牛蒡子苷元调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究牛蒡子苷元(ARC)通过调控Notch/Hes-1信号通路对口腔鳞状细胞癌(OSCC)HSC-3细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其机制。方法:使用不同质量浓度的ARC处理人HSC-3细胞,CCK-8法检测ARC对细胞增殖活力的影响,以选择适宜的药物浓度。将HSC-3细胞分为对照组、ARC-L组(10 mg/L ARC)、ARC-M组(20 mg/L ARC)、ARC-H组(40 mg/L ARC)和ARC-H+Jagged1/FC组(40 mg/L ARC+1.2μg/mL Jagged1/FC)。采用EdU法检测细胞增殖能力,划痕愈合实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测细胞的迁移、侵袭能力及细胞周期和细胞凋亡率,WB法检测增殖(c-Myc、cyclin D1)、凋亡(BAX、Bcl-2、survivin)、EMT(E-cadherin、vimentin、Snail)及Notch/Hes-1通路(Notch 1、Hes-1、NICD)相关蛋白的表达水平。结果:与0 mg/L相比,10~80 mg/L的ARC均能显著降低HSC-3细胞增殖活力(均P<0.05)。与对照组相比,ARC-L组、ARC-M组和ARC-H组HSC-3细胞EdU阳性率、划痕愈合率、侵袭细胞数、S期和G2/M期细胞占比及c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、survivin、vimentin、Snail、Notch 1、Hes-1和NICD蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞占比及BAX、E-cadherin的蛋白表达均显著升高(均P<0.05),且呈浓度梯度依赖性。同时使用Notch激动剂Jagged1/FC,则可部分逆转ARC对HSC-3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及相关蛋白表达的作用(均P<0.05)。结论:ARC可能通过抑制Notch/Hes-1信号通路抑制OSCC细胞HSC-3增殖和侵袭并促进细胞凋亡。

牛蒡子苷经炎性因子和肠道菌群抑制钛颗粒诱导骨溶解的机制

目的基于炎性因子和肠道菌群的变化,探讨牛蒡子苷(ARC)抑制钛颗粒诱导小鼠颅骨周围骨溶解的机制。方法20只7周龄C57BL/6J雌性小鼠被随机均匀分配到以下组:空白组(SHAM)、骨溶解模型组(Vehicle)、ARC低剂量组(L-ARC)以及ARC高剂量组(H-ARC),每组5只。L-ARC、H-ARC组在Vehicle组基础上分别给予5、10 mg/(kg·d)ARC腹腔注射,SHAM组和Vehicle组腹腔注射等剂量生理盐水,每日1次,共14 d。通过Micro-CT测定小鼠颅骨BMD、BV/TV、Tb.N、BS/BV、Tb.Sp和Tb.Th;ELISA法检测小鼠血清中TRACP5b、CTX、OCN、IL-6、TNF-α和IL-10水平;16S rRNA高通量测序技术分析粪便中菌群结构与丰度变化。结果Vehicle组BMD、BV/TV、Tb.N、BS/BV、Tb.Th、OCN和IL-10较SHAM组显著降低(P<0.01,P<0.05),Tb.Sp、TRACP5b、CTX、IL-6和TNF-α显著升高(P<0.05,P<0.01);L-ARC组BMD、BV/TV、Tb.N、BS/BV、Tb.Th和OCN较Vehicle组有升高趋势(P>0.05),Tb.Sp、TRACP5b和CTX有降低趋势(P>0.05),TNF-α和IL-6显著降低(P<0.05),IL-10显著升高(P<0.05);H-ARC组BMD、BV/TV、Tb.N和IL-10较Vehicle组显著升高(P<0.05,P<0.01),TRACP5b、CTX、IL-6和TNF-α显著降低(P<0.05,P<0.01),BS/BV、Tb.Th和OCN有升高趋势(P>0.05),Tb.Sp有降低趋势(P>0.05)。在门水平,Vehicle组Firmicutes/Bacteroidota(F/B)率较SHAM组有升高趋势(P>0.05);L-ARC和H-ARC组F/B率较Vehicle组显著降低(P<0.01)。在属水平,Vehicle组Ileibacterium丰度较SHAM组有升高趋势(P>0.05),Prevotellaceae_UCG-001和Rikenellaceae_RC9_gut_group丰度有降低趋势(P>0.05);较Vehicle组,经ARC干预后,Ileibacterium丰度显著降低(P<0.05),Prevotellaceae_UCG-001和Rikenellaceae_RC9_gut_group丰度显著增加(P<0.05)。结论ARC可通过抑制炎性反应、调节肠道菌群结构抑制钛颗粒诱导的小鼠颅骨骨溶解,且呈剂量依赖性。

沙苑子苷A对关节软骨细胞凋亡的影响

背景:软骨细胞凋亡是骨关节炎发生发展的重要因素,沙苑子苷A具有类黄酮作用,可抑制多种细胞凋亡,但其对软骨细胞凋亡的影响及作用机制尚不明确。目的:基于Wnt/β-catenin信号通路探讨沙苑子苷A与软骨细胞凋亡的内在关联及作用机制。方法:①收集膝关节置换术中截取的股骨及胫骨部分软骨组织,体外分离培养及鉴定软骨细胞;②通过CCK-8检测沙苑子苷A在0-160μmol/L范围内是对软骨细胞的最佳干预浓度;③将软骨细胞分为空白组、硝普钠(1.5 mmol/L)诱导组、硝普钠(1.5 mmol/L)+沙苑子苷A(5μmol/L)组。采用CCK-8、流式细胞技术检测各组细胞活力、凋亡率;免疫荧光染色检测各组细胞中Ⅱ型胶原蛋白、SOX9表达;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达。结果与结论:①体外提取的细胞经培养、染色鉴定为软骨细胞;②沙苑子苷A在0-80μmol/L浓度范围内对软骨细胞无明显细胞毒性,在2.5-10μmol/L浓度范围内可明显提高软骨细胞活力,且当浓度为5μmol/L时作用较为显著;③硝普钠诱导组软骨细胞凋亡率高于空白组,硝普钠+沙苑子苷A组的细胞凋亡率低于硝普钠诱导组;④硝普钠诱导组软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SOX9荧光强度弱于空白组,硝普钠+沙苑苷A组Ⅱ型胶原蛋白、SOX9的荧光强度高于硝普钠诱导组;⑤硝普钠诱导组Bax、Caspase-3、基质金属蛋白酶13、Wnt3a、Wnt5a和β-catenin的蛋白表达量高于空白组,Bcl-2蛋白表达低于空白组;硝普钠+沙苑子苷A组除Bcl-2的蛋白表达高于硝普钠诱导组外,上述其他蛋白表达均低于硝普钠诱导组。结果表明沙苑子苷A对软骨细胞凋亡具有一定的抑制作用,可调节凋亡相关蛋白、促进软骨细胞调节因子表达,推测可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

牛蒡子苷元对白血病K562/A02细胞耐药性的逆转作用及机制

目的:研究牛蒡子苷元对白血病耐药细胞株K562/A02阿霉素耐药性的影响及其作用机制。方法:体外培养人白血病细胞株K562及阿霉素耐药细胞株K562/A02,使用2.5-50μmol/L阿霉素处理,CCK-8检测细胞生长情况并计算药物半数抑制浓度(IC_(50))。采用不同浓度的牛蒡子苷元(1、2、4、8、16 mmol/L)处理K562/A02细胞,检测牛蒡子苷元对K562/A02细胞的影响,筛选适用浓度用于后续实验。在2 mmol/L牛蒡子苷元处理的K562/A02细胞中加入5μmol/L阿霉素,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测P-gp、MRP、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2以及TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达。在牛蒡子苷元和阿霉素共处理的K562/A02细胞中转染TLR4过表达质粒,检测细胞的药物敏感性和凋亡水平。结果:阿霉素对K562/A02细胞的IC_(50)为36.57μmol/L,高于K562细胞(1.30μmol/L)。当牛蒡子苷元浓度≤2 mmol/L时,K562/A02的细胞生长不会受到明显抑制。经2 mmol/L的牛蒡子苷元处理后,阿霉素对K562/A02细胞的IC_(50)明显降低。与对照组相比,牛蒡子苷元组K562/A02细胞凋亡率明显上升,cleaved caspase-3、Bax蛋白的表达明显上调,P-gp、MRP、Bcl-2、TLR4、My D88和p-NF-κB蛋白的表达明显下调,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在转染TLR4过表达质粒后,牛蒡子苷元处理的K562/A02细胞对阿霉素的敏感性明显降低(P<0.05),细胞凋亡下降,并显著提升了P-gp、MRP、Bcl-2和TLR4/NF-κB信号通路蛋白的表达(P<0.05),同时降低了cleaved caspase-3和Bax蛋白的表达(P<0.05)。结论:牛蒡子苷元可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路从而逆转人白血病耐药细胞株K562/A02对阿霉素的耐药性。

牛蒡子苷元通过调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究牛蒡子苷元调节Hippo-YAP信号通路对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法将人子宫颈鳞癌细胞SiHa分为对照组、低浓度牛蒡子苷元组(5.0μmol/L)、中浓度牛蒡子苷元组(10.0μmol/L)、高浓度牛蒡子苷元组(20.0μmol/L)和高浓度牛蒡子苷元(20.0μmol/L)+TDI-011536组(3μmol/LHippo信号通路抑制剂)。分组处理后,集落形成实验检测细胞活性;Transwell实验检测细胞侵袭;划痕实验检测细胞迁移;免疫荧光技术检测细胞中Vimentin和E-Cadherin;蛋白质免疫印迹技术检测p-YAP、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达。结果与对照组比较,低浓度牛蒡子苷元组、中浓度牛蒡子苷元组、高浓度牛蒡子苷元组SiHa的细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达均降低,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达升高(P<0.05);与高浓度牛蒡子苷元组比较,高浓度牛蒡子苷元+TDI-011536组SiHa细胞存活率、细胞侵袭数、细胞迁移愈合率、细胞中Vimentin荧光强度、YAP、PCNA、MMP-2蛋白表达升高,而E-Cadherin荧光强度和p-YAP蛋白表达降低(P<0.05)。结论牛蒡子苷元可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。

牛蒡子苷元对慢性心力衰竭大鼠心室重构和炎性反应的影响与机制研究

目的 探究牛蒡子苷元(ATG)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心室重构和炎性反应的影响,并分析其潜在机制。方法 79只SD大鼠随机选取12只为假手术组,其余大鼠采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,成功造模60只大鼠随机分为CHF组、ATG低剂量组(ATG-L组,10 mg/kg)、ATG高剂量组(ATG-H组,20 mg/kg)、ATG+阴性对照(ATG+NC)组[20 mg/kg ATG+100μl高迁移率族蛋白B1(HMGB1)阴性对照质粒]、ATG+HMGB1组(20 mg/kg ATG+100μl HMGB1过表达质粒),每组12只。各组给予相应干预4周后,检测大鼠心功能、B型钠尿肽、N末端B型钠尿肽前体和炎性因子白细胞介素6、TNF-α水平、心脏质量指数和左心室质量指数、心肌组织病理变化、心肌细胞横截面积和心肌胶原体积分数、左心室心肌组织HMGB1/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,CHF组大鼠心肌组织HMGB1(0.42±0.05 vs 0.15±0.02)、TLR4(0.70±0.09 vs 0.21±0.04)蛋白水平和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB p65(0.73±0.09 vs 0.26±0.05)蛋白比值显著升高,LVEF、左心室短轴缩短率(LVFS)显著降低(P<0.05);与CHF组比较,ATG-L组和ATG-H组大鼠心肌组织HMGB1(0.33±0.04、0.24±0.04 vs 0.42±0.05)、TLR4(0.56±0.06、0.41±0.05 vs 0.70±0.09)蛋白水平和p-NF-κB p65/NF-κB p65(0.61±0.08、0.49±0.06 vs 0.73±0.09)蛋白比值依次降低,LVEF、LVFS依次升高(P<0.05);HMGB1过表达能明显减弱ATG对HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路和CHF大鼠心室重构、炎性反应的抑制作用(P<0.05)。结论 ATG可能通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号炎性通路,抑制了CHF大鼠的心室重构。

牛蒡子苷元抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响

目的研究牛蒡子苷元抑制Toll样受体4(TLR4)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响。方法构建急性哮喘大鼠模型,随机分为5组(每组12只模型大鼠):模型组、牛蒡子苷元低、高剂量组、脂多糖(LPS,TLR4激活剂)组、牛蒡子苷元+LPS组,以12只Wistar正常大鼠作为对照组。分组处理后,观察各组大鼠哮喘症状并做评分、分类计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、检测各组大鼠肺组织病理变化、血清IgE水平、BALF和血清中白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFN-γ)水平、IFN-γ/IL-4及肺组织TLR4/TRAF6/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织产生严重病理损伤,哮喘症状评分、WAt/Pbm、WAm/Pbm、BALF中巨噬细胞及淋巴细胞计数、血清IgE水平、BALF与血清中IL-4水平、肺组织TLR4、TRAF6表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05),BALF与血清中Th1型细胞因子IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4降低(P<0.05);与模型组相比,各牛蒡子苷元处理组中模型鼠的上述改变均被扭转,且高剂量牛蒡子苷元作用更强;LPS组大鼠各指标变化与牛蒡子苷元处理组相反,另外LPS可逆转高剂量牛蒡子苷元对大鼠各指标的作用。结论牛蒡子苷元可通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号激活而阻止哮喘大鼠气道炎症,促使Th1/Th2免疫平衡向Th1转移,改善大鼠气道重塑和肺损伤。

牛蒡子苷通过ROS/PI3K/Akt/mTOR通路调控宫颈癌细胞的研究

目的探讨牛蒡子苷(arctiin,ARC)对人宫颈癌细胞恶性增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法将不同浓度ARC作用于人宫颈癌细胞Hela,用CCK-8法检测细胞存活情况,筛选最佳抑制浓度;将对数生长期Hela细胞随机分为对照组、ARC组、ARC联合自噬抑制剂(3-MA)组。用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;用DCFH-DA检测各组细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;用透射电镜观察各组细胞自噬小体;反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉菌靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)mRNA和蛋白表达及哺乳动物ATG6同源蛋白(mammalian ATG6 homologous protein,Beclin-1)和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)蛋白的表达情况。结果与对照组比较,ARC组细胞ROS水平、PI3K、Akt和mTOR mRNA、PI3K、p-Akt以及p-mTOR蛋白的表达水平降低,且Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平升高(P<0.05)。3-MA可逆转ARC组上述指标(P<0.05)。结论ARC对人宫颈癌细胞Hela的恶性增殖有一定的抑制作用,并能提高宫颈癌细胞自噬水平,可能是通过调节细胞ROS水平,影响ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用。

沙苑子苷A下调NF-кB信号通路抑制卵巢癌细胞恶性表型的研究

目的 探究沙苑子苷A调控核因子-κB(NF-κB)信号通路对人卵巢癌细胞克隆、黏附及侵袭的影响。方法 体外培养人卵巢癌Caov3细胞,分为对照组(不做干预)及25、50、100、200μg/mL沙苑子苷A组。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)测定细胞活力筛选实验浓度,而后将Caov3细胞分为对照组、实验组(100μg/mL沙苑子苷A)、阳性药物组(100 nmol/L紫杉醇)、激活剂组(100μg/mL沙苑子苷A+1μmol/L NF-κB通路激活剂PMA)和抑制剂组(100μg/mL沙苑子苷A+5μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082),干预24 h。采用平板克隆形成、细胞黏附、Transwell小室、蛋白免疫印迹(WB)法对细胞克隆形成率、黏附数、侵袭数、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)和NF-κB信号通路相关蛋白进行分析。结果 与对照组相比,50、100、200μg/mL沙苑子苷A组细胞活力降低(P<0.05),选择细胞活力接近50%的100μg/mL沙苑子苷进行后续实验。与对照组相比,实验组和阳性药物组细胞克隆形成率、黏附数、侵袭数及Cyclin D1、PCNA、p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达量显著降低(P<0.05)。与实验组相比,BAY 11-7082可增强沙苑子苷A对细胞上述指标的作用,PMA可削弱沙苑子苷A对细胞上述指标的作用(P<0.05)。结论 沙苑子苷A可通过阻断NF-κB通路抑制人卵巢癌Caov3细胞的克隆、黏附、侵袭。

牛蒡子苷改善H9c2心肌肥大细胞的蛋白质组学研究

使用中药改善病理性心肌肥厚,对防治心力衰竭具有重要意义,目前中药牛蒡子苷(arctiin,ARC)对心血管疾病预防和治疗的相关研究备受关注。深入研究ARC干预心肌肥厚过程中蛋白质网络的变化,不仅有助于识别疾病检测的生物标志物和治疗靶点,也为心血管疾病药物研发提供依据。本研究首先利用100 nmol/L异丙肾上腺素(isoprenaline ISO)建立H9c2大鼠心肌细胞肥大模型,接着利用ARC进行处理,然后利用液相色谱质谱串联技术检测ARC处理前后肥大心肌细胞蛋白质组的变化,最后通过对蛋白组进行深入分析获得ARC对肥大心肌细胞影响的信号通路,明确ARC治疗引起的蛋白质组的变化、网络重组和可能的调控机制。为深入研究ARC对肥大心肌细胞治疗机制奠定基础。

牛蒡子苷元通过调控miR-1靶向干预磷酸戊糖途径对人卵巢癌SKOV3细胞的影响

目的:探讨牛蒡子苷元(ARG)通过调控微小RNA-1(miR-1)靶向干预磷酸戊糖途径防治人卵巢癌SKOV3细胞的作用机制。方法:CCK-8法检测ARG对SKOV3细胞活力的抑制率并筛选药物浓度;划痕实验检测细胞迁移能力;集落实验检测各组细胞增殖能力;乳酸和ATP含量测定试剂盒检测各组细胞乳酸含量、ATP含量;DCFH-DA标记法检测细胞内活性氧(ROS)的水平;荧光实时定量PCR法检测各组细胞葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)、6-磷酸果糖激酶(PFK)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PD)和转酮醇酶(TKT)的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞GLUT3、PKM2、PFK、G6PD和TKT蛋白表达水平。结果:与对照组相比,ARG组对细胞有显著抑制作用,且ARG浓度为10 mg/L干预48 h时抑制效果最好;迁移能力和增殖能力显著降低(P<0.01);乳酸含量显著降低(P<0.01),ATP含量显著升高(P<0.05),ROS的含量显著升高(P<0.01),GLUT3、PKM2、PFK、G6PD和TKT的mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01);与ARG组相比,ARG+miR-1 inhibitorNC组各项结果均无显著改变(P>0.05);与ARG+miR-1 inhibitor NC组相比,ARG+miR-1 inhibitor组对细胞有显著抑制作用,ARG浓度为10 mg/L干预48 h后,细胞抑制效果最好;迁移能力及增殖能力显著增强(P<0.01);乳酸含量显著升高(P<0.01),ATP及ROS的含量显著降低(P<0.01),GLUT3、PKM2、PFK、G6PD和TKT的mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:ARG可能通过调控miR-1靶向干预磷酸戊糖途径对人卵巢癌SKOV3细胞具有抑制作用。

牛蒡子苷元对卵巢癌细胞耐药性的影响

目的:探讨牛蒡子苷元对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP细胞耐药性的影响及其可能的作用机制。方法:构建卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP。用不同浓度的牛蒡子苷元(1、5、10、15、20、25 mmol/L)分别处理SKOV3和SKOV3/DDP细胞,CCK-8法检测细胞生长,筛选适用浓度。随后用10 mmol/L牛蒡子苷元处理SKOV3/DDP细胞。流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3/9和Cleaved Caspase-3/9蛋白表达。CCK-8法检测细胞半数抑制浓度(50%inhibition concentration,IC_(50))。RT-PCR和Western blot分别检测Survivin的mRNA和蛋白表达。在牛蒡子苷元处理的SKOV3/DDP细胞中转染Survivin过表达质粒检测IC_(50)和细胞凋亡水平。结果:不同浓度牛蒡子苷元对SKOV3和SKOV3/DDP细胞生长均有抑制作用,并且当牛蒡子苷元的浓度≥10 mmol/L时,对SKOV3/DDP细胞生长抑制作用高于SKOV3细胞(P<0.05)。10 mmol/L牛蒡子苷元的处理显著提升SKOV3/DDP细胞凋亡,增加凋亡蛋白Caspase-3/9和Cleaved Caspase-3/9的表达,降低细胞顺铂IC_(50)值,并抑制细胞中Survivin的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。在转染Survivin过表达质粒后,牛蒡子苷元处理的SKOV3/DDP细胞IC_(50)值显著提升,细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。结论:牛蒡子苷元可能通过抑制Survivin降低卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的耐药性。

牛蒡子苷元抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻单侧输尿管梗阻大鼠肾纤维化

【目的】探讨牛蒡子苷元对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾纤维化的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、牛蒡子苷元低剂量组(10 mg/kg)、牛蒡子苷元高剂量组(20 mg/kg)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)过表达质粒+牛蒡子苷元高剂量组(8μg/kg HMGB1+牛蒡子苷元20 mg/kg),每组12只。各组给予相应干预14 d。应用全自动生化分析仪检测24 h尿蛋白定量(UTP)及血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)水平;苏木素-伊红(HE)染色、Masson染色法分别检测肾组织病理损伤、纤维化程度;酶联免疫吸附分析(ELISA)检测肾组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法检测肾细胞凋亡;蛋白印迹法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen I)、HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠肾组织病理损伤及纤维化严重,24 h UTP、SCr、BUN水平,肾组织IL-1β、IL-6水平,肾细胞凋亡率,肾组织α-SMA、Collagen I、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均升高(P<0.05);与模型组比较,牛蒡子苷元低、高剂量组大鼠肾组织病理损伤及纤维化减轻,24 h UTP、SCr、BUN水平,肾组织IL-1β、IL-6水平,肾细胞凋亡率,肾组织α-SMA、Collagen I、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65蛋白表达水平均降低(P<0.05);牛蒡子苷元高剂量组上述指标低于牛蒡子苷元低剂量组(P<0.05);HMGB1减弱了高剂量牛蒡子苷元对UUO大鼠肾纤维化的改善作用。【结论】牛蒡子苷元可通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路减轻UUO大鼠肾纤维化。

牛蒡子苷元通过p38MAPK/NF-κB信号通路抗小鼠气道炎症的作用机制

[目的]探讨牛蒡子苷元(ARC)对卵清蛋白(OVA)诱导哮喘模型小鼠肺组织病理学改变的影响及作用机制.[方法]取雌性Balb/c小鼠40只,随机分为正常组、OVA组、ARC低、高剂量组和OVA+地塞米松治疗组,每组各8只.采用HE、Masson染色法观察小鼠肺组织病理学改变;利用Diff-Quik染色法计数各组炎性细胞数量;采用Western blot法测定肺组织中p38MAPK、NF-κB p65表达水平.[结果]与正常组比较,OVA组小鼠肺组织炎性细胞浸润明显,气道壁及软组织的结构完整性改变显著,支气管损伤严重(P<0.05).与OVA组比较,ARC低剂量组小鼠肺组织中炎性细胞浸润减轻,气道腔内未见有黏液栓形成,气道损伤有所缓解;ARC高剂量组和OVA+地塞米松治疗组肺组织形态与正常组相似,肺部炎性细胞浸润显著减少(P<0.05);ARC低、高剂量组及OVA+地塞米松治疗组小鼠肺组织支气管肺泡灌洗液中总炎性细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞数量明显减少(P<0.05),p38MAPK、NF-κB p65蛋白表达均显著降低(P<0.05).[结论]A RC可能通过调节p38MAPK/NF-κB信号通路缓解哮喘模型小鼠气道炎症和病理损伤.

牛蒡子苷元对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠炎症性肠病的治疗作用及机制

目的:探讨牛蒡子苷元对炎症性肠病(IBD)的治疗作用及其作用机制。方法:通过脂多糖(LPS)刺激人肠道细胞Caco-2和葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠在体外和体内建立IBD模型。将24只C57BL/6小鼠随机分为4组:空白对照组(Control)、模型组(Model)、牛蒡子苷元低剂量组(10 mg/kg牛蒡子苷元)和高剂量治疗组(40 mg/kg牛蒡子苷元)。采用ELISA检测Caco-2细胞、小鼠结肠组织炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6、氧化和抗氧化应激标志物MDA、SOD水平。通过Western blot检测Caco-2细胞和小鼠结肠组织中NF-κB p65蛋白磷酸化水平和ZO-1表达。给药第9天处死小鼠,通过HE染色研究结肠组织的组织病理学。结果:体外实验显示牛蒡子苷元显著抑制LPS诱导的炎症因子释放,降低氧化应激水平。Western blot结果显示,牛蒡子苷元降低了NF-κB p65蛋白的磷酸化水平和ZO-1蛋白表达。体内实验显示:与模型组比较,牛蒡子苷元降低了DSS诱导的结肠组织炎症因子和氧化应激水平。此外,牛蒡子苷元通过降低NF-κB p65磷酸化水平阻断NF-κB通路,进而影响其下游ZO-1蛋白表达。HE染色结果可观察到牛蒡子苷元高剂量给药组小鼠结肠组织损伤显著减轻。结论:牛蒡子苷元通过NF-κB/ZO-1通路调节炎症和氧化应激水平,改善IBD症状。

牛蒡子苷及牛蒡子苷元的药理作用研究进展

牛蒡子苷及牛蒡子苷元是从牛蒡子中提取的主要活性成分,具有广泛的药理作用。牛蒡子苷及其苷元具有抗肿瘤和神经保护等活性;牛蒡子苷元还具有较强的抗炎及免疫调节活性、抗病毒活性以及对热休克反应的抑制活性。综述近10年来国内外学者对牛蒡子苷及其苷元药理活性的研究概况。

生物转化法水解牛蒡子苷制备苷元

采用黑曲霉CGMCC No.2594发酵产生的β-葡萄糖苷酶酶液水解牛蒡子苷制备牛蒡子苷元.黑曲霉CGMCC No.2594发酵生产β-葡萄糖苷酶的最佳产酶时间为7 d.水解时添加200mmol/L的硫酸镁有利于提高牛蒡子苷元产率.β-葡萄糖苷酶酶液放置于4℃冰箱中冷藏15 d仍然具有较高的酶活.当牛蒡子苷初始浓度为0.3 mmol/L,添加200 mmol/L硫酸镁,最佳初始pH值为6.0,最佳温度为30℃,摇床转速为150 r/min时,β-葡萄糖苷酶酶液水解牛蒡子苷36 h牛蒡子苷元的产率可以达到94.7%.在36 h内黑曲霉CGMCC No.2594发酵产生的β-葡萄糖苷酶酶液水解牛蒡子苷的过程符合Monod方程,动力学常数Vm=1.7×10-2mmol/(L.d),Km=2.2×10-1mmol/L,实验数据与模型数据能够很好地吻合.

牛蒡子苷与苷元诱导人前列腺癌PC3细胞非凋亡性死亡的研究

【目的】观察牛蒡子苷(ARC)与牛蒡子苷元(ARG)对人前列腺癌PC3细胞增殖的影响,并探讨其相关机制。【方法】采用不同浓度的ARC与ARG作用于PC3细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞增殖的影响;瑞姬氏染色观察用药前后细胞形态变化;Annexin V-异硫氰酸荧光素-碘化丙啶(FITC/PI)双染结合流式细胞术检测细胞凋亡或坏死情况;Western-blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase 3的表达情况。【结果】ARC与ARG均能抑制PC3细胞的增殖,此抑制作用具有时间和浓度依赖性,两药物作用48 h组细胞存活率均显著低于24 h组(P<0.01);ARC与ARG处理组的细胞形态变化表现为细胞膜回缩,细胞质减少,胞膜紧贴胞核,胞液纤维网状结构;流式细胞术检测发现:与空白对照组比较,ARC组与ARG组可显著增加Annexin V-FITC/PI双染阳性率(P<0.05或P<0.01),PI单染阳性率在浓度为20μmol/L和5μmol/L时也显著增加(P<0.01),但Annexin V-FITC单染阳性率均无显著变化(P>0.05)。Western-blot分析结果显示:ARC或ARG作用细胞48 h时,可显著降低Bcl-2表达水平(P<0.01),但对Bax和Caspase-3蛋白的表达无显著影响(P>0.05)。【结论】ARC与ARG可诱导PC3细胞发生非凋亡性死亡,其作用机制可能与诱导Bcl-2表达下调相关。

固态发酵-水煮耦合炮制牛蒡子提高牛蒡子苷元含量

研究了黑曲霉Aspergillus niger ZJUT712菌株固态发酵和水煮工艺相耦合炮制牛蒡子.结果表明,该工艺提高了牛蒡子中有效成分牛蒡子苷元的含量,从而有利于促进牛蒡子摄入体内迅速起效.最佳固态发酵炮制条件为:0.5g牛蒡子粉、3g麸皮、2g甘蔗渣、0.3g蛋白胨和10ml Mandels营养液,固液比1∶3.6g/ml,初始pH5.6,30℃发酵7d.牛蒡子苷元产率随底物初始浓度的增加而降低.A.nigerZJUT712转化0.174mmol/L牛蒡子苷的产率可达93.0%.7d时间内A.niger ZJUT712水解牛蒡子苷的过程符合Monod方程,反应动力学常数为Vm=0.0837mmol/(L.d),Km=0.16mmol/L.

高效液相色谱法测定牛蒡药材不同部位牛蒡子苷和苷元的含量

目的:对牛蒡药材不同部位牛蒡子苷和牛蒡子苷元含量测定。方法:采用高效液相色谱法的测定。Agilent 1100液相色谱系统四元泵,Agilent色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);甲醇-水二元梯度洗脱,检测波长280nm。结果:牛蒡的根、茎、叶中几乎不含牛蒡子苷和牛蒡子苷元,绒毛和花序中含少量牛蒡子苷和牛蒡子苷元,而牛蒡子在牛蒡中二者含量均高。结论:该方法简便、准确,为更好的开发利用牛蒡提供依据。