存活素和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B在骨髓增生异常综合征诊断及患者预后评估中的临床价值研究

目的:探讨存活素(Survivin)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子2B(P15INK4B)在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断及患者预后评估中的临床价值。方法:选取MDS患者150例为观察组,另选取同期体检健康者150例为对照组,比较Survivin、P15INK4B阳性表达及mRNA相对表达水平。对观察组患者进行为期1年的预后随访,比较不同预后患者Survivin、P15INK4B mRNA相对表达水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析Survivin、P15INK4B对MDS的诊断价值,以及对MDS患者不良预后的评估价值。结果:观察组Survivin阳性表达率及mRNA表达水平高于对照组,P15INK4B阳性表达率及mRNA表达水平低于对照组(均P<0.05)。150例MDS患者中50例病死,1年生存率为66.67%(100/150),病死组Survivin mRNA表达水平高于存活组,P15INK4B mRNA表达水平低于存活组(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS均有较高诊断价值,两者联合检测的诊断价值更高(均P<0.05)。Survivin、P15INK4B对MDS患者不良预后均有较高评估价值,两者联合检测的评估价值更高(均P<0.05)。结论:MDS患者Survivin高表达,且与患者预后呈正相关;P15INK4B低表达,且与患者预后呈负相关;两者均可用于MDS的诊断及不良预后的评估,联合检测有更高的价值。

survivin(存活素)在早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达

目的:研究早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中survivin(存活素)的组织定位和表达,探讨survivin与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法:采用免疫组化SP法检测14例正常早孕绒毛、14例葡萄胎、12例侵蚀性葡萄胎及12例绒癌滋养细胞中survivin的表达。结果:survivin在滋养细胞细胞核及细胞浆的表达强度PU值依下列顺序增加:正常早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组及绒癌组,各组间的表达强度差异有统计学意义(P <0 0 5 )。结论:适度survivin是正确完成胚胎细胞有丝分裂和细胞增殖的必要条件。

存活素siRNA表达质粒mU6/survivin的抑癌机制研究

目的:在本课题组报导存活素siRNA表达质粒(mU6/survivin质粒)能高效剔降乳腺癌细胞MCF-7中存活素表达的基础上,进一步探讨其抑癌机制。方法:采用MTT法、流式细胞术、Hoechst细胞形态染色和Western blotting等检测mU6/survivin质粒对乳腺癌MCF-7细胞多项生物学指标的影响。结果:mU6/survivin质粒作用后,MCF-7细胞的增殖明显地受到抑制;细胞周期被阻滞在G1期,细胞呈现多核化、巨核化;caspase-3被激活,表达升高;IκBα、Cyt C和P21WAF1蛋白表达升高,NF-κB(p65)蛋白表达无明显改变。结论:mU6/survivin质粒沉默MCF-7细胞中存活素表达后,DNA受损细胞停滞在G1期,细胞增殖受到抑制,此过程与Caspase级联放大、线粒体凋亡通路以及细胞周期调控等有关。细胞逃逸有丝分裂关卡的检查,阻断有丝分裂导致的细胞裂亡是其死亡的主要方式。

存活素蛋白Survivin在SD大鼠牙胚发育中的表达

目的观察存活素蛋白在SD大鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育过程中的作用。方法建立SD大鼠牙胚发育模型,用免疫组化方法检测存活素蛋白在SD大鼠牙胚不同发育时期中的表达情况。结果图像分析显示存活素蛋白的表达在胎鼠牙胚的蕾状期增强,帽状期、钟状早期减弱,出生后再增强以后随着发育的进行逐渐减弱,呈双波形变化趋势,经统计学检验出生后3.5d与出生后5.5d之间的差异无显著性,其他各组之间均存在显著性差异。结论存活素蛋白可能参与了牙胚发育过程。

温度对小鼠海马神经元细胞存活素基因表达及细胞活力影响的初步研究

目的观察不同温度变化,尤其是高温对神经元细胞中存活素(SVV)基因的表达水平及细胞活力的影响。方法将培养好的小鼠海马神经元细胞(HT22)随机分为4组:对照组在37℃下培养,将3个实验组分别在33℃、39℃及41℃下培养,各组的培养时间分别为3 h、6 h、12 h、24 h。采用CCK-8法检测细胞活力;通过Western blot检测SVV基因的蛋白表达水平;Real-time PCR检测SVV基因的mRNA表达水平。结果与对照组相比,39℃、41℃组细胞活力下降,SVV基因蛋白表达水平及mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高温可对小鼠海马神经元细胞SVV基因的表达水平及细胞活力产生影响。

Hp感染与胃癌组织凋亡抑制基因Survivin、MMP-2的表达及其关联性

目的 研究幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌组织凋亡抑制基因存活素(Survivin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达及其两者的关联性。方法 选取120例胃癌患者为研究对象,采用免疫组化染色法检测癌组织及癌旁组织中Survivin、MMP-2表达,分析其与临床病理特征关系;并检测Hp阳性情况,对比不同感染情况胃癌患者的病理特征及组织凋亡抑制基因Survivin、MMP-2表达,采用Spearman分析Hp感染与Survivin、MMP-2表达的关系。结果 Survivin、MMP-2在胃癌组织中的阳性表达率为76.67%、73.33%,均高于癌旁组织的16.67%和13.33%(P<0.05)。Survivin、MMP-2表达与TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05);与年龄、性别、肿瘤直径无关(P>0.05)。Hp阳性65例,阴性55例。Hp阳性组患者肿瘤分化程度为低-中分化、肿瘤浸润深度及淋巴结转移发生率均高于Hp阴性组(P<0.05),2组年龄、性别、TNM分期、肿瘤直径比较无差异(P>0.05)。Hp阳性组胃癌组织中Survivin、MMP-2阳性表达率为87.69%、83.08%,均高于Hp阴性组的63.64%和61.82%(P<0.05)。Spearman相关分析显示,Hp感染与Survivin、MMP-2表达呈正相关性(γ=0.357、0.349,P<0.05)。结论 Survivin、MMP-2表达均与胃癌发生有关,且Hp感染能够增加胃癌组织凋亡抑制基因Survivin、MMP-2表达。

肝细胞肝癌中端粒酶和Survivin的表达及临床病理意义

原发性肝癌中90%为肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)。目前,肿瘤个体化治疗及靶向治疗仍然是肿瘤治疗的热点之一。端粒酶作为细胞复制过程启动阶段的重要酶蛋白之一,在肿瘤细胞分裂过程中同样发挥着重要作用。存活素Survivin是凋亡抑制因子家族成员之一,可以防止细胞发生凋亡,同样在肿瘤细胞的生长中发挥重要作用。本文利用免疫组化技术检测以上两种标记物在HCC中的表达并通过分析其与一些临床特征的关系来判断其对肿瘤患者预后的影响。

去氧地胆草素对人大细胞肺癌H460细胞株的抑制作用研究

为进一步研究去氧地胆草素(Deoxyelephantopin,DET)对人大细胞肺癌H460细胞株的抑制作用,本研究通过网络药理学分析,确定去氧地胆草素影响人大细胞肺癌H460细胞株的潜在信号通路。再通过细胞增殖和凋亡实验,研究不同浓度去氧地胆草素对人大细胞肺癌H460细胞株增殖和凋亡的影响。网络药理学分析表明,去氧地胆草素可能通过影响凋亡相关蛋白诱发细胞凋亡从而抑制细胞增殖。MTT和细胞凋亡实验结果显示,去氧地胆草素能有效抑制H460细胞的增殖,能促进H460细胞的凋亡,且均呈剂量依赖效应。

HCC与存活素（survivin）——在肝细胞癌中存活素的核易位：癌细胞生长的关键？

存活素近来被认为是一种抗凋亡蛋白和细胞分裂的调节因子。在肝细胞癌（HCC）和正常肝组织中该蛋白的表达和定位尚未完全被阐明。作者在47例HCC和癌旁肝组织标本中检测了存活素、Fas、增殖细胞核抗原（PCNA）及凋亡的表达。为了进一步确定存活素表达与细胞增殖及凋亡的关系，作者在同一HCC标本中对存活素和PCNA进行了免疫染色和TUNEL双重染色。47例HCC患者中有35例出现存活素阳性的免疫染色（74％）。

营养水平对妊娠早期母猪胚胎存活和瘦素、孕酮分泌及基因表达影响

本试验选用63头长白-大白杂交初产母猪,研究营养水平对初产母猪妊娠早期胚胎存活和瘦素(leptin)、孕酮分泌及胚胎瘦素、瘦素受体(Ob-R)、信号传导和转录活化因子-3(STAT-3)、孕酮受体(PGR)、DNA甲基化转移酶-1(DNMT-1)基因表达的影响。将配种后的母猪随机分到高、中、低3个营养水平组按2倍、1.2倍和0.6倍维持需要(分别记为2.0M、1.2M和0.6M)供给饲粮,妊娠12、25和35 d屠宰母猪收集血清和胚胎,用ELISA方法测定血清中瘦素、孕酮水平,用RT-PCR方法研究目的基因在胚胎中的表达差异。结果表明:①胚胎存活率,妊娠12、25和35 d时,1.2M组均显著高于2.0M组(P<0.05);1.2M组妊娠12 d时与0.6M组间差异不显著(P>0.05),而妊娠25、35 d高于0.6M组(P<0.05);②血清瘦素水平,妊娠12 d时,2.0M组显著高于1.2M组(P<0.05),极显著高于0.6M组(P<0.01);妊娠25和35 d时,2.0M组极显著高于1.2M和0.6M组(P<0.01);1.2M组极显著高于0.6M组(P<0.01)。血清孕酮水平,妊娠12、25和35d时,2.0M组极显著低于1.2M组和0.6M组(P<0.01),1.2M组和0.6M组之间差异不显著(P>0.05);③营养水平对胚胎存活重要基因表达的影响,leptin和Ob-R基因mRNA的相对表达量在妊娠12、25和35d时,2.0M组显著高于1.2M和0.6M组(P<0.05),而1.2M与0.6M组差异不显著(P>0.05)。妊娠12和25 d时,2.0M组胚胎STAT-3基因的相对表达极显著高于0.6M组(P<0.01);妊娠35d时,2.0M和1.2M组极显著高于0.6M组(P<0.01)。妊娠12、25和35 d时,2.0M组胚胎DNMT-1的相对表达显著高于0.6M组(P<0.05)。妊娠12 d时,各水平组胚胎PGR表达差异不显著(P>0.05),妊娠25 d时,0.6M组极显著高于2.0M组(P<0.01),显著高于1.2M组(P<0.05),妊娠35 d时,1.2M组极显著高于2.0M和0.6M组(P<0.01),0.6M组显著高于2.0M组(P<0.05)。以上结果表明在妊娠35 d以内以中营养水平饲喂初产母猪具有较高的胚胎存活率。营养水平显著影响瘦素、孕酮的分泌及lep-tin等基因的表达,瘦素、孕酮分泌过高、过低均对胚胎发育不利,高水平饲喂及严重限饲引起胚胎中leptin、Ob-R、STAT-3、PGR、DNMT-1基因表达变化,降低胚胎存活率。

凋亡抑制因子存活素的研究进展

凋亡抑制因子存活素(survivin)在细胞中呈周期依赖性表达,与有丝分裂期纺锤体微管相互作用,调节G2/M期,并可直接抑制caspase-3和caspase-7的活性。在肿瘤发生发展中,存活素与肿瘤细胞的凋亡负相关,与细胞增殖活性和血管生成正相关。在人类肿瘤中,存活素表达上调可预示生存期缩短和预后不良。体内、外研究中应用存活素反义核酸和突变体可诱导肿瘤细胞凋亡,使肿瘤细胞的生长减弱,并可增加肿瘤细胞对化疗和X射线辐射的敏感性。提示存活素可能是肿瘤诊断和治疗的新靶点。

地塞米松对^(125)I内照射裸鼠A549肺癌细胞存AQP5及活素survivin表达的影响

目的:探讨地塞米松对^(125)I放射性粒子内照射A549肺癌细胞AQP5及存活素(survivin)表达的影响。方法:共25只A549肺腺癌皮下种植BALB/c-nu裸鼠模型随机分为实验组(n=12)和对照组(n=13),实验组进行^(125)I放射性粒子植入+地塞米松(鼠尾静脉注射),对照组进行^(125)I放射性粒子植入,7 d后处死裸鼠行AQP5及survivin免疫组化检测。结果:实验组的AQP5阳性表达率高于对照组(分别为91.6%和53.8%,P=0.046),survivin的阳性表达率低于对照组(分别为33.3%和76.9%,P=0.036)。结论:地塞米松可能通过上调AQP5的表达进而增加A549肺癌细胞对^(125)I的辐射敏感性,其机制与survivin表达抑制相关。

Survivin、瘦素在子宫肌瘤中的表达及其相关性

目的探讨Survivin及瘦素(Leptin)在子宫肌瘤中的表达意义及其相关性。方法用免疫组化SP法、SABC法和图像分析技术分别检测45例正常子宫肌层组织和45例子宫肌瘤组织中的Survivin、Leptin的表达情况。并对二者的表达行Spearman等级相关分析。结果Survivin、Leptin在子宫肌瘤中的阳性表达率(80.0%,64.4%)明显高于在正常子宫肌层组织的表达(17.8%,40.0%),差异有极显著性意义(P<0.01),且子宫肌瘤组织Survivin和Leptin的表达强度呈正相关(r=0.964,P<0.01)。结论Survivin、Leptin可能在子宫肌瘤细胞的增殖和凋亡中起协同作用,共同参与子宫肌瘤的发生发展。

存活素siRNA表达质粒的构建及其对MCF-7细胞细胞周期和增殖的调控(英文)

背景与目的存活素特异地在肿瘤组织中过表达,许多报道表明抑制它的功能对肿瘤治疗有利。RNA干扰被证明是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术。本研究的目的在于构建存活素基因的小分子干扰RNA(siRNA)表达质粒,并检测该质粒在乳腺癌细胞中的生物学功能。方法应用含有U6启动子的mU6pro载体构建存活素siRNA质粒,RT-PCR和Westernblot法检测该质粒转染MCF-7细胞后存活素表达的变化,流式细胞仪和MTT法分别检测其对细胞周期和对细胞增殖的影响。结果存活素siRNA质粒明显下调MCF-7细胞中存活素的表达,阻断细胞周期在G1期,显著抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。结论通过RNA干扰,存活素的表达在mRNA和蛋白质水平上被下调。

存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞增殖和凋亡的影响。方法以脂质体介导存活素反义寡核苷酸转染体外培养的角质形成细胞。采用MTT方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞生长曲线的影响;采用RT-PCR方法观察存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞存活素表达水平的影响;采用流式细胞仪检测存活素反义寡核苷酸对角质形成细胞细胞周期和凋亡的影响。结果存活素反义寡核苷酸作用于角质形成细胞后,细胞增殖受到明显抑制,存活素mRNA表达水平明显下降,细胞出现明显的凋亡现象。结论存活素反义寡核苷核酸能够抑制角质形成细胞增殖,促进角质形成细胞凋亡。提示存活素可能会成为一个新的治疗银屑病的靶分子。

阿司匹林对局灶性脑缺血-再灌注大鼠神经调节蛋白1和存活素表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血-再灌注后(CI/RP)神经调节蛋白1(NRG-1)和存活素(Survivin)的表达规律及阿司匹林对其表达的影响。方法取健康雄性SD大鼠60只,将其随机分为阿司匹林组和对照组,每组30只。每组按再灌注时间分为6、24h及3、5、7d亚组,每个亚组6只大鼠。采用线栓法制作大脑中动脉阻塞(2h)模型。阿司匹林组于再灌注后即刻及每日清晨腹腔注射阿司匹林(80mg/kg,溶解于1.5ml的10%L-赖氨酸等渗盐水溶液中)1次。对照组在相同时间点注射10%L-赖氨酸1.5ml。观察再灌注后不同时间大鼠神经功能缺损评分及NRG-1、存活素的表达。结果①再灌注后24h,3、5、7d神经功能缺损评分,阿司匹林组分别为1.47±0.11、1.22±0.08、0.85±0.15、0.59±0.12,对照组为1.87±0.18、1.45±0.14、1.05±0.08、0.75±0.15,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。②CI/RP后各时间点阿司匹林组和对照组大鼠梗死侧神经元的细胞核及细胞质均有NRG-1和存活素的表达。梗死中心区两种阳性细胞表达数在再灌注后6h最多,随后逐渐减少,7d最少;梗死周边区6h后仅有少量的NRG-1和存活素阳性细胞,3d达高峰,以后逐渐减少,各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05)。阿司匹林组各时间点NRG-1和存活素阳性细胞数较对照组均多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺血可诱导大鼠神经元NRG-1和存活素的表达;阿司匹林上调缺血后NRG-1的存活素表达,可能是其神经保护作用机制之一。

电刺激治疗对脑梗死大鼠运动功能和脑组织微管相关蛋白-2及存活素表达的影响

目的探讨电刺激对脑梗死大鼠运动功能和脑组织微管相关蛋白-2(MAP-2)及存活素表达的影响。方法采用线栓法制作大鼠局灶性脑梗死模型。制模后24h起,分别给予大鼠瘫痪侧(单侧)或双侧肢体电刺激治疗3d、7d、14d和21d。电刺激前、后各时间点用平衡木试验(BWT)检测大鼠的肢体运动功能,用免疫组化染色检测梗死灶周围大脑皮质MAP-2和存活素的表达水平,并与脑梗死对照组和假手术组大鼠比较。结果治疗第7d起电刺激组大鼠瘫痪肢体的BWT评分明显高于对照组(均P<0.05),治疗14d起双侧电刺激组BWT评分明显高于单侧电刺激组(均P<0.05)。治疗第7d起,电刺激组梗死灶周围脑组织MAP-2表达水平明显高于对照组(均P<0.05);治疗14d起,双侧电刺激组MAP-2的表达水平明显高于单侧电刺激组(均P<0.05);治疗21d时与假手术组MAP-2表达水平比较差异无统计学意义。电刺激组治疗后各时间点梗死灶周围脑组织存活素表达水平明显高于假手术组(均P<0.05),治疗7d、14d存活素表达水平明显高于对照组(均P<0.05),达到高峰;而双侧电刺激组明显高于单侧电刺激组(均P<0.05);治疗21d时,电刺激组和对照组存活素表达水平有下降,单侧、双侧电刺激组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论电刺激治疗能促进脑梗死大鼠瘫痪肢体运动功能恢复,能诱导脑梗死大鼠脑组织MAP-2、存活素的表达,双侧电刺激的效果优于单侧电刺激。

低氧诱导因子-1α、存活素与脑缺血耐受

预先给动物轻微、短暂而不至于引起神经元死亡的脑缺血刺激，可激发机体产生内源性保护机制，提高脑组织对后续较严重缺血损害的耐受能力，减轻脑组织损害，此现象为脑缺血耐受。涉及凋亡、热休克蛋白（ HSP）、兴奋性氨基酸、腺苷、炎症和氧自由基，以及信号传导通路等的变化。对缺血耐受进行研究，有助于阐明机体对缺血性损害的内源性保护机制。低氧诱导因子-1α（ HIF-1α）在缺氧状态下可以激活下游目的基因表达相关蛋白，促进机体产生一系列低氧应答反应[1]。存活素是凋亡抑制蛋白（ IAP）家族的重要成员，有抑制细胞凋亡、促进缺血区新生血管形成的重要作用。现就HIF-1α和survivin在脑缺血耐受中的作用综述如下。

斑蝥酸钠维生素B_6对人成骨肉瘤细胞凋亡及存活素表达的影响

目的研究斑蝥酸钠维生素B_6诱导MG-63细胞凋亡的作用机制。方法应用不同浓度的斑蝥酸钠维生素B_6作用于MG-63细胞,用MTT比色法检测药物对细胞的增殖抑制作用;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测存活素信使核糖核酸的表达。结果斑蝥酸钠维生素B_6在抑制MG-63细胞增殖方面有显著作用,其作用具有时间和剂量依赖性,抑制率可高达(68.56±5.21)%。RT-PCR显示可下调survivin基因表达。结论斑蝥酸钠维生素B_6抑制MG-63细胞增殖效果明显,其机制可能与下调survivin基因的表达有关。

OX40信号上调Survivin表达对CD4^+T淋巴细胞增殖存活的影响

目的 探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 + T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法 分离培养小鼠脾脏CD4 + T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点,加入OX4 0抗体及转染Survivin负显性突变体基因后,CD4 + T细胞中Survivin蛋白表达差异。流式细胞仪检测AnnexinV染色后细胞凋亡数量。〔3H〕TdR掺入法测细胞增殖。结果 CD4 + T细胞活化后2～8d ,OX4 0抗体刺激可明显增强Survivin表达,并减少2 5 %细胞凋亡;Survivin突变体降低Survivin蛋白表达后使凋亡增加2 2 %。结论 OX4 0信号能够通过上调Survivin表达来抑制CD4 + T细胞凋亡,从而维持细胞存活和增殖。