孔鳐硫酸软骨素的制备

采用增大碱浓度、复合酶水解及乙醇沉淀的方法提取制备孔鳐硫酸软骨素,并进行工艺条件的探讨,得到硫酸软骨素为白色粉末,其纯度达93.6％,收率为2.82％。

响应面法优化孔鳐软骨抗氧化多肽的酶解工艺

[目的]探讨酶解法制备孔鳐鱼软骨抗氧化肽的最佳工艺。[方法]以孔鳐软骨为试验材料,以DPPH自由基清除率为考察指标,采用双酶复合法酶解制备抗氧化多肽,通过响应面分析优化为最佳酶解工艺参数。[结果]采用胰蛋白酶与碱性蛋白酶复配(1∶3)组合制备酶解物的抗氧化性最好,酶解的最优工艺条件为:p H 8.5,加酶量6.25%,料液比2.1%,温度50.19℃,预测的DPPH自由基清除率为34.45%。[结论]通过响应面设计优化确定了孔鳐软骨抗氧化多肽的酶解工艺,为软骨鱼类高值化利用提供技术支持。

孔鳐胰脏单层细胞的制备和外源基因的表达

采用机械法、酶消化法和灌注冷消化结合机械法对孔鳐胰脏细胞进行分散，并以台盼蓝染色法测定活细胞率，评价细胞分散后的生长状态。在细胞分散后对孔鳐胰脏细胞用腺病毒载体和阳离子多聚物进行外源基因的转染。实验结果表明，灌注冷消化结合机械法可以获得较高的活细胞率，胰脏细胞可以正常生长并表达外源基因。

荣成湾孔鳐群体线粒体DNA cytb部分序列的遗传多样性分析

对2009年和2011年采自荣成湾的孔鳐(Raja porosa)群体共54尾鱼的线粒体DNA细胞色素b基因(cytb)部分序列进行测定,以分析其遗传多样性和群体遗传结构。结果显示,在所获得的782 bp序列中,共检测到11个单倍型、15个多态位点,其单倍型多样性指数(H)为0.498±0.081,核苷酸多样性指数(π)为0.0018±0.0005,遗传多样性水平较低。其中,2009年样品检测到3种单倍型、4个单一变异位点,其H和π值分别为0.378±0.181和0.0010±0.0006;2011年样品检测到9种单倍型、6个单一变异位点和6个简约信息位点,其H和π值分别为0.352±0.086和0.0020±0.0006。分子方差分析(AMOVA)分析显示它们的遗传变异主要集中在同年度个体间(98.22%),而不同年度个体间的遗传变异远远小于同年度内个体间的变异。Kimura’s 2-parameter模型分析得到的2009,2011年度孔鳐间的遗传距离为0.0013,遗传分化系数为0.01778,也表明2009年和2011年孔鳐的遗传分化程度低,没有明显的遗传变异。中性检验表明,荣成湾孔鳐群体可能发生过种群扩张。

鱼纲动物孔鳐血红蛋白自身不相互作用的研究及其进化意义

目的:研究一种软骨鱼系动物(孔鳐)自身血红蛋白成份的相互作用。方法:淀粉-琼脂糖混合凝胶交叉电泳。结果:孔鳐自身血红蛋白成份不相互作用。结论:本实验完善了研究室所作的“各种脊椎动物血红蛋白自身相互作用的系列研究”。同前面所进行的各种脊椎动物血红蛋白分别与人血红蛋白、胎儿血红蛋白相互作用的研究对照比较,进一步验证脊椎动物血红蛋白与各种蛋白分子在电场中的相互作用的分水岭可能位于爬行纲动物,丰富了血红蛋白分子进化理论。

孔鳐雄性生殖系统解剖学与组织学观察

本研究对成年雄性孔鳐(Okamejei kenojei)的生殖系统进行解剖学和组织学观察,结果表明,孔鳐的生殖系统主要由精巢、附睾、输精管、储精囊、间质腺、鳍脚腺和鳍脚组成。其中孔鳐的精巢中的精小囊,按照成熟度依次由中心向小叶外周辐射状排列,其精子发育成熟过程根据精巢支持细胞的位置、精小囊的大小和精小囊中的生精细胞所处的状态可划分为7个时期:精巢支持细胞未迁移期、精巢支持细胞迁移期、精巢支持细胞定植早期、精巢支持细胞定植晚期、精子变形期、精子迁移期、精子聚拢期。变态成熟的精子最终每59~64根精子组成精子束进入附睾。精子束在附睾中经历“游离-聚拢-游离”3个过程后,最终储存在储精囊中。鳍脚是孔鳐的外生殖器,主要有鳍扇、扇盾等结构组成,它与储精囊相连,是将精液输送至体外的器官。

胰蛋白酶酶解制备孔鳐软骨蛋白寡肽及其抗氧化活性

以孔鳐软骨为材料,采用盐酸胍抽提、丙酮分级沉淀,制备孔鳐软骨蛋白;以DPPH·和HO·清除活性为导向,采用胰蛋白酶酶解、膜超滤、DEAE-52阴离子交换层析、Sephadex G-15凝胶层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)等技术,制备抗氧化肽,并对其活性进行系统评价。结果显示,孔鳐软骨蛋白经胰蛋白酶酶解和分离纯化得到2个抗氧化肽RCPE-A和RCPE-B,经氨基酸序列分析确定其序列分别为Gly-Glu-Glu-Gly-ProArg-Gly (GEEGPRG)和Gly-Glu-Glu-Gly-Thr-Met-Gly-Leu (GEEGTMGL),质谱(ESI-MS)测定其分子量分别为700.71和792.87 u。体外自由基清除实验结果显示,RCPE-A与RCPE-B对DPPH·(EC50 2.94和1.16 mg/mL)、HO·(EC_(50) 0.34和0.54 mg/mL)、ABTS^+·(EC_(50) 0.34和0.10mg/mL)和O_2^-·(EC_(50) 0.11和0.03 mg/mL)具有良好的清除作用,RCPE-A与RCPE-B亦显示出较强的脂质过氧化抑制作用。研究表明,孔鳐软骨蛋白酶解物及制备多肽可用于抗氧化相关的功能食品开发,也可以用作抗氧化剂延长相关产品的货架期。

孔鳐胚胎发育的初步观察

孔鳐是一种营底栖定居性生活的经济软骨鱼类。产卵期在四至八月,盛期为四月下旬至六月。在整个产卵期中;一尾雌鱼平均可产22—31枚卵。雌鱼产出带有卵壳的胚胎,在水温16—25℃,pH7.70—7.88,盐度为28—30‰,水中溶氧为2.7—4ml/L 的海水中,平均70天幼鱼便可由卵壳的前粘合部处,破壳而出。出壳时间最长为90天,最短为48天。刚孵出的幼鱼全长7—8厘米。

孔鳐外周血细胞的显微观察

利用光学显微镜观察孔鳐RajaporosaGünther外周血细胞的显微结构。通过瑞氏染色可以发现,孔鳐外周血中含有红细胞、淋巴细胞、单核细胞、血栓细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞,没有观察到巨噬细胞和嗜碱性粒细胞。测量了部分细胞的长短径和细胞核的长短径。此外,还观察到一种不能鉴定的疑似为浆细胞的细胞,以及成熟红细胞和未成熟红细胞、大小差异巨大的两种淋巴细胞、多种存在形式的血栓细胞和血栓细胞侵蚀其他细胞的现象。

舌尖上的中国水产——老板鱼(孔鳐)

确切地说老板鱼又名劳板鱼、甫鱼、劳子、铧子鱼、锅盖鱼、虎色、夫鱼、鲂鱼、水尺、油虎、孔鳐!英文名称：skate!这种鱼的背部节刺多行,雌鱼为5纵行,雄鱼3纵行!体长300mm^500mm左右。栖息在浅海沙质低海域,常常潜伏于沙中,昼伏夜出!非常容易和美鳐相混淆!

微波辅助提取孔鳐抗氧化和血管生成抑制活性软骨多糖的研究

目的:对微波辅助碱液提取孔鳐软骨多糖的方法及其抗氧化和血管生成抑制活性进行研究。方法:采用微波辅助碱液提取与木瓜蛋白酶水解相结合的加工工艺,以正交试验法优化提取工艺参数。通过还原力、DPPH·和·OH清除实验对多糖抗氧化能力进行测定。采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型对其血管生成抑制活性进行评价。结果:微波辅助碱液提取最佳工艺参数是:微波功率650W、提取温度60℃、碱质量分数15%、液料比35:1、提取时间7min。木瓜蛋白酶脱蛋白精制孔鳐软骨多糖的最佳条件是:酶解温度50℃,pH7.0,酶解时间2h,酶量1.0%。在此条件下精制的多糖为白色粉末,得率13.77%,纯度88.75%。在相同浓度下精制孔鳐软骨多糖抗氧化能力均大于粗提多糖。精制多糖的血管生成抑制活性与硫酸软骨素(CS)相当,并且呈剂量依赖关系。结论:微波辅助碱液提取和木瓜蛋白酶脱蛋白所得精制多糖具有很好的抗氧化和血管生成抑制活性。

孔鳐的生物学特性与养殖技术

孔鳐（R．porosa）隶属鳐目、鳐亚目。山东、辽宁俗称老板、劳子，江苏、浙江称老板甫、甫鱼等，是一种传统性地方经济鱼类。近几年由于过度捕捞和海洋污染，资源严重衰竭。该鱼肉多刺少，无硬骨，其肉可鲜食，也可腌制加工成淡干鱼，深受消费者青睐，特别是北方地区把孔鳐作为婚宴或餐桌上一道名菜（俗称老伴、老板），表示如意和吉祥。为此，我们2002年4月，在沿海诱捕孔鳐幼鱼500尾进行试养，初步掌握了其生物学特性，形成了配套养殖措施。现报告如下。

两种软骨鱼血红蛋白不与人胎儿血红蛋白相互作用及其进化意义

目的:研究两种软骨鱼——条纹斑竹鲨、孔鳐的血红蛋白成分与人胎儿血红蛋白的相互作用。方法:淀粉 -琼脂糖混合凝胶交叉电泳。结果:条纹斑竹鲨、孔鳐的血红蛋白成分不与人胎儿血红蛋白相互作用。结论:与前面所 进行的其它脊椎动物血红蛋白与人血红蛋白及人胎儿血红蛋白相互作用的研究对照比较,进一步验证了脊椎动物血红 蛋白与人血红蛋白相互作用的分界线可能位于爬行纲动物,丰富了血红蛋白的进化理论。