长链非编码RNA核富集转录子1对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬的影响及机制研究

目的:分析长链非编码RNA(lncRNA)核富集转录子1(NEAT1)通过调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及自噬的影响。方法:人胃癌SGC7901细胞传代培养后分为对照组、过表达组和沉默组。对照组为不做任何处理,过表达组给予lncRNA NEAT1过表达质粒转染,沉默组给予lncRNA NEAT1沉默质粒转染。鉴定lncRNA NEAT1转染效率,分析沉默lncRNA NEAT1对人胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭、自噬、MAPK信号通路蛋白表达量的影响。结果:与对照组比较,过表达组lncRNA NEAT1表达量、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达量增加,上皮性钙黏附素(E-cadherin)、Beclin-1、Ⅱ型/Ⅰ型微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)、p38、c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白表达量降低;沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。与过表达组比较,沉默组lncRNA NEAT1表达量、MMP-9、MMP-2、ERK蛋白表达量降低,E-cadherin、Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p38、JNK蛋白表达量增加(均P<0.05)。结论:抑制lncRNA NEAT1可有效抑制胃癌细胞的迁移、侵袭、自噬,其机制可能与调控MAPK信号通路有关。

Fn14与JAK/STAT在非小细胞肺癌EGFR外显子19缺失突变组织中的表达

目的探讨成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)和Janus激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号分子在非小细胞肺癌(NSCLC)EGFR外显子19缺失突变(EGFR 19-Del)组织样本中的表达情况。方法经突变扩增阻滞系统法筛选出125例EGFR 19-Del的NSCLC组织并收集30例配对癌旁组织,应用免疫组织化学法检测该组织样本中Fn14、pJAK1和p-STAT1的表达,统计分析3种蛋白表达与临床病理特征的关系及三者之间的相关性。结果 Fn14阳性表达主要定位于细胞膜和胞质,p-JAK1、p-STAT1阳性表达主要定位于细胞质和胞核。EGFR 19-Del的NSCLC组织中Fn14、p-JAK1、pSTAT1的阳性表达率分别为100.0%(125/125)、83.2%(104/125)和100.0%(125/125),均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。三者在性别、年龄、吸烟史、病理类型方面的表达差异均无统计学差意义(P>0.05),在组织学分级、pT NM分期、淋巴结转移方面的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。Fn14与p-JAK1、p-STAT1在病理类型、组织学分级及pT NM分期方面表达均有很好的相关性(P<0.05,r>0.3)。结论 Fn14、p-JAK1、p-STAT1在EGFR 19-Del的NSCLC组织中呈高表达,表明Fn14、p-JAK1、p-STAT1很可能与EGFR 19-Del的NSCLC发生、发展有关;且Fn14可能促进p-JAK1、p-STAT1的表达,为进一步研究Fn14在EGFR 19-Del的NSCLC中的作用机制提供重要依据。

哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1的表达与气道炎症关系的研究

目的 研究哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1(STAT_1)的表达及动态变化,探讨STAT_1蛋白与哮喘气道炎症的相关性及地塞米松的影响。方法 48只豚鼠随机分为6组,卵白蛋白腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作,在激发后0h、24h、72h、5d,以及地塞米松治疗后第5d,测定哮喘豚鼠支气管粘膜周围肺组织嗜酸粒细胞(EOS)浸润与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞数量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中γ-干扰素浓度,免疫组化测定哮喘豚鼠气道上皮细胞中STAT_1表达。结果 豚鼠在诱喘后各个时相(0h、24h、72h及5d)BALF中嗜酸粒细胞的变化与支气管粘膜肺组织EOS浸润密度正相关(r=0.815,P<0.001)。气道上皮细胞中STAT_1表达与支气管粘膜周围肺组织EOS浸润及BALF中EOS数量均呈正相关(r=0.752,P<0.001;r=0.692,P<0.01)。地塞米松能抑制上皮细胞STAT_1表达(5d与治疗组相比,P<0.01)。BALF中γ-干扰素浓度与气道上皮细胞STAT_1表达呈负相关(r=0.499,P<0.05)。结论 支气管哮喘存在支气管上皮细胞STAT_1的持续活化及过度表达,并与嗜酸粒细胞聚集增多有密切关系。

人尿酸盐转运子1第3内含子突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响

目的明确人尿酸盐转运子(h URAT)1第3内含子(h URAT1 IVS-3+11G>A)突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响。方法海南黎族高尿酸血症患者100例为观察组,同期行体检的海南黎族非高尿酸血症者100例为对照组。采用突变特异性扩增系统(ARMS)对比两组h URAT1 IVS-3+11G>A等位基因突变情况。结果观察组h URAT1基因IVS-3+11G>A多态性A等位基因频率显著高于对照组(P<0.05)。经单因素及Logistics回归分析显示:饮酒、体重超重及携带h URAT1 IVS-3+11G>A多态性A等位基因为影响海南黎族高尿酸血症发生的独立风险因素(P<0.05)。结论 h URAT基因突变可能影响了海南黎族人高尿酸血症的发生,这一结果为此类疾病的遗传学病因探索提供了参考。

胰岛素促进狗缺血心肌葡萄糖转运子1移位和葡萄糖摄取

观察胰岛素能否刺激缺血心肌葡萄糖转运子 1(GLUT1)移位和葡萄糖摄取。利用自动分析仪测定生理代谢参数 ,应用免疫印迹和免疫荧光法检测GLUT1。胰岛素使缺血心肌细胞质膜GLUT1明显增加 (从 5 2 %± 4%～ 6 7%± 6 % ,P <0 0 5 )。细胞器膜GLUT1则相应减少 ,同时伴随葡萄糖摄取量明显增加 ,是单纯缺血心肌葡萄糖摄取量的 2倍。胰岛素刺激引起GLUT1移位 ,使缺血心肌葡萄糖摄取增加。提示心肌缺血时 。

刺梨黄酮对心力衰竭大鼠心脏结构、功能及心室肌信号传导子和转录活化子1蛋白表达的影响

目的探讨刺梨黄酮对心力衰竭大鼠心脏结构、功能及心室肌中信号传导子和转录活化子1(STAT1)蛋白表达的影响。方法将24只Sprague Dawley雌性大鼠随机分为对照组(n=6)、模型组(n=9)和刺梨黄酮组(n=9)。模型组和刺梨黄酮组大鼠腹腔注射0.5 g·L^(-1)盐酸阿霉素溶液(2 mL·kg^(-1))制备心力衰竭模型,每日1次,共10 d;空白对照组大鼠仅腹腔注射等量的生理盐水。造模的同时,刺梨黄酮组大鼠于每次注射阿霉素后给予0.1 g·L^(-1)刺梨黄酮溶液灌胃(2 mL·kg^(-1)),每日1次,共10 d;模型组和对照组大鼠给予等量的生理盐水灌胃。造模后超声检测各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)和左心室舒张末期内径(LVEDD),然后处死大鼠,取左心室制备冰冻切片及超薄切片进行形态学观察,免疫组织化学和荧光技术检测各组大鼠心室肌组织中STAT1和factorⅧ蛋白表达,利用Image J软件对免疫组织化学结果进行定量分析。结果实验过程中模型组和刺梨黄酮组分别有4只大鼠死亡。光学显微镜和电子透镜观察结果显示,对照组大鼠心肌纤维排列整齐,心肌细胞完整,线粒体结构清晰,未见异常改变。模型组大鼠心肌纤维紊乱呈波浪状,心肌间隙明显增宽,某些区域存在心肌细胞水肿、肌原纤维溶解和炎性细胞浸润,肌丝排列紊乱,出现明显的收缩带,Z线增粗,线粒体及细胞质基质出现局灶性溶解,并发生"鞘样"改变;细胞核发生棘突样改变,肌细胞表面出现大小不一的"指状突起"。刺梨黄酮组大鼠心室肌的状态较模型组改善,接近对照组。模型组大鼠LVEF低于对照组,LVESD和LVEDD高于对照组(P<0.05);刺梨黄酮组大鼠LVEF高于模型组,LVESD和LVEDD低于模型组(P<0.05)。对照组、模型组和刺梨黄酮组大鼠心室肌中STAT1蛋白表达量分别为0.27±0.02、0.56±0.07和0.32±0.03,模型组大鼠心室肌中STAT1蛋白表达量高于对照组(P<0.05),刺梨黄酮组大鼠心室肌中STAT1蛋白表达量低于模型组(P<0.05)。STAT1与factorⅧ蛋白存在共表达。结论刺梨黄酮可以减少阿霉素对心肌细胞的毒性作用,可通过下调STAT1蛋白表达来改善大鼠的心功能。

Na-K-2Cl联合转运子1在小鼠耳蜗侧壁组织中的表达及意义

目的观察Na-K-2Cl联合转运子1(NKCC1)在小鼠耳蜗组织中的表达及分布,并探讨其与耳蜗听觉功能的关系。方法选用健康正常CBA/CaJ小鼠为实验组,NKCC1-/-(突变纯合子,全基因敲除)小鼠为对照组,利用听性脑干反应检测两组动物的听觉功能,取各组小鼠的耳蜗行冰冻切片,同时采用免疫组织化学技术和免疫荧光组织化学法检测Na-K-2Cl联合转运子1在实验组与对照组小鼠的耳蜗中的表达和分布。结果实验组小鼠的ABR反应阈值为18±3.50dBSPL、对照组小鼠在100dBSPL刺激时无反应。NKCC1阳性反应呈棕黄色,主要分布于实验组小鼠耳蜗血管纹边缘细胞和螺旋韧带下部,在耳蜗血管纹边缘细胞和螺旋韧带下部的纤维细胞、纹上区也有适度表达,而在对照组未见阳性表达。图像分析显示,两组灰度值差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论在正常小鼠耳蜗,Na-K-2Cl联合转运子1主要在血管纹边缘细胞及螺旋韧带下部分布表达,并与耳蜗听觉生理功能密切相关。

大豆疫霉菌子1代单游动孢株群体毒力变异

采用大豆幼苗下胚轴伤口接种法测定了7个大豆疫霉菌的68个1代单游动孢株的毒力,并对其中45个1代单游动孢株毒力进行聚类分析。结果表明,1代单游动孢株中已无与其出发菌株毒力相同的个体,变异率高达100%。与出发菌株相比,子代单游动孢株个体毒力总体表现为减弱,但来源于同一个出发菌株的无性繁殖后代之间的毒力基本保持一致。

水牛信号转导子和转录激活子1基因电子克隆及序列分析

本研究运用生物信息学方法对水牛信号转导子和转录激活子1(signal transduction and activators of transcription1,STAT1)基因进行电子克隆及其序列分析。以牛STAT1基因序列作为探针电子克隆了水牛STAT1基因完整的编码序列并进行了RT-PCR验证。序列分析结果表明,水牛的STAT1基因序列长3437bp,包含1个2244bp的开发阅读框,共编码747个氨基酸。该基因cDNA编码区序列与普通牛、绵羊、人、猪、大鼠、小鼠和山羊同源性比对结果表明,其相似性分别为99%、98%、89%、93%、86%、85%和87%。经聚类分析结果表明,水牛与普通牛的分子进化关系最近。

钠葡萄糖转运子1和表皮生长因子受体2 mRNA在结直肠癌中表达的相关性

目的探讨结直肠癌(CRC)组织中钠葡萄糖转运子(SGLT)-1和表皮生长因子受体(HER)-2 mRNA的表达及其临床病理意义及二者的相关性。方法应用real-time PCR法检测35例CRC组织及10例切缘无瘤黏膜组织中SGLT-1和HER-2 mRNA的表达情况,并观察其表达差别。结果 SGLT-1和HER-2 mRNA在CRC中的表达明显高于切缘无瘤黏膜。CRC患者中SGLT-1 mRNA的表达与性别、年龄、组织分型、分化程度以及淋巴结转移无关(P>0.05);HER-2 mRNA在有淋巴结转移组中的表达量明显高于无淋巴结转移组(P<0.05)。SGLT-1和HER-2 mRNA表达呈正相关(r=0.416,P=0.016)。结论 CRC中SGLT-1、HER-2 mRNA的表达增高可能与CRC的早期发生、发展有关,并可能存在协同作用。

小鼠耳蜗血管纹Na-K-2Cl联合转运子1在顺铂耳毒性发生时的改变

目的研究顺铂(cis-dichlorodiammine platinum,Cisplatin)耳毒性发生后耳蜗血管纹Na-K-2Cl联合转运子1(NKCC1)的表达情况,并初步探讨其机制。方法选取健康CBA/CaJ小鼠20只,随机分为对照组和实验组各10只,实验组动物连续腹腔注射顺铂3.5mg.kg-1.d-1,建立顺铂耳毒性小鼠模型,对照组注射等量生理盐水。以听性脑干反应(ABR)阈值作为评价听功能的指标,检测给药前后小鼠听功能的改变,并采用免疫组织化学(SP法)结合免疫荧光实验技术,观察对照组和实验组小鼠腹腔注射顺铂前后耳蜗血管纹NKCC1表达的变化。结果NKCC1在小鼠耳蜗血管纹主要表达于边缘细胞,而顺铂作用后血管纹边缘细胞的NKCC1表达明显减弱,图像分析显示两组平均灰度值差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论小鼠顺铂耳毒性作用后血管纹边缘细胞NKCC1的表达量明显减弱,这可能是顺铂耳毒性发生机制中的一个重要环节。

Ras激酶抑制子1与肿瘤关系的研究进展

0引言 Ras至丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）通路在生长和发育的信号传递中起重要作用。1995年在该通路中发现了一个新组分：Ras激酶抑制子1（kinase suppressor of Ras 1，KSR1）。

载脂蛋白A-Ⅰ对巨噬细胞源泡沫细胞单核细胞趋化蛋白-1、血管细胞黏附分子-1和三磷酸腺苷结合盒转运子1表达的影响

目的探讨载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)对巨噬细胞源泡沫细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)表达的影响。方法以佛波酯(PMA)及氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1),使其分化为负脂的泡沫细胞,然后用apoA-Ⅰ(10 mg/L)或ABCA1抗体(10 mg/L)孵育泡沫细胞24 h。采用免疫荧光法检测巨噬细胞及经apoA-Ⅰ及ABCA1抗体干预前后泡沫细胞MCP-1、VCAM-1及ABCA1的表达,并行半定量分析。结果①经ox-LDL50 mg/L干预后,与巨噬细胞相比,泡沫细胞内MCP-1、VCAM-1及ABCA1表达均明显增强。②与未干预组相比,经apoA-Ⅰ10 mg/L干预后,泡沫细胞内MCP-1及VCAM-1表达显著减少(P值均<0.05),而ABCA1表达明显增加(P值均<0.05);经ABCA1抗体10 mg/L干预后,泡沫细胞内MCP-1的表达显著增加(P值均<0.05),VCAM-1表达有增加趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论apoA-Ⅰ可能通过增加泡沫细胞ABCA1和降低MCP-1及VCAM-1蛋白的表达发挥其抗动脉粥样硬化和抗炎作用,ABCA1通道可能在降低泡沫细胞内MCP-1表达方面发挥一定作用。

葡萄糖转运子1的表达与糖尿病性白内障关系的研究进展

糖尿病性白内障是糖尿病慢性并发症之一,严重危害患者的视力。葡萄糖转运子1(glucose transporters1,GLUT1)是晶状体上皮细胞摄取房水中葡萄糖的载体,在糖尿病性白内障发生发展中发挥重要作用。本文主要对GLUT1结构及表达,以及与糖尿病性白内障的关系进行综述。

ATP结合盒转运子1基因R219K多态性与缺血性脑卒中关系的Meta分析

目的：探讨三磷酸腺苷结合盒转运子1（ATP-binding cassettetransporter 1,ABCA1）基因R219K多态性与缺血性脑卒中的易感性关系。方法：全面检索ABCA1基因R219K多态性与缺血性脑卒中关系的病例对照研究,剔除不符合标准的文献,并采用RevMan 4.2软件对结果进行统计分析。结果：共纳入6篇文献7个研究,累计病例1 349例,对照1 389例。各研究间经齐性检验后未发现发表偏倚和明显异质性,合并的（RK＋KK）基因型/RR基因型的OR值为0.80（95%CI为0.68~0.94）。结论：ABCA1基因R219K多态性可能与缺血性脑卒中相关,K等位基因可能是缺血性脑卒中的遗传保护因素。

空间条件对多年生黑麦草(子1代)植株的影响

“神舟”四号飞船搭载多年生黑麦草超级德比(Derby Supreme)干种子在地面种植收获的子1代种子,与未搭载收获的子1代种子为对照,对发芽率、株高、分蘖数等指标进行测定,并对表型有差异的植株进行同工酶分析。结果表明,空间条件对多年生黑麦草子1代种子发芽率影响不明显,对株高、分蘖数影响较明显,且多年生黑麦草子1代植株POD酶在酶谱特征上存在明显的差异。

miR-199a-3p靶向视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1促进心肌细胞肥大

【目的】探讨微小RNA microRNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌细胞肥大的调控作用及其作用靶基因。【方法】原代分离培养C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),转染miR-199a-3p模拟物(mimic)和视网膜母细胞瘤转录辅阻遏子1(Rb-1)siRNA分别来增加NMVC中miR-199a-3p和抑制Rb-1的水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Rb-1 3′端非翻译区(3′-UTR)的结合作用。FITC-鬼笔环肽染色检测乳小鼠心肌细胞表面积。RT-qPCR和Western blot检测miR-199a-3p,Rb-1和心肌细胞肥大相关基因的表达。【结果】①过表达miR-199a-3p可明显增加NMVC中的肥厚相关基因Nppa,Acta1,Myh7表达;②双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-199a-3p与Rb-1 3′UTR具有特异结合作用;miR-199a-3p可在转录后水平抑制Rb-1的表达;③过表达miR-199a-3p或抑制Rb-1表达均能一致性地增加心肌细胞表面积和心肌细胞肥大相关基因表达,并促进E2f2进入NMVC细胞核。【结论】miR-199a-3p通过抑制Rb-1表达,促进了E2f2进入细胞核来发挥促进NMVC肥大的作用。

过表达Bax抑制子1(BI-1)通过内质网IRE1-JNK通路抑制蛛网膜下腔出血大鼠海马神经元凋亡

目的探讨慢病毒介导Bax抑制子1(BI-1)过表达对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马神经元保护作用以及与内质网膜蛋白肌醇酶1-c-Jun氨基末端激酶(IRE1-JNK)信号通路的关系。方法制备BI-1过表达慢病毒并经侧脑注射,24 h后采用血管内穿刺法建立SAH大鼠模型。于造模后24 h,对大鼠进行神经行为学评估和脑含水量检测,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察大鼠海马神经元凋亡情况,Western blot法检测BI-1蛋白以及内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和IRE1蛋白水平。采用IRE1α特异性抑制剂KIRA6处理SAH后大鼠,Western blot法检测BI-1过表达对IRE1-JNK信号通路相关蛋白磷酸化的IRE1(p-IRE1)、磷酸化的JNK(p-JNK)及凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和caspase-3蛋白水平的影响。结果过表达BI-1提高SAH模型大鼠的神经行为学评估得分,降低SAH模型大鼠的脑含水量和海马神经元凋亡率,并且BI-1过表达可以下调SAH后大鼠海马神经元中GRP78和IRE1蛋白水平。KIRA6处理和BI-1过表达均可抑制p-IRE1、p-JNK、Bax的表达和caspase-3的活化,促进Bcl2的表达。结论过表达BI-1可通过阻断IRE1-JNK通路抑制SAH后大鼠海马神经元凋亡。

葡萄糖转运子1与糖尿病视网膜病变

葡萄糖转运子1(GLUT1)是葡萄糖通过血—视网膜屏障的唯一载体。在糖尿病高血糖状态下,高血糖对GLUT1的直接作用呈降调节,视网膜局部缺血缺氧、血管紧张素Ⅱ、血管内皮生长因子等因素对GLUT1的表达呈升调节。上述因素共同调节GLUT1的表达。而GLUT1又可影响葡萄糖代谢、氧化应激等过程,可能参与了糖尿病视网膜病变的发生、发展。

非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA结肠癌相关转录子1的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA结肠癌相关转录子1(lncRNA CCAT1)的表达及临床意义。方法收集2018年1月至2019年12月于我院就诊的100例非小细胞肺癌患者术后癌组织及癌旁正常组织,采用RT-qPCR法检测样本中lncRNA CCAT1的表达,并分析其与非小细胞肺癌发生进展的相关性。设计合成lncRNA CCAT1质粒,转染A549细胞,检测转染后lncRNA CCAT1的表达,采用流式细胞术分析转染细胞的凋亡情况,采用噻唑蓝(MTT)实验法检测转染细胞的增殖能力。结果非小细胞肺癌组织中lncRNA CCAT1的相对表达量为(4.13±0.79),明显高于癌旁正常组织(2.28±0.56),二者比较差异显著(P<0.05)。RT-qPCR结果提示,与转染空载体阴性对照组和未转染对照组比较,转染lncRNA CCAT1质粒的A549细胞中lncRNA CCAT1表达较低(P<0.05)。流式细胞术结果提示,与转染空载体阴性对照组和未转染对照组比较,转染48h后lncRNA CCAT1质粒的A549细胞凋亡比例明显较低(P<0.05)。MTT结果提示,与转染空载体阴性对照组和未转染对照组比较,转染48h、72h、96h后lncRNA CCAT1质粒的A549细胞增殖能力均较高(P<0.05)。不同临床分期、淋巴结转移与非小细胞肺癌组织中lncRNA CCAT1的表达存在差异(P<0.05)。结论 lncRNA CCAT1在非小细胞肺癌组织中呈高表达,其或将成为非小细胞肺癌的潜在治疗靶点。