化瘀止痛方及其拆方对人子宫腺肌病细胞OTR mRNA、ERα mRNA的影响

目的观察化瘀止痛方及其拆方对人子宫腺肌病细胞缩宫素受体(OTR)mRNA、雌激素受体α(ERα)mRNA表达的影响。方法将化瘀止痛方及其拆方分为化瘀止痛方高、低剂量组,缓急止痛方高、低剂量组,活血行气方高、低剂量组,另设空白对照组、基质组及米非司酮(RU486)组,每组5例,采用胶原酶消化法培养人子宫腺肌病细胞,采用荧光RT-PCR检测药物干预前后子宫腺肌病病灶细胞OTR mRNA、ERαmR-NA表达的变化。结果与空白对照组比较,各给药组子宫腺肌病细胞的OTR mRNA表达均有不同程度下降,化瘀止痛方高、低剂量组及活血行气高剂量组的OTR mRNA表达显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与RU486组比较,化瘀止痛方高、低剂量组OTR mRNA表达均有不同程度下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与缓急止痛低剂量组比较,化瘀止痛方高、低剂量组OTR mRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,各给药组细胞的ERαmRNA表达均有不同程度的下降,化瘀止痛方高、低剂量组及缓急止痛高、低剂量组的ERαmRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与RU486对照组比较,化瘀止痛方高、低剂量组、缓急止痛高剂量组子宫腺肌病细胞ERαmRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。化瘀止痛方高剂量组与活血行气高剂量组比较,子宫腺肌病细胞ERαmRNA表达显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论化瘀止痛方可能通过降低子宫腺肌病病灶细胞OTR mRNA、ERαmRNA表达,减缓子宫平滑肌的收缩强度,从而缓解患者的痛经症状,在降低子宫腺肌病病灶细胞OTR mRNA表达方面活血行气药贡献值较大,在子宫腺肌病病灶细胞ERαmRNA表达变化中缓急止痛药的贡献值较大。

桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞迁移和侵袭的影响研究

背景子宫腺肌病(AM)是妇科常见的疑难病,但其具体机制尚未明确。中医药治疗AM有一定优势,前期研究显示,桂楼复方宫内缓释系统可明显降低AM模型大鼠子宫内膜细胞增殖、侵袭能力。目的探讨桂楼复方对子宫腺肌病异位内膜细胞(AMDC)迁移、侵袭的影响,并研究其对Rho/ROCK信号通路的影响。方法本研究于2021年10月—2023年4月在山东中医药大学附属医院实验中心完成。使用CCK-8法检测AMDC细胞活力并筛选最佳药物浓度。设置空白组,使用桂楼复方(50、100 mg/L)处理AMDC,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,免疫印迹法Western Blotting)/实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2在蛋白和mRNA水平的表达情况。Rescue实验中使用激动剂U-46619(1μmol/L)和桂楼复方(100 mg/L)处理AMDC,Western Blotting法检测RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达改变情况。结果与空白组比较,100 mg/L桂楼复方干预后AMDC细胞存活率未明显降低,差异无统计学意义(P>0.05),是不影响细胞活性的最佳药物浓度。选取50、100 mg/L桂楼复方进行后续实验。与空白组比较,桂楼复方50 mg/L、100 mg/L组AMDC迁移、侵袭能力受到抑制(P<0.001),RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表达水平下调(P<0.001),U-466191μmol/L组RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达上调(P<0.001)。与U-466191μmol/L组比较,U-466191μmol/L联合桂楼复方100 mg/L组RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表达下调(P<0.001)。空白组与桂楼复方50 mg/L、100 mg/L组RhoB的蛋白及mRNA表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论桂楼复方可有效抑制AMDC的迁移、侵袭能力,不影响细胞活性的最佳药物浓度为100 mg/L,桂楼复方可下调RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表达水平,并可逆转U-46619对RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表达水平的上调作用,从而抑制AM病局部异位病灶的持续进展,其作用可能与调控Rho/ROCK通路密切相关。

加味芍药甘草汤对人子宫腺肌病病灶细胞超微结构及细胞凋亡的影响

【目的】观察加味芍药甘草汤对人子宫腺肌病病灶细胞超微结构及凋亡率的影响。【方法】采用胶原酶消化法培养人子宫腺肌病病灶细胞,采用免疫细胞化学方法鉴定子宫腺肌病病灶细胞,将加味芍药甘草汤分为高、中、低浓度组(浓度分别为40、20、10 mg/mL),另设空白对照组及米非司酮组(浓度为1×10-5mol/L),各组药物作用于子宫腺肌病病灶细胞24、48 h后,采用透射电镜观察细胞超微结构,流式细胞术检测细胞凋亡率。【结果】电镜下加味芍药甘草汤及米非司酮干预后的细胞出现细胞核形态改变,胞浆中溶酶体增多,线粒体及内质网扩张等细胞凋亡早期特点。各组药物干预24、48 h后细胞凋亡率显著升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);米非司酮组、加味芍药甘草汤高浓度组细胞凋亡率与加味芍药甘草汤中、低浓度组比较差异均有统计学意义(P<0.05);加味芍药甘草汤各浓度组干预后24 h与48 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05),具有一定的量效与时效关系。【结论】加味芍药甘草汤治疗子宫腺肌病的作用机制可能与改变人子宫腺肌病病灶细胞超微结构以提高细胞凋亡率有关。

血管内皮生长因子在子宫腺肌病中的表达及意义

目的:观察血管内皮生长因子在子宫腺肌病的腺上皮细胞胞浆中的表达,探讨血管内皮生长因子在子宫腺肌病中的表达意义。方法:方法:选取清远市妇幼保健院手术治疗的患者40例作为观察组,并纳入同时期来本院进行手术的子宫肌瘤患者40例作为对照组。对两组患者组织中的血管内皮生长因子表达水平分为分泌期及增生期的差异进行统计比较。结果:患者的血管内皮生长因子在子宫腺肌病中的位内膜分泌期中在高表达,较在位内膜增生期,差异具有统计学意义(P<0.05)。血管内皮生长因子在腺肌病在位内膜增生期与分泌期的表达均分别高于在正常内膜增生期与分泌期的表达,两组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:子宫腺肌病病灶及在位内膜中血管内皮生长因子的表达上调,所以可以推断血管内皮生长因子参与了子宫腺肌病的发生与发展过程。

骨桥蛋白在子宫腺肌病中的表达及意义

目的应用免疫组织化学S-P法检测骨桥蛋白(OPN)在子宫腺肌病的腺上皮细胞胞浆中的表达,探讨OPN在子宫腺肌病中的表达意义。方法收集来我院手术治疗的子宫腺肌病患者40例作为观察组,纳入同时期来我院进行手术的子宫肌瘤患者40例作为对照组。比较两组患者间组织中OPN表达水平差异。结果OPN在腺肌病在位内膜分泌期中的高表达,较在位内膜增生期,差异有统计学意义(P<0.05)。OPN在腺肌病在位内膜增生期与分泌期的表达均分别高于在正常内膜增生期与分泌期的表达,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论子宫腺肌病病灶及在位内膜中OPN的表达上调,OPN可能参与了子宫腺肌病的发生与发展过程。

基于PI3K/Akt/HIF-1α通路探讨桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用抑制子宫腺肌病进展的作用机制

目的探究桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用(GSG)方案对人子宫腺肌病异位内膜衍生细胞(adenomyosis derived cells,AMDC)异常增殖的抑制作用,评价对子宫腺肌病(adenomyosis,AM)模型小鼠的改善效果,并探讨相关分子机制。方法提取AMDC原代细胞并培养,采用CCK-8法检测GSG对AMDC活力的影响;采用克隆形成实验、EdU增殖检测实验确定GSG对AMDC克隆形成和增殖能力的影响。新生ICR小鼠滴喂他莫昔芬制备AM模型,分为对照组、模型组、复方米非司酮(3.25 mg/kg)组和GSG低、中、高剂量(0.635、1.270、2.539 g/kg)组,给药干预后,采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠子宫、肝、脾和肾的形态学改变;免疫组化法检测子宫组织中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平。结果GSG能有效抑制AMDC活力和克隆形成能力,并呈剂量相关性地抑制AMDC增殖能力(P<0.001)。子宫HE染色结果显示,模型组子宫内膜与肌层边界模糊,多处腺体深度侵入子宫肌层;GSG低剂量组边界欠清晰,有腺体侵入子宫肌层,浸润深度减轻,数量减少;复方米非司酮组和GSG中剂量组边界较清晰,偶见腺体侵入肌层;GSG高剂量组边界清晰,少见明显腺体侵入肌层。免疫组化结果表明,与对照组比较,模型组子宫组织p-PI3K、p-Akt和HIF-1α表达显著增加(P<0.01、0.001);与模型组比较,各给药组p-PI3K、p-Akt的表达显著降低(P<0.01、0.001),复方米非司酮组和GSG中、高剂量组HIF-1α的表达显著降低(P<0.05、0.01)。各组肝、脾和肾形态学均未见明显改变,血清ALT活性和BUN水平无显著性差异。结论GSG方案在体内实验中可通过抑制PI3K/Akt/HIF-1α通路阻断AM进展,所选GSG剂量在动物体内未见明显不良反应,是潜在的AM治疗方案。

重楼皂苷Ⅶ通过调控上皮间充质转化抑制子宫腺肌病异位内膜迁移和侵袭的分子机制

目的:探讨重楼皂苷Ⅶ(PPⅦ)通过调控上皮间充质转化(EMT)抑制子宫腺肌病(AM)异位内膜迁移和侵袭的作用机制。方法:通过生物信息学分析PPⅦ干预AM的关键靶点并通过体内外实验进行验证;他莫昔芬滴喂法建立AM小鼠模型并以PPⅦ进行干预,观察子宫形态学改变,苏木精-伊红(HE)染色观察子宫病理变化,免疫组化检测子宫钙黏蛋白1(CDH1)、钙黏蛋白2(CDH2)、基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达;提取AM异位内膜细胞(AMDC),免疫荧光鉴定特征,CCK-8、Transwell实验检测PPⅦ对AMDC活性、迁移和侵袭能力的影响,RT-PCR和Western Blot检测CDH1、CDH2、MMP2的表达。结果:生信分析共获得381个PPⅦ靶点和1 630个AM差异表达基因,富集分析发现PPⅦ治疗AM主要涉及CDH1、CDH2、MMP2等关键靶点和EMT、迁移等重要生物学过程。体内实验显示与空白组比较,模型组子宫红肿、充血、增粗,子宫内膜-肌层结构紊乱,子宫内膜腺体侵入子宫肌层,子宫组织内CDH1表达显著降低(P<0.01),CDH2、MMP2表达显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,米非司酮和PPⅦ组均可减少子宫内膜腺体侵入子宫肌层的数量,显著增加CDH1、降低CDH2、MMP2的表达水平(P<0.05)。体外实验证实,AMDC细胞具有间充质特性,PPⅦ均可抑制AMDC的迁移和侵袭能力,上调CDH1、下调CDH2、MMP2的mRNA和蛋白表达水平,呈剂量依赖效应。结论:PPⅦ可通过调控EMT进程抑制AM异位内膜的迁移和侵袭能力,为AM的防治与药物的研发提供新的探索方向与证据支持。

桂枝挥发油对子宫腺肌病异位内膜细胞侵袭、迁移的研究

目的:探究桂枝挥发油对子宫腺肌病异位内膜细胞(AMDC)侵袭、迁移能力的影响并探讨其作用机制。方法:免疫荧光法鉴定提取细胞,检测波形纤维蛋白(Vimentin)、细胞角质蛋白7(CK7)、血管性血友病因子(Von Willebrand Factor)、上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(Alpha smooth muscle)荧光表达能力。采用CCK-8法检测桂枝挥发油处理后细胞的活力与毒性,Transwell法检测细胞侵袭能力、损伤划痕法检测细胞迁移能力以及蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析蛋白RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2表达情况。结果:免疫荧光法鉴定细胞Vimentin强阳性,CK7、Von Willebrand Factor、E-cadherin、Alpha smooth muscle弱阳性;与模型对照组相比,桂枝挥发油1 mg/mL组细胞侵袭和迁移能力明显受到抑制,RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:所获细胞为AMDC,桂枝挥发油可抑制AMDC的活性,限制侵袭迁移能力,其机制可能与Ras同源基因/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Rho/ROCK)信号通路有关,参与子宫腺肌病的病理生理过程。

阴道彩色多普勒对妇科疾病的超声诊断与分析

目的应用阴道彩色多普勒技术观察子宫肌瘤、子宫肌腺病、滋养叶细胞瘤的血流变化,探讨彩色多普勒技术在上述疾病中的临床价值。方法子宫肌瘤50例,子宫肌腺病50例,滋养叶细胞瘤40例,正常对照50例,选子宫颈内口水平两旁动脉、肌壁内动脉血流,记录血流阻力指数并观察其变化。结果正常组子宫动脉呈高阻力型动脉连续波,宫壁无明显血流或浆膜下少许星点状血流。子宫肌瘤、子宫肌腺病的子宫动脉阻力较正常组下降。子宫肌腺病的血流信号呈丰富的点状分布,周边无血流信号包绕。滋养叶细胞瘤血流频谱表现特征性低阻力。结论应用阴道彩色多普勒可很好地动态观察子宫动脉、肌壁间血流在子宫肌瘤、子宫肌、子宫肌腺病、滋养叶细胞瘤的血流频谱状态,通过阻力指数值的测定,对子宫肌瘤、子宫肌腺病以及滋养叶细胞瘤的良恶性诊断具有一定的临床价值。