运用流式细胞技术分析孕妇外周血中胎儿有核红细胞的比例与孕周的关系

目的 :探讨母亲外周血中胎儿有核红细胞 (NRBCs)的比例与孕周的关系。方法 :对 6 1名孕龄为 11～ 34周、年龄为 2 1～ 35岁的妇女的外周血中的胎儿细胞进行分离纯化 ,采用荧光激活细胞分离技术 (FACS)分选表达转铁蛋白受体的阳性细胞 (CD71+细胞 )。将孕妇组、未孕组及新生儿脐血组进行对照。结果 :孕 11～ 34周的孕妇外周血中 CD71+细胞的比例为 (0 .35± 0 .2 5 )× 10 - 2 ,与未孕组及新生儿脐血组均有极显著性差异。CD71+细胞在外周血中的比例在孕 17～18周达峰值 ,分别为 (0 .6 4± 0 .2 5 )× 10 - 2和 (0 .5 4± 0 .35 )× 10 - 2。结论 :早、中、晚期孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞。利用母血循环中的胎儿细胞进行产前诊断的最佳时间应在妊娠 17～

孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量在妊高征中的变化

比较妊高征与正常孕妇外周血及胎盘组织绒毛内胎儿有核红细胞 (NRBC)的数量 ,探讨 NRBC出现频率在妊高征中的变化。对 2 8名孕龄 2 7～ 4 1周 ,年龄 2 0～ 39岁 (包括 18名妊高征 )的孕妇外周血进行不连续密度梯度离心 ,对分离后的细胞进行制片、染色 ,显微镜下进行 NRBC计数 ,比较组间差异 ;终止妊娠时 ,对胎盘组织进行病理切片 ,显微镜下进行 NRBC计数 ,比较组间差异。结果发现 18名妊高征孕妇外周血中 NRBC数目为 (2 5 .2 8± 10 .97)个 / 7ml;同孕龄正常妊娠妇女外周血中 NRBC数目为 (12 .5 0± 5 .4 4 )个 / 7ml,两者间有显著性差异 (P<0 .0 1)。妊高征孕妇胎盘绒毛内 NRBC数目为 (3.83± 3.2 0 )个 / 4 0 HP;同孕龄正常孕妇胎盘绒毛内 NRBC数目为 (0 .6 0± 0 .70 )个 / 4 0 HP,两者间有显著性差异 (P<0 .0 1)。提示孕高征孕妇外周血与胎盘组织绒毛内 NRBC数目明显升高 。

孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的建立

本研究目的是建立孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术,用于ABO血型不合引起的新生儿溶血病的产前诊断。根据ABO血型基因DNA全序列和mRNA序列设计4对引物,选择20例健康供者血浆,提取血浆中DNA进行扩增,探索最佳的血浆DNA提取及PCR扩增条件,初步建立单人ABO血型基因分型技术。将O型血浆DNA与A型或B型血浆DNA按1:1、2:1、4:1、8:1、10:1、20:1、40:1、100:1进行混合,模拟孕妇外周血胎儿与孕妇自身ABO基因混合状态,建立混合ABO血型基因分型技术。选取14例孕30周以上的孕妇外周血标本,进行胎儿ABO血型基因型鉴定,并对孕妇进行追踪,尽量获取胎儿出生以后的外周血标本进行ABO血型鉴定,以评价孕妇外周血胎儿ABO血型基因分型技术的灵敏度与准确性。结果表明:单人血浆进行准确血型鉴定的最少模板DNA量约为0.625ng,500μl血浆提取的DNA量即可达到PCR扩增要求;当混合血浆中O型DNA所占比例≤10时,可以准确检测出非O基因的存在;14名O型孕妇外周血标本中9例标本扩增出非O型基因,5例未扩增出非O基因;通过血清学方法对5例胎儿出生后外周血进行ABO血型鉴定,其中A型3例,B型1例,O型1例,与其基因分型结果一致,符合率100%。结论:本研究建立的孕妇外周血胎儿ABO血型基因提取、分型技术,可以对妊娠中晚期胎儿ABO血型基因型进行准确鉴定,从而为新生儿溶血病的产前诊断与预防提供指导意见。

孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量与胎儿窘迫的关系

目的:探讨孕妇外周血中胎儿有核红细胞(nucleatedredbloodcells,NRBC)数与胎儿窘迫的关系。方法:对54名孕龄32～42周,年龄19～35岁(包括19名急性胎儿窘迫,15名慢性胎儿窘迫)的孕妇外周血进行不连续密度梯度离心,对分离后的细胞进行制片、染色,显微镜下进行NRBC计数,比较组间差异。结果:15名慢性胎儿窘迫孕妇外周血中NRBC数目为(23.26±6.75)个/7mL;同孕龄正常妊娠妇女外周血中NRBC数目为(9.43±4.01)个/7mL,两者间差异有显著性(P<0.05)。19名急性胎儿窘迫孕妇外周血中NRBC数目为(10.87±4.29)个/7mL,与正常妊娠间差异无显著性(P>0.05)。结论:慢性胎儿窘迫孕妇外周血中NRBC数目明显升高,为胎儿窘迫的临床预测和评估提供了一条新思路。

孕妇外周血中胎儿有核红细胞在杜氏进行性肌营养不良胎儿产前诊断中的应用

目的探讨应用孕妇外周血中胎儿有核红细胞,对性连锁遗传病进行非创伤性产前诊断方法的可行性。方法取已生育过杜氏进行性肌营养不良病(DMD)患儿的孕妇外周血,经密度梯度离心法分离有核细胞层,挑取有核红细胞,并提取DNA,提取孕妇、其丈夫及杜氏进行性肌营养不良患儿的外周血的基因组DNA。将有核红细胞DNA先进行随机引物预扩增,利用dystrophin基因中4个短串联重复序列多态位点(STR-44,STR-45,STR-49和5-′DysⅡ)进行PCR扩增,进行家系连锁分析。结果准确检测2例,1例为杜氏进行性肌营养不良患儿,1例为正常女孩。结论利用孕妇外周血中胎儿有核红细胞,可进行胎儿杜氏进行性肌营养不良病的非创伤性产前诊断。

不同孕次孕妇外周血胎儿遗传信息检测

目的从不同孕次孕妇外周血中分离出胎儿DNA并加以鉴定，探讨孕妇不同孕次对外周血中胎儿遗传物质检测的结果影响。方法不同孕次孕妇共30例，于孕36-40周时按以往有无孕产史分成两组，以往有早孕史的孕妇12例为研究组；初次妊娠孕妇18例为对照组，抽取孕妇外周血并分离出胎儿DNA，用套式PCR检测其中的SRY基因并与新生儿出生性别作结果对照。结果应用套式PCR能够从母体外周血中检测到胎儿SRY基因，且两组特异性、敏感性比较无显著性差异。结论以往有早孕史的孕妇外周血SRY基因的检测结果与初次妊娠孕妇比较无显著性差异。

2019年北京市孕妇外周血胎儿游离DNA检测现状分析

目的了解2019年北京市孕妇外周血胎儿游离DNA筛查、产前诊断及妊娠结局的情况。方法采用描述性统计学方法分析2019年北京市8家产前诊断机构孕妇外周血胎儿游离DNA筛查及诊断情况。结果2019年北京市8家产前诊断机构共进行外周血胎儿游离DNA检测65136例,占产妇总数的29.8%(65136/218396)。21\18\13-三体综合征检测复合阳性预测值为57.4%(152/265),21-三体检测阳性预测值为76.0%(117/154),18-三体检测阳性预测值为38.9%(28/72),13-三体检测阳性预测值为18.0%(7/39),性染色体检测阳性预测值为30.5%(85/279),其他染色体检测阳性预测值为16.4%(30/183)。65136例患者中,适用人群筛查10791例,占16.6%;慎用人群筛查53833例,占82.7%;不适用人群筛查343例,占0.5%。追访发现1例21-三体和1例18-三体假阴性患者。21\18\13-三体综合征检出率为98.7%(152/154),其中21-三体检出率为99.2%(117/118),18-三体检出率为96.6%(28/29),13-三体检出率为100%(7/7)。非侵入性产前检查(NIPT)高风险孕妇产前诊断率为84.6%(615/727),其中21\18\13-三体综合征的产前诊断率为91.7%(243/265)。结论孕妇外周血胎儿游离DNA检测已成为21-三体综合征筛查的重要手段之一,在临床应用中应严格掌握检测指征,重视检测前后的遗传咨询,提高产前诊断率,同时加强实验室质控,提高检测质量。

孕妇外周血中大血小板变化情况探讨

目的:探讨孕妇外周血中大血小板的变化情况及其临床意义。方法:使用SYSMEX XE2100全自动血液分析仪对100例正常妊娠妇女分娩前后、40例妊娠后并发症妇女及45例妊高征患者外周血血小板参数进行检测,包括大血小板比率(P-LCR)、血小板总数(PLT)、血小板平均体积(MPV)及血小板分布宽度(PDW),并观察其动态变化情况。结果:孕妇大血小板比率及数量在分娩前后会出现一过性升高(P<0.01),且变化最显著,分娩1周后迅速回复正常;而妊高征及产后并发症患者体内大血小板变化情况与正常妊娠妇女相比有明显差异。结论:动态监测孕妇外周血中大血板变化情况简便可行,并在一定程度上了解其妊娠及产后恢复情况。

针对孕妇外周血与胎盘中膜联蛋白V的变化与胎儿生长受限的研究

目的研究孕妇外周血及胎盘组织中Annexin V变化与胎儿生长受限的关系。方法以本院住院分娩的孕妇为研究对象,在随机选取的125例患者中有60例出现胎儿生长受限的情况,而剩余65例为正常孕妇,将其分为FGR组和正常组进行研究,分别采用ELISA法及免疫组化染色法测量孕妇外周血及胎盘组织中的Annexin V含量变化。结果所选研究孕妇基本资料情况的比较差异不具有差异性;而经过两种方法对Annexin V进行测定后,FGR组中外周血与胎盘组织中的含量均要低于正常组中的含量,以上数据均在差异比较范围内。结论 Annexin V的变化与胎儿生长受限的存在着一定的相关性,可以以此对胎儿的生长发育情况进行预测,并进行相应的干预。

联苯胺染色联合显微操作法获取孕妇外周血中有核红细胞

目的：建立一种简单、快速、经济的孕妇外周血中有核红细胞（Nucleated red bloodcell，NRBC）的识别和获取方法，为无创性产前基因诊断创造条件。方法：单密度梯度离心法富集，联苯胺染色识别母血中NRBC，显微操作获取。结果：28例样本中每例发现NRBC4～13个／Sml，共获298个。结论：联苯胺染色后母血中NRBC易于识别，熟练的显微操作能迅速获取单个NRBC，为应用单个胎儿NRBC进行产前基因诊断打下前期基础。

孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因的检测

目的 探索检测孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因表达的方法。方法 提取孕妇全血mRNA ,经体外逆转录后 ,用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法 ,应用ε/γ特异引物引导扩增胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,以NdeⅡ酶切后 ,经琼脂糖凝胶电泳 ,在凝胶成像系统下观察。结果 成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因 ,ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断 ,大小分别为 191、5 7和 2 6bp。结论 孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求 ,胎儿γ血红蛋白基因的检测可为无创伤性产前诊断的发展奠定基础。

孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞的产前基因分析

为探讨母血中单个胎儿有核红细胞 (NRBC)行产前基因分析的可行性 ,对 45名孕妇外周血行不连续密度梯度离心 ,显微操作获取单个 NRBC,A组 2 4例进行引物延伸预扩增 (PEP) ,后行 Y染色体特异性 DYZ1基因的聚合酶链反应 (PCR) ,B组 2 1例直接进行 Y染色体特异性 DYZ1基因的 PCR。发现 45名孕妇中有 2 4名检出 NRBC,A组中男胎符合率为 70 % ,总符合率为 83.3% ,B组则均未扩增到 PCR产物。提示用母血中单个胎儿 NRBC经 PEP- PCR法行产前基因分析是可行的。

孕妇外周血中分离胎儿细胞及应用

在每年出生的新生儿中,大约有2%的带有严重的身体、智力障碍,而其中遗传因素所致的占25%(基因因素20%、染色体因素5%)。目前,由于高龄孕妇比例的不断增加和环境污染引起的胎儿畸形的发生率不断升高。产前诊断有利于降低非正常胎儿的发生率,因此受到广泛的关注。特别是近年来发展起来的用母血中的胎儿细胞进行的产前诊断因其非侵入性、对胎儿损伤小等特点成为研究的热点。

孕妇外周血中胎儿DNA在唐氏综合征产前诊断的应用前景

产前诊断（prenatal diagnosis）是指在胎儿出生前诊断胎儿是否患有某种遗传性或先天性疾病的一种手段,对于预防和控制新生儿发病率具有重要的临床意义。目前,产前诊断主要以创伤性诊断方法为主,包括孕早期的绒毛穿刺、孕中期的羊水穿刺和孕晚期的脐带穿刺等。技术成熟,

正常妊娠和妊高征孕妇外周血中血栓素 B_2及6-酮-前列腺素 F_(1α)水平测定

近年来,妊高征患者血浆中6-酮-前列腺素 F1α（PGI2代谢产物）及血栓素 B2（TxA2代谢产物）的水平改变受到国内外学者注意。大多数研究表明,妊高征时孕妇血浆中6-Keto-PGF1α减少和/或 TxB2增加,提示妊高征发病可能与 PGI2—TxA2失衡有关。我们在严格控制观察病例的条件下,用放射免疫法测定了正常和中、重度妊高征孕妇外周血中6-Keto-PGF1α和 TxB2的含量,以揭示其在妊高征发病中的作用,现报告如下。

孕妇外周血中胎儿有核红细胞分选富集的方法学研究进展

孕妇外周血中存在胎儿有核红细胞（Fetal nucleated red blood cells，FNRBCs）已不容质疑，但要得到足够数量的FNRBCs并普及使用于无创性产前诊断仍存在一些问题。到目前为止尚未找到FNRBCs特异性的抗原，富集、分选FNRBC8操作复杂，费用昂贵。尽管如此，由于无创性产前诊断对胎儿没有任何风险，不受孕妇年龄和疾病的限制，带给孕妇的痛苦小，因此发展无创性产前诊断技术仍有较好的前景。随着单克隆抗体技术、

孕妇外周血胎儿细胞的分析及在产前诊断中的应用

孕妇外周血中存在胎儿细胞共四种 :滋养叶细胞、有核红细胞、粒细胞和淋巴细胞。胎儿有核红细胞最适合富集、纯化及用于产前诊断。利用有核红细胞特异性抗原标记CD71、CD36、及抗GPA、抗γ珠蛋白阳性选择及白细胞抗原CD45阴性选择分离胎儿有核红细胞 ,用FISH及PCR技术进行遗传学分析 ,已能在产前诊断出胎儿性别 。