血浆游离胎儿DNA浓度联合血清妊娠相关血浆蛋白-A、β-人绒毛膜促性腺激素检测对孕妇不良妊娠结局的预测价值

目的探讨血浆游离胎儿DNA(cff-DNA)浓度联合血清妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)和β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)检测对孕妇不良妊娠结局的预测价值。方法选取2022年8月至2023年2月佛山复星禅诚医院收治的进行产检、唐氏筛查和无创产前DNA检查(NIPT)的195例孕妇作为研究对象。将发生不良妊娠结局的孕妇设为研究组(n=36),无不良妊娠结局的孕妇设为对照组(n=159)。检测两组血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平;采用Spearman分析血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平与不良妊娠结局的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平对不良妊娠结局的预测价值。结果与对照组比较,研究组血浆cff-DNA浓度和血清PAPP-A水平显著更低,血清β-hCG水平显著更高,差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman分析结果显示,血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平与妊娠期高血压、子痫前期、早产、死胎、新生儿窒息和胎儿生长受限不良妊娠结局具有显著相关性(P<0.05);ROC曲线结果显示,血浆cff-DNA浓度单独预测孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.807,截断值为11.82%;血清PAPP-A单独预测孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.804,截断值为0.41;血清β-hCG单独预测孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.815,截断值为2.56;预测效能比较结果显示,血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平联合预测孕妇不良妊娠结局的特异度(97.48%)和准确度(96.41%)均显著高于三者单独预测(P<0.05),误诊率(2.52%)显著低于三者单独预测(P<0.05)。结论血浆cff-DNA浓度联合血清PAPP-A、β-hCG检测对孕妇不良妊娠结局具有较高的预测价值。

孕妇血浆中胎儿游离DNA测序在无创性产前检测中的应用

目的:探讨孕妇血浆胎儿游离DNA高通量测序(DNA测序)在无创产前检测中的应用价值。方法:对7561例唐氏筛查高风险孕妇行DNA测序,并行羊水细胞染色体核型分析确诊。结果:在7561例孕妇中,DNA测序异常40例,羊水细胞核型结果异常37例,DNA测序误诊3例。其中DNA测序检测到21-三体高风险25例,羊水细胞核型确诊24例;18-三体均为12例。DNA测序对于21-三体检测的敏感性和特异性分别为100.00%和99.98%,18-三体检测的敏感性和特异性均为100.00%。DNA测序的假阳性率为0.04%,假阴性率为0。结论:孕妇血浆胎儿游离DNA高通量测序是检测21和18-三体一种敏感性高和特异性强的新方法,在无创产前检测中有重要的实用价值。

基于二代测序的染色体非整倍体无创产前筛查孕妇血浆中胎儿DNA比例的检测和计算方法

孕妇血浆中胎儿游离DNA的发现已对胎儿染色体非整倍体异常的无创产前检测产生了巨大的变革,母体血浆中的游离DNA越来越被认为是非侵入性检测胎儿发育异常的重要指标。二代测序技术的发展也使染色体非整倍体无创产前筛查(noninvasive prenatal test,NIPT)在临床实践中得到了迅速的开展和推广应用。在NIPT筛查中,血浆中胎儿游离DNA比例是整体检测性能的关键参数,在一定程度上确保对检测结果作出正确的临床解释。本综述中,我们对目前NIPT中胎儿游离DNA比例的检测方法和生物信息学算法进行介绍,并简单讨论各个方法的优缺点。

孕妇血浆胎儿游离DNA检测对胎儿染色体拷贝数异常的诊断意义

目的探讨应用孕妇血浆胎儿游离DNA高通量基因测序技术检测胎儿染色体拷贝数的准确性和实际临床可行性。方法选择需做产前诊断的153名孕妇，采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA，分析胎儿染色体拷贝数；同时行羊膜腔穿刺进行胎儿染色体核型分析。结果153名孕妇中，母体血浆游离DNA平行测序技术共检测出6例染色体异常高风险胎儿。羊水分析证实6例均为染色体异常，其中非整倍体5例，分别为47，XYY；45，X；47，XY，＋18；47，XY，＋21以及47，XY，＋13；染色体结构异常1例，核型为46，XY，der（13；21）（q10；q10），＋21。另检出染色体多态性3例（1例46，XY，21p＋；2例46，XY，Yqh-）。两种方法检测胎儿染色体拷贝数异常结果一致。结论母体血浆游离DNA高通量测序分析可以用于胎儿染色体拷贝数异常的检测，具有无创、灵敏度高、特异性强等优点，在胎儿染色体拷贝数异常疾病的产前检测中具有广泛的应用前景。

孕妇血样采集后体外存放对血浆中胎儿游离DNA水平的影响

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性,单相酶扩散法测定血浆DNA酶活性。结果:血样体外存放36h后,血浆中β-globin基因的拷贝数较存放6h的样品显著增加,而SRY基因拷贝数明显减少;4℃存放条件下,妊娠晚期孕妇外周血中胎儿DNA占总DNA百分比从6h的(10.3±5.6)%下降到36h的(3.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。体外存放6h的血样中基本未检出死亡细胞,而存放36h的血样中分别检出了坏死和凋亡的白细胞;36h样品血浆中LDH活性较6h样品显著升高(P<0.05)。单相酶扩散法结果表明,血浆DNA酶在4℃时虽然活性显著减弱,但仍然保持降解DNA的能力。结论:血样采集后体外存放时间过长会导致血浆总游离DNA增多,而胎儿DNA减少,这种变化可能与血样体外存放过程中白细胞死亡和血浆DNA酶对胎儿DNA的降解作用有关;胎儿DNA抽提应在血样采集后尽早(6h内)进行。

孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测

本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断。选择50例妊娠14-20周的贫血孕妇,采用gap-PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血。结果表明:在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失--SEA,2例为右侧缺失-α3.7。结论:采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种最常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义。

孕妇血浆游离胎儿DNA中地中海贫血突变的基因诊断

本研究旨在建立一种妊娠早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见地中海贫血突变的导流杂交技术,用于地中海贫血的产前诊断。采用PCR技术与低密度基因芯片导流杂交技术相结合,设计6组PCR引物单管多重PCR体系及29种DNA探针,快速检测60例妊娠5-17周贫血孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血及β-地中海贫血。结果表明:60例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中,检出缺失型α-地中海贫血胎儿4例,β-地中海贫血胎儿3例,α及β混合型-地中海贫血胎儿1例。结论:采用本检测方法能快速准确地检测出3种常见的缺失型α-地中海贫血及17种常见β-地中海贫血的突变。

孕妇血浆中胎儿游离DNA用于产前诊断的研究进展

产前诊断是指在胎儿出生前利用各种方法诊断胎儿是否患有某种遗传病或先天性疾病的一种手段，是出生缺陷工作的重要任务，对于提高我国出生人口的素质有着特别重要的意义。现在的产前诊断技术大部分都属侵入性检查，有引起孕妇发生自然流产的危险，另外取材也受怀孕月份的限制。超声波检查虽然是非侵入性产前诊断的较好方法，只是诊断结果可能存在误差。开展非侵入性的准确的检测手段是广大高危孕妇的迫切需要。

早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的检测

目的:建立一种检测早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的新方法。方法:从50例妊娠7、8、9周的孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测其中的Y性别决定区(SRY)基因。结果:38例早孕孕男胎妇女中32例血浆中出现SRY基因,灵敏度84.21%;12例早孕孕女胎的妇女血浆中均未出现SRY基因,特异度100%。结论:用实时荧光定量PCR技术可用来检测早孕妇女血浆中的胎儿游离DNA,这对无创性早期产前基因诊断方法的建立具有重大意义。

孕妇血浆中的游离胎儿DNA及其意义

孕妇血浆中已证实存在着胎儿来源的游离DNA。作为一种胎儿新的检测材料,游离胎儿DNA的发现为非侵入性产前基因诊断提供了可能。有关游离胎儿DNA的临床应用以及其生物学包括来源、动力学和性质等,近年来引起人们很大关注。实时定量PCR技术是目前检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的主要方法。实验室的一些技术因素会影响游离胎儿DNA的检测。尽管有些问题还不很清楚,但母体血浆中游离胎儿DNA的检测对于胎儿遗传病和妊娠相关性疾病的非侵入性产前诊断仍具有重要临床意义。讨论孕妇血浆中游离胎儿DNA的最新研究状况。

孕妇血浆中游离胎儿DNA对检测胎儿ABO血型40例分析

1997年Lo等研究证实,在母体外周血中存在着相对较为丰富的游离胎儿DNA,这一发现为无创性产前诊断开辟了崭新途径[1].孕妇血浆中的游离胎儿DNA可用来检测胎儿ABO血型,对于预防新生儿溶血病、预测与ABO血型基因连锁的遗传性疾病，治疗血型不合妊娠引起的胎儿溶血性贫血等疾病，具有重要的意义．笔者提取血型为0型、丈夫血型为非0型的孕妇血浆中的胎儿DNA，采用复合PCR—RFLP方法检测胎儿ABO血型．

孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA及RNA的研究进展

当今,无创伤性产前诊断越来越受到人们的关注,许多学者利用孕妇血中胎儿细胞进行产前遗传疾病的研究,但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量稀少,必须通过复杂的富集分离技术,但价格昂贵,因此限制了其临床推广应用。近来孕妇血浆及血清中的胎儿游离DNA及RNA的发现为无创伤性产前遗传病诊断开辟了一个新的天地。由于胎儿游离DNA及RNA具有含量较高且产后很快被清除等优点,使之成为未来最具潜力的无创伤产前诊断方法。

孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA的研究进展

无创伤性产前诊断是近年来人们关注的热点,孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA的存在,为无创伤性产前诊断开辟了新的途径。本文介绍了胎儿游离DNA的来源、生物学特点及在产前诊断中的应用,胎儿游离DNA具有含量高且产后很快清除等优点,有广泛的临床应用价值。

孕妇外周血游离胎儿DNA用于无创产前检测的研究进展

产前检查对于预防控制新生儿疾病发生和优生优育有重要意义,孕妇外周血游离胎儿DNA(cffDNA)是一种无创产前检测方法,并且敏感度、精准度和特异度均高达99%,加阳性率大约仅仅只有0.1%,其在鉴别胎儿血型、性别、染色体相关疾病、单基因病等方面应用广泛。为此,本文综述了cffDNA用于无创产前检测的研究进展,旨在为临床提供相关参考依据。

孕妇血浆游离胎儿DNA检测在无创产前诊断中的应用价值研究

目的探讨孕妇血浆游离胎儿DNA检测在无创产前诊断中的价值。方法 2011年1月至2013年12月该院46例孕妇作为研究对象,通过柱分离法获得孕妇的血浆DNA,并通过聚合酶链反应(PCR)技术对孕妇外周血浆中游离胎儿DNA的性别决定基因(SRY)进行检测,并通过ATL1基因鉴别胎儿的性别。结果 46例孕妇中28例产男性婴儿,18例产女性婴儿,其中男性胎儿中的26例能通过PCR技术扩增出SRY基因,而女性胎儿中有17例经过PCR技术扩增出ATL1基因,其特异度为94.4%(17/18),而灵敏度为92.9%(26/28),检测的总符合率为93.5%(43/46)。结论将孕妇血浆游离胎儿DNA检测应用到产前检查检测中,其灵敏度和特异度都较高,且检查过程中无创伤,能减少不良事件的发生概率,值得临床推广和应用。

血浆胎儿游离DNA在高龄孕妇唐氏综合征筛查中的价值

目的探讨血浆胎儿游离DNA(cffDNA)在高龄孕中期唐氏综合征(DS)产前筛查(唐筛)中的应用价值。方法收集2012年2月至2014年5月在该院建卡产检并进行血清学筛查和胎儿游离DNA高通量基因测序技术产前诊断的高龄孕妇398例作为研究对象,以羊水/脐血穿刺细胞核型分析为准,比较传统血清学筛查与高通量无创DNA检测方法应用于高龄孕中期唐筛效率,评价其检测灵敏度和特异度。结果血清学筛查出高风险孕妇26例(阳性率8.7%),其中DS高风险(21-三体)孕妇20例(唐筛阳性率6.7%),18-三体5例(1.7%),13-三体2例(0.7%)。无创DNA检测出高风险孕妇9例(阳性率3%),均在血清学筛查出的高风险孕妇范围之内,其中21-三体6例((2%)),18-三体3例(1%)。高风险孕妇羊水/脐血穿刺细胞核型分析21-三体5例(1.7%),18-三体阳性2例(0.7%),正常2例(0.7%)。血清学筛查灵敏度、特异度和准确度分别为100.0%、93.3%和94.9%,无创DNA检测灵敏度、特异度和准确度分别为100.0%、97.9%和99.6%。两种检查方法的总阳性率、唐筛阳性率、唐筛假阳性率、特异度、准确度及阳性预测值比较,差异均有统计学差异(P<0.05)。结论运用无创DNA检测技术分析cffDNA对高龄孕妇DS筛查具有较高的灵敏度、特异度和准确度,值得临床推广。

孕妇外周血中胎儿游离DNA在产前诊断中的应用

孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现,为无创性产前诊断开辟了一条新途径。检测孕妇血浆中特异的胎儿DNA序列已被用于胎儿性连锁疾病鉴定、RhD血型检查和多种单基因遗传病的产前诊断;游离DNA水平的变化还可被用作某些妊娠相关疾病如先兆子、早产和胎儿染色体疾病的临床诊断新指标。本文对母体外周血中胎儿游离DNA的生化特征及其临床应用研究,进行了总结和分析。

孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究进展

在很长的一段时间里,人们认为人类血浆中不可能存在基因物质。直到1948年,Mandel等[1]报道了在健康人群和患者的血浆中都含有核苷酸之后,人们才认识到,除了有核细胞外,血浆中也含有基因物质。之后,研究人员发现癌症患者血清和血浆中的DNA分子具有肿瘤特异性，

孕妇血浆中胎儿DNA在产前诊断中的初步应用——胎儿SRY基因、STR基因型的鉴定

目的 :利用孕妇血浆中游离胎儿 DNA进行非创伤性产前基因诊断。方法 :对 6 5例 5～ 4 1孕周孕妇血浆胎儿DNA进行 SRY的 PCR扩增 ,以检出男性胎儿 DNA;同时采用短串联重复序列 (STR)多态位点即 CSFIPO、TPOX、THO1(CTT)三个位点的复合扩增方法对 19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆 DNA进行扩增 ,以检出女性胎儿 DNA。两种扩增均采用母体血浆直接作为模板进行。结果 :SRY- PCR中 ,4 6例妊娠男性胎儿的孕妇中 ,有 30例血浆中出现 SRY基因扩增带 ,19例妊娠女性胎儿的孕妇血浆中仅 1例孕中期者为假阳性 (5 .3% )。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为 6 0 %、84 .0 9%、5 0 % ,总符合率为 73.85 % .CTT- PCR中 ,19例妊娠女胎孕妇血浆中有 15例检出父源性等位基因即女性胎儿 DNA。结论 :应用孕妇血浆中胎儿 DNA作产前诊断敏感性和特异性较高 ,尤其是在孕中期 ,它是一种非创伤性产前诊断方法 ,适用于临床。

基于RASSF1A为标志的无损性孕妇血浆中胎儿RHD-DNA检测方法的建立

目的建立基于表观遗传标志RASSF1A为标志的孕妇外周血浆中胎儿RHD-DNA检测路径,用于无损性产前胎儿RhD血型预测。方法首先采用PCR-SSP对孕妇外周血细胞基因组DNA做RHD基因多个外显子检测,以确定其RHD基因型;其次对无外显子表达或部分外显子表达的孕妇,对其外周血浆中胎儿游离的DNA采用RTPCR扩增其RHD基因exon7与10,同时扩增SRY基因;另对exon 7、10和SRY都为阴性的标本检测甲基化RASSF1A基因作为胎儿DNA存在的标志。待胎儿分娩后,将基因检测结果与婴儿血清学检测结果比对,以评价该方法的准确性。结果 57位受检孕妇中,含RHD全部外显子者有17人;3人含exon 1和10,为RHD1-CE(2-9)-D10杂化基因;37人不含外显子。后两者40名孕妇中,22人检测出SRY基因,出生胎儿均为男性;另有2人为假阴性结果。39人检测出exon 7和10,其中38人基因型结果与胎儿出生后血清学结果相符,1例假阳性结果;1人未检测到SRY、exon 7和10的标本,检测到RASSF1A证明胎儿DNA存在,且胎儿出生后证实为RhD阴性女婴。结论建立了基于RASSFIA为标志的、符合中国人RHD基因特点的RhD阴性孕妇血浆游离DNA中胎儿RHD基因的检测程序,可用于临床无损性产前胎儿RhD血型预测。