孕期酒精暴露对新生大鼠延髓基本节律性呼吸放电的作用

目的：探讨孕期酒精暴露对子代新生大鼠延髓脑片基本节律性呼吸放电（rhythmic respiratory discharge activity, RRDA）的作用。方法制作包含面神经后核内侧区（the medial region of the nucleus retrofacialis, mNRF）并保留舌下神经根的新生大鼠离体延髓脑片标本，给予灌流改良的Kreb＇s液（modified Kreb＇s solution, MKS），使用吸附电极记录延髓脑片腹侧面舌下神经根RRDA，分析RRDA的变化。实验分为5组：对照组、4%酒精暴露组、6%酒精暴露组、8%酒精暴露组和10%酒精暴露组，研究孕期不同浓度酒精暴露对RRDA的作用。结果对照组、4%酒精暴露组、6%酒精暴露组、8%酒精暴露组各组组内RRDA在50 min内吸气时程（TI）、呼吸频率（RF）、放电积分幅度（IA）无统计学差异，10%酒精暴露组RRDA节律不规整；与对照组相比，4%-10%酒精暴露组的RRDA随酒精浓度增加逐渐降低，TI缩短、RF下降、IA减弱。结论孕期酒精暴露抑制子代新生大鼠延髓脑片舌下神经根RRDA，这可能是孕期酒精暴露抑制子代呼吸功能的基础。

孕期酒精暴露与CITED2基因CpG岛甲基化关系的研究

目的:研究孕期酒精暴露对小鼠胚胎及幼鼠心脏CBP/P300反式作用因子2(CBP/P300-interacting transactivator with EDrich 2,CITED2)基因表达的影响,探讨孕期酒精暴露与CITED2基因启动子区Cp G岛甲基化水平的关系。方法:以10μl/(g·d),56%的饮用白酒给20只孕鼠[胚胎小鼠发育期(E0.5-E20.5)]连续灌胃作为干预组,生理盐水灌胃20只孕鼠作为对照组。取E14.5、E17.5、新生鼠心脏及生后7 d小鼠心脏组织作为标本,q RT-PCR检测心脏发育相关基因CITED2、GATA4结合蛋白4(GATA binding protein 4,GATA4)m RNA表达量的变化,MSP及BSP检测CITED2基因启动子区Cp G岛甲基化变化情况。结果:孕期酒精暴露致小鼠心脏发育相关基因GATA4在E14.5及E17.5[(1.538±0.071)、(1.734±0.101)]较对照组[(0.819±0.176)、(1.115±0.118)]表达水平升高,分别为其对照组1.88、1.56倍(P<0.05)。CITED2的表达在E14.5、E17.5及新生小鼠(0.896±0.069,1.336±0.121,0.988±0.108)较对照组(1.246±0.158,1.833±0.086,1.355±0.126)表达水平降低,分别为其对照组0.72、0.73、0.74倍(P<0.05),酒精暴露组生后7 d CITED2 m RNA表达量(1.276±0.097)较正常组(1.024±0.078)降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:孕期酒精暴露对CITED2基因m RNA表达水平起到了负调节作用,说明孕期酒精暴露通过了某种途径对CITED2基因表达起到了抑制作用。孕期酒精暴露可能并不是通过改变CITED2基因启动子区Cp G岛甲基化水平来影响CITED2基因的表达,从而影响心脏发育。

孕期酒精暴露诱导仔鼠胰岛素抵抗与海马应激损伤

目的探讨在孕期酒精暴露模型中胰岛素抵抗与海马应激损伤的相关性及其机制。方法利用C57BL/6J小鼠建立孕期酒精暴露模型,分为对照组、中剂量组和高剂量组;对各组出生第7天(P7)、P14、P30仔鼠进行空腹血糖和空腹血胰岛素测定并计算胰岛素抵抗指数;利用免疫荧光染色法观察各组年龄点仔鼠海马CA1区细胞应激损伤指标c-Fos、核因子-κB(NF-κB)及炎症因子环氧合酶-2(COX2)的阳性细胞数;免疫印迹法检测P7、P14仔鼠海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白的相对表达量以印证免疫荧光染色结果。结果酒精暴露后仔鼠胰岛素抵抗指数升高,且具有酒精剂量依赖性(P<0.05,n=90);酒精暴露后各年龄点仔鼠海马组织CA1区应激损伤指标c-Fos、NF-κB和炎症因子COX2阳性细胞数增多,存在酒精剂量依赖性(P<0.05,n=90)和长时程效应;孕期酒精暴露后海马组织c-Fos、NF-κB激活蛋白表达量增多(P<0.05,n=30),同时存在酒精剂量依赖性和长时程效应,与免疫荧光结果一致。结论孕期酒精暴露可诱导仔鼠产生胰岛素抵抗,其原因可能是氧化应激的结果;胰岛素抵抗可能参与胎儿酒精综合症大脑损伤及其发病机制,c-Fos、NF-κB通路可能是胰岛素抵抗损伤大脑的分子机制之一。

孕期酒精暴露抑制低氧环境下新生大鼠耗氧量和基本节律性呼吸放电

目的研究孕期酒精暴露对低氧环境下新生大鼠在体耗氧量和离体延髓脑片基本节律性呼吸放电（RRDA）有无抑制作用。方法成年大鼠分为酒精暴露组和对照组,酒精暴露组从合笼前3天开始以8%酒精水溶液为唯一饮用水源,对照组正常饮食,其余饲养条件相同,使用两组孕鼠产下的新生大鼠：1采用体积描记法测量2-10 d新生大鼠在空气、15%氧浓度、10%氧浓度、5%氧浓度下单位时间内耗氧量,比较两组新生大鼠在不同氧浓度下耗氧量有无差异;2使用2 d新生大鼠制作离体延髓脑片标本,记录RRDA,依次使用经95%氧O2＋5%二氧化碳CO2、80%O2＋4.2%CO2＋15.8%氮N2、65%O2＋3.4%CO2＋31.6%N2、50%O2＋2.6%CO2＋47.4%N2充分饱和的0℃改良kreb’s（MKS）从高氧到低氧灌流脑片,记录并分析各组脑片RRDA的改变。结果 1在体耗氧量实验显示在空气、15%氧浓度、10%氧浓度下两组新生大鼠单位时间内耗氧量差异无统计学意义,在5%氧浓度下,酒精暴露组耗氧量低于对照组。2酒精暴露组脑片放电弱于对照组,即RRDA的吸气时程（TI）、呼吸周期（RC）、放电积分幅度（IA）均弱于对照组。3随着灌流液氧浓度下降,两组脑片放电均逐渐减弱,TI缩短、RC延长、IA降低,酒精暴露组RRDA降低程度大于对照组。结论 1孕期酒精暴露抑制新生大鼠在低氧浓度下摄取氧的能力及离体延髓脑片RRDA。2两组新生大鼠整体耗氧量在5%氧浓度下差异有统计学意义,而离体脑片放电在80%氧浓度即下降的实验结果间接证实外周化学感受器对呼吸有着重要的调节作用。

孕期酒精暴露对子鼠视皮质突触数量影响的体视学研究

建立孕期酒精暴露(PAE)模型,研究孕期酒精暴露对小鼠视皮质突触数量的影响。利用免疫荧光染色技术标记对照组与PAE模型组(低剂量和高剂量)子鼠出生后0、7、14及30d视皮质突触前体的synaptophysin蛋白表达,以此来代表突触,观察其数密度变化,并利用Western blotting检测对各实验组子代小鼠视皮质synaptophysin的表达量进行半定量分析。突触数密度值统计学分析显示:对照组、低剂量和高剂量组间比较差异显著(P<0.05),0、7、14及30d差异显著(P<0.05),年龄与剂量之间存在交互作用(P<0.05)且剂量的影响作用更大。Western blotting检测结果与免疫荧光统计结果一致。这表明PAE对突触的影响具有长时程效应和剂量相关性,突触丢失的长时程放大效应可能是患儿精神发育迟滞和记忆力下降的主要原因。