迹法比较两组大鼠子宫腔液MMP-7蛋白的表达情况,验证MALDI-TOF-MS的结果。结果:质谱法鉴定经双向凝胶电泳分离的差异目标蛋白为MMP-7;蛋白印迹法显示,瘦素注射组OEP大鼠子宫腔液MMP-7蛋白的表达明显高于生理盐水注射组(P<0.05)。结论:侧脑室微量注射瘦素可在一定时间内对OEP大鼠子宫腔液MMP-7蛋白的表达起到正向调节的作用。

节育器放置前后子宫腔灌洗液铁蛋白测定的意义

本文以育龄期避孕妇女为对象,对放置宫内节育器(节育环)前后的子宫腔灌洗液进行铁蛋白测定,探讨其临床意义,现将结果报道如下。 材料和方法 一、对象:育龄期放置节育环女性40例,年龄23～33岁,平均27.9岁,所有病例均无肝肾疾病、内分泌生殖系统疾病和其他慢性疾病史。 二,方法:月经干净后一周放置宫内节育器,并于放置前后第一个月经周期的增殖期内,在测定宫腔内压的同时,以3ml生理盐水灌注冲洗子宫腔,收集宫腔灌洗液,离心取上清液待测。

一个未知的子宫雌激素反应蛋白ULF-250的鉴定

鉴定一个未知的子宫雌激素反应蛋白ULF-250.去卵巢大鼠补充给予雌二醇造成子宫产生大量宫腔液(uterine luminal fluid,ULF),受雌激素调节的蛋白分泌其中.收集ULF分别进行SDS-PAGE和双向电泳(2-DE)分离;通过Western印迹和2D-Western确认抗ULF-250抗体识别的蛋白成分并与凝胶上的条带或斑点相对应;对目标蛋白分别用MALDI-TOF-MS和HPLC-ESI-MS/MS两种方法进行质谱分析并获得肽段序列数据;与蛋白数据库比对及文献检索鉴定未知蛋白.2D-Western显示抗ULF-250抗体特异识别的蛋白成分.从2D胶上切下对应的蛋白斑点进行MALDI-TOF-MS,结果提示:ULF-250是ebnerin/DMBT1.经SDS-PAGE分离的250 kD蛋白条带进行液-质联用分析,结果同样提示:ULF-250是ebnerin/DMBT1.与文献报道比较,ULF-250与ebnerin/DMBT1在子宫的组织定位和调节是相同的,认为ULF-250是子宫表达的ebnerin/DMBT1.通过2-DE结合质谱分析以及查阅文献,确认未知的雌激素反应蛋白ULF-250是ebnerin/DMBT1.此外,研究提示,该蛋白不仅在子宫上皮细胞表达而且分泌到子宫腔液中,其功能值得进一步研究.