两种存活蛋白变异剪接体在HeLa细胞中的表达定位及相互作用

存活蛋白(survivin)是重要的肿瘤相关抗原基因,在肿瘤的发生发展中起着重要的作用.除了标准的剪接形式外,它至少还编码2种变异剪接产物—存活蛋白-2B和存活蛋白-ΔEx3,这2个变异剪接体所编码的蛋白具有不同的生物学功能.为研究这2个变异剪接体在肿瘤细胞中的相互作用情况,本实验利用增强型青色荧光蛋白(enhanced cyan fluorescent protein,ECFP)和增强型黄色荧光蛋白(enhanced yellowfluorescent protein,EYFP)分别标记存活蛋白-2B和存活蛋白-ΔEx3.首先通过激光共聚焦扫描显微镜观察它们的细胞定位;同时利用荧光共振能量转移(fluorescence resonanceenergytransfer,FRET)技术研究两者在细胞内的相互作用情况.研究结果表明,存活蛋白-2B主要分布在细胞质中,而存活蛋白-ΔEx3则主要分布在细胞核内,少量分布在细胞质中;FRET分析结果显示,两者仅在细胞质中存在着很弱的相互作用,表明两者很可能是通过某种间接的方式发挥功能上的相互调节作用.本研究为进一步探讨存活蛋白变异剪接体的生物学功能及相互作用机制奠定了基础.

青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡与抑制存活蛋白表达有关

目的 :探讨青蒿琥酯 (artesunate ,Art)诱导肿瘤细胞凋亡与存活蛋白 (survivinprotein)表达的关系。方法 :采用细胞荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法和测定细胞浆Caspase 3的活性等手段检测肿瘤细胞暴露于不同浓度的Art时 ,对肿瘤细胞凋亡的诱导作用 ;用RT PCR、WesternBlotting法 ,检测不同浓度的Art作用于肿瘤细胞时 ,对survivinmRNA和survivin蛋白表达的影响。结果 :HL6 0细胞暴露于Art时 ,呈现典型细胞凋亡特征 ,如 :胞核固缩、形成凋亡小体 ;凋亡细胞的比例呈浓度依赖性增高 ;琼脂糖电泳出现明显的“梯状”条带 ;细胞浆Caspase 3的活性呈浓度依赖性增高等。RT PCR检测表明 ,A5 49细胞暴露于Art 10和 5 0g·L-172h后 ,survivinmRNA的表达呈浓度依赖性降低 ,对照组、10和 5 0mg·L-1处理组的survivin条带和内标GAPDH条带灰度的比值分别为 1.74 5、0 .390和0 .0 2 3;WesternBlotting法也检测到Art抑制Survivin蛋白的表达。结论 :Art诱导肿瘤细胞发生凋亡 ,激活Caspase 3途径 。

存活蛋白和NF-κB在外周T细胞性淋巴瘤中的表达和意义

本研究旨在探讨存活蛋白和NF-κB在外周T细胞性淋巴瘤中的表达及意义。应用免疫组织化学法检测26例外周T细胞性淋巴瘤组织中存活蛋白和NF-κB的表达,30例良性淋巴组织反应增生被选作对照组。结果发现,外周T细胞性淋巴瘤患者中有21例存活蛋白表达阳性,阳性率为80.8%;17例NF-κB表达阳性,阳性率为65.4%。与对照组相比,具有显著性差异(p<0.01)。实验组中,存活蛋白阳性率与NF-κB阳性率呈正相关。结论:存活蛋白和NF-κB在外周T细胞性淋巴瘤组织中广泛表达,对肿瘤细胞的促增殖和抑凋亡发挥着重要的作用。

105例鼻咽癌组织VEGF和存活蛋白表达的临床意义

目的联合检测鼻咽癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和存活蛋白表达的相关性及与预后的关系。方法应用免疫组织化学法检测105例患者鼻咽癌组织放疗前VEGF和存活蛋白的表达情况,随访5～7年,所有资料经SPSS13.0软件统计包处理,进行χ2检验、spearman相关分析、生存分析。结果 (1)105例鼻咽癌组织中VEGF和存活蛋白阳性表达率分别为76%和58%,显著高于正常鼻咽组织中阳性表达。(2)VEGF和存活蛋白同时表达与鼻咽癌患者的年龄、T分期、TNM分期、颅底侵犯有明显相关性(P<0.05);VEGF和存活蛋白的表达呈明显正相关性(P<0.05)。(3)VEGF和存活蛋白同时阴性表达的患者较二者同时高表达的患者有较高的5年生存率(P<0.05)。结论 VEGF和存活蛋白在鼻咽癌组织中高表达,二者之间有密切相关性,且均与患者的生存率呈负相关。

食管癌组织中存活蛋白的异常表达

目的通过比较食管癌组织和癌旁组织中存活蛋白的表达情况,探讨凋亡抑制因子存活蛋白与食管癌之间的关系。方法 T-A克隆制备存活蛋白定量PCR标准品pTA/存活蛋白;采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和免疫组织化学法检测33例经病理证实的食管癌组织(实验组)及其相应的癌旁组织(对照组)中存活蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,并分析存活蛋白表达与食管癌临床病理特征间的关系。结果 FQ-PCR结果显示,实验组中存活蛋白的阳性表达率为81.82%(27/33),对照组中阳性表达率为39.40(14/33),两组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组织化学结果在实验组和对照组中的阳性率与FQ-PCR结果一致,但对照组中的阳性细胞多为炎症细胞(非上皮细胞);存活蛋白的表达与患者年龄、性别及肿瘤分化程度无关(P>0.05),与肿瘤分期和淋巴结转移高度相关(P<0.05)。结论存活蛋白在食管癌组织中的阳性表达可能与肿瘤发生、浸润和淋巴结转移密切相关。

存活蛋白对胶质瘤细胞替莫唑胺敏感性的影响

目的探讨存活蛋白(survivin)对人脑胶质瘤细胞替莫唑胺(TMZ)敏感性的影响及其可能机制。方法构建过表达survivin的U87/sur胶质瘤细胞,以及抑制survivin表达的U87/sur si胶质瘤细胞,经100μmol/L TMZ处理后,采用MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记联合流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测活化caspase-3表达水平。结果经TMZ处理后,与亲代细胞相比,U87/sur si细胞的增殖活性明显下降,克隆形成率明显降低,凋亡率明显增加,而U87/sur细胞的增殖活性明显增强,克隆形成率明显增高,凋亡率明显下降。经TMZ处理后,与亲代细胞相比,U87/sur si细胞中活化的caspase-3蛋白水平升高,而U87/sur细胞中活化的caspase-3蛋白水平下降。结论抑制survivin可明显提高胶质瘤细胞对TMZ的敏感性,其机制可能与survivin促进细胞凋亡有关。

结直肠癌放疗前后存活蛋白的表达与放疗敏感性的相关性研究

目的探讨结直肠癌放疗前存活蛋白表达与放疗敏感性的关系。方法选择2009年1月至2012年6月第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心收治的未行手术治疗的结直肠癌患者104例作为研究对象,对所有患者实施放疗,并检测放疗前后存活蛋白表达水平,分析存活蛋白与临床病理特征及放疗疗效相关性。结果放疗前和放疗后,不同年龄、性别、组织学类型、Duck分期的结直肠癌患者存活蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P>0.05);肿瘤直径<5 cm的存活蛋白阳性率高于≥5 cm者,结肠部位的阳性率高于直肠部位者,浸润程度突破肌层的阳性率高于肌层以下者,差异均有统计学意义(P<0.05);随着放疗前存活蛋白阳性表达强度的增强,结直肠癌放疗效果越差(P<0.05)。结论存活蛋白可能在结直肠癌的发生、发展中起重要作用,可作为预测结直肠预后及结直肠癌是否需要辅助放疗或改进放疗方法的指标。

存活蛋白重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

本研究旨在构建含有人存活蛋白(survivin)基因的重组腺病毒载体,并探讨其在转染树突状细胞中的表达。以质粒pcDNA3.0-survivin为模板,通过PCR扩增获得survivin基因全长序列。PCR产物回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pShuttle-CMV-survivin。通过双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pShuttle-CMV-survivin转化E.coliBJ5183菌(含腺病毒骨架质粒)并进行同源重组,然后筛选阳性克隆,提取质粒,将此重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染293细胞。制备病毒上清并测定其滴度,将病毒上清转染树突状细胞,应用Westernblot方法分析survivin的表达。结果表明成功构建了含有人survivin基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.65×109pfu/ml。Westernblot鉴定显示,经重组腺病毒转染的DC可有效表达survivin。结论含survivin基因的重组腺病毒载体的构建成功,为下一步开展抗白血病免疫研究奠定实验基础。

寻常型银屑病皮损组织中存活蛋白(survivin)和STAT2的表达增强且二者呈正相关

目的探究凋亡抑制蛋白存活蛋白(survivin)与信号转导子和转录激活子2(STAT2)在寻常型银屑病(PV)患者进行期斑块状皮损组织中的表达及其相关性。方法临床上收集22例PV患者进行期斑块状皮损、非皮损组织以及18例正常皮肤组织。采用实时定量PCR检测皮肤组织中survivin和STAT2 m RNA水平,Western blot法检测皮肤组织中survivin和STAT2蛋白水平;采用免疫组织化学染色法检测皮肤组织中survivin和STAT2表达情况。采用Pearson相关分析确定survivin与STAT2m RNA表达的相关性。结果银屑病皮损组织中survivin、STAT2的m RNA和蛋白水平均高于银屑病非皮损组织和正常皮肤组织,且银屑病皮损组织中survivin、STAT2的m RNA表达呈正相关(r=0.5282)。结论 Survivin、STAT2在寻常型银屑病皮损组织表达增强且二者m RNA表达水平呈正相关。

食管鳞癌组织中存活蛋白表达的意义

目的 探讨凋亡抑制蛋白Survivin在食管鳞癌 (ESC)组织中的表达 ,及其与凋亡指数 (AI)、临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学染色检测 4 2例胃镜标本的ESC组织中Survivin表达水平 ,采用原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞的凋亡 ,并结合临床病理特征进行相关性分析。结果 Survivin表达于细胞核。 2 7例(6 4 .3% )食管鳞癌组织表达Survivin ,其表达越强 ,组织分化程度越低 ;Survivin的表达率与年龄、性别、原发部位、肿瘤大小等无相关性。Survivin阳性组AI与Survivin阴性组比较明显下降 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 Survivin在食管鳞癌组织中表达上调 ,通过抑制凋亡参与食管鳞癌的发生、发展过程。ESC组织Survivin的表达水平与ESC组织分化程度有密切关系。检测ESC组织Survivin表达 。

存活蛋白突变型p53和细胞周期蛋白D1在胃癌中的表达及临床意义

胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤,其发病机制是基因表达失调、细胞凋亡等多因素参与的过程。存活蛋白（survivin）是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins,IAP）家族的新成员,具有抑制细胞凋亡、调节细胞有丝分裂的作用。p53是细胞生长的负调控基因,通过调控细胞的生长和凋亡而发挥抑制癌细胞生长的作用,其突变或缺失形成的突变型p53在肿瘤中广泛存在,具有抑制细胞凋亡、

存活蛋白和基质金属蛋白酶-9在卵巢上皮癌中的表达及生物学意义

目的研究存活蛋白(survivin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在卵巢上皮癌组织中的表达及生物学意义,为临床早期诊断提供依据。方法选择本院2013年1月至2014年6月卵巢上皮癌患者56例(观察组),Ⅰ+Ⅱ级26例,Ⅲ+Ⅳ级30例;高、中和低分化分别20例、19例和17例。选择良性卵巢上皮肿瘤组织42份(对照组),正常卵巢组织24份(正常组)。应用免疫组织化学法观察各组织中survivin和MMP-9蛋白的表达水平。结果 survivin蛋白主要在细胞核中表达,MMP-2蛋白主要在细胞质和(或)间质中表达;观察组卵巢上皮癌组织survivin和MMP-9蛋白吸光度(A)值分别为2.16±0.81和2.20±0.63,均高于对照组(1.42±0.76和1.46±0.34),也高于正常组0.60±0.38和0.73±0.29,差异具有统计学意义(P<0.05)。且对照组survivin和MMP-9蛋白A值高于正常组(P<0.05)。Ⅲ+Ⅳ级卵巢上皮癌组织survivin和MMP-9蛋白A值分别为2.52±0.65和2.61±0.82,均高于Ⅰ+Ⅱ级(1.26±0.33和1.34±0.56)(P<0.05)。低分化卵巢上皮癌组织survivin和MMP-9蛋白A值分别为2.70±0.62和2.80±0.71,均高于中分化组(1.59±0.57和1.72±0.54),也高于高分化组(1.04±0.28和1.15±0.32),差异具有统计学意义(P<0.05)。中分化组survivin和MMP-9蛋白A值高于高分化组(P<0.05)。结论 survivin和MMP-9蛋白与卵巢上皮癌的发生、发展具有密切关系,随着分期的增加和分化程度的降低,survivin和MMP-9蛋白的表达逐渐增高。

存活蛋白反义寡核苷酸对XWLC-05细胞的影响

目的研究存活蛋白反义寡核苷酸对宣威肺腺癌细胞株(XWLC)-05增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法通过设计合成XWLC-05靶向存活蛋白反义寡核苷酸。将其分为对照组、单纯脂质体组(Lip组)、正义寡核苷酸转染组(Lip-SODN组)、反义寡核苷酸转染组(Lip-ASODN组)。转染48h后,蛋白质印迹法检测各细胞组中存活蛋白表达情况,流式细胞仪检测各细胞组凋亡率。结果转染后的XWLC-05存活蛋白表达明显下降。Lip-ASODN组细胞在12、24、48h凋亡率分别为3.01±0.26、7.89±2.63、17.24±3.92,明显高于其他组(P<0.05)。结论存活蛋白反义寡核苷酸转染能下调宣威肺腺癌细胞株XWLC-05存活蛋白表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。

存活蛋白与肝细胞癌临床关系的Meta分析

目的系统评价存活蛋白(survivin)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中表达水平及与其临床病理特征的关系。方法计算机检索Cochrane Libtary(2011年第1期),PubMed、CNKI等数据库,并辅以手工检索,按照纳入与排除标准选择病例对照试验,评价质量及提取资料后采用Stata 11.0软件对数据库进行系统评价。结果共纳入14项研究,其中855例HCC患者,394例正常对照。Meta分析结果显示:Survivin在HCC组及正常对照组的表达差异有统计学意义[比值比(odds ratio,OR)=12.01,95%可信区间(confidence interval,CI)=6.39～22.58,P<0.05]。临床病理结果显示:Survivin在HCC患者男性组与女性组(OR=1.55,95%CI=0.97～2.46),年龄<60岁组与≥60岁组(OR=0.88,95%CI=0.46～1.69),HCC肿瘤直径<5cm组与≥5cm组(OR=1.07,95%CI=0.97～2.46),HCC甲胎蛋白(AFP)<400μg/L组与≥400μg/L组(OR=1.10,95%CI=0.61～1.98)的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。Survivin在HCC低分化化组与中高分化组(OR=2.37,95%CI=1.07～5.26),临床分期Ⅲ+Ⅳ期与Ⅰ+Ⅱ期(OR=2.32,95%CI=1.41～3.83),局部或远处转移组与无局部或远处转移组(OR=2.47,95%CI=1.34～4.54)的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 Survivin在HCC中高表达,并且增加了其低分级、临床高分期及局部或远处转移的危险。

胃癌、癌旁和正常组织中存活蛋白的表达与细胞周期变化的相关性研究

目的:探讨胃癌、癌旁和正常组织中存活蛋白的表达情况及其与细胞周期变化的相关性。方法:采用免疫组化SP法检测胃癌、癌旁和正常组织中存活蛋白的表达,同时用流式细胞仪检测3种组织中细胞周期的变化,分析存活蛋白的表达与细胞周期变化的相关性。结果:存活蛋白在正常胃黏膜组织中无表达,胃癌癌旁组织中阳性表达率为16.67%,胃癌组织中阳性表达率为46.67%;与正常胃组织比较,胃癌癌旁组织和胃癌组织G0/G1期细胞均有明显下降,S期细胞均有明显升高,胃癌组织G2/M期细胞明显高于正常组织;存活蛋白的表达与G2/M期细胞数相关(rs=0.627)。结论:存活蛋白在胃癌组织中表达明显增加,并且与胃癌组织细胞周期变化相关,可通过调节细胞周期促进细胞增殖。

宫颈癌存活蛋白的表达及其与预后的关系

目的 研究宫颈癌组织及癌旁组织存活蛋白的表达及其与患者预后的关系。方法 收集2007年1月至2009年12月徐州市中心医院收治的70例手术切除的临床病理资料保存完整的宫颈癌石蜡切块,癌旁组织取自距癌组织0.5~1.0 cm,应用免疫组织化学S-P法检测宫颈癌组织及癌旁组织中存活蛋白的表达情况,分析其与宫颈癌临床病理特点及预后的关系。结果 存活蛋白在宫颈癌组织中的表达阳性率高于癌旁组织（65.7%vs 21.4%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。存活蛋白表达与患者性别、年龄、淋巴结转移、临床分期均无关（P〉0.05）,其阳性表达与肿瘤细胞分化程度、临床分期有关（P〈0.05）。生存曲线提示存活蛋白低表达组与高表达组比较具有生存优势,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 存活蛋白可能与宫颈癌的发生、发展有关,对判断宫颈癌的预后有一定的价值。

存活蛋白重组腺病毒载体感染的树突细胞对体外淋巴瘤细胞生长的影响

目的：探讨存活蛋白重组腺病毒载体感染的树突细胞对体外淋巴瘤细胞生长的影响。方法：采取随机单盲的方法，选取体质量相近的健康小鼠120只，运用马兜铃酸诱导小鼠患淋巴细胞瘤，抽取其淋巴瘤细胞进行体外细胞培养，每只小鼠的一份淋巴瘤细胞培养液给予常规抗肿瘤药物为对照组，另一份加入存活蛋白重组腺病毒载体感染的树突状细胞培养液为观察组，对比分析2组淋巴瘤细胞培养液中癌细胞死亡情况和抗瘤情况。结果：观察组60％～79％、80％-100％瘤细胞培养液中瘤细胞死亡率分别为40．83％和29．17％，对照组死亡率分别为14．17％和3．33％，2组差异有统计学意义（P〈0．01）。观察组细胞培养液抗瘤情况明显优于对照组，其总有效率95．83％显著高于对照组的51．67％（P〈0．01）。结论：存活蛋白重组腺病毒载体感染的树突状细胞在一定程度上能有效抑制淋巴瘤细胞的生长与繁殖，对抗淋巴细胞瘤和在淋巴细胞瘤的治疗中有一定的积极意义。

存活蛋白与细胞分裂

凋亡抑制蛋白家族的新成员存活蛋白(survivin)在肿瘤细胞中特异性地表达,它不仅具有抗凋亡的功能,而且它在细胞分裂中的重要作用也越来越受到人们关注,这一方面的研究取得了新的进展。深入研究存活蛋白在细胞分裂中的作用,将拓展人们对于这一分子新的认识。

存活蛋白反义寡核苷酸诱导食管癌细胞凋亡的研究

目的观察存活蛋白反义寡核苷酸转染对食管癌细胞凋亡、增殖、对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成特异性存活蛋白反义寡核苷酸(ASODN)。食管癌EC109细胞系分为6组:空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、160、2002、40nmol/L ASODN转染组。作用20h后收获各组细胞,Western blot法检测各组细胞生存素表达情况。TUNEL法检测各组细胞的凋亡情况。结果各ASODN转染组细胞存活蛋白表达有不同程度减弱,细胞变圆、折光增强、细胞碎片形成等,而各对照组细胞生长良好。各ASDON转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05),以240nmol/L转染组最明显(P<0.05)。结论封闭食管癌细胞存活蛋白基因,能下调存活蛋白的表达,从而诱导食管癌细胞凋亡,抑制食管癌的发展。

第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白和存活蛋白在结直肠癌中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨结直肠癌组织中第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)和存活蛋白(survivin)的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学染色的方法,检测50例结直肠癌组织和30份癌旁正常组织中PTEN和survivin和表达情况,并分析两者与不同临床病理特征之间的关系。结果 PTEN在结直肠癌组织中的表达(46%)明显低于癌旁正常组织(90%),而survivin在癌组织中的表达(76%)高于癌旁正常组织(27%)。随着肿瘤细胞分化程度的降低,PTEN阳性表达率降低,而survivin阳性表达率增高;TNM分期Ⅰ~Ⅱ期的患者PTEN阳性表达率高于Ⅲ~Ⅳ期,而survivin阳性表达率Ⅰ~Ⅱ期的患者低于Ⅲ~Ⅳ期。结论PTEN和survivin在结直肠癌组织中的表达与结直肠癌的分化程度、TNM分期相关。PTEN表达低下、survivin表达增高的结直肠癌患者预后差。