孤儿核受体Nur77/NR4A1调节巨噬细胞炎症反应研究进展

巨噬细胞作为抵御病原体入侵的第一道防线,在固有免疫和适应性免疫中均发挥不可或缺的作用。孤儿核受体是一类目前尚未发现天然配体的核受体,Nur77/NR4A1是其NR4A亚家族中的成员之一,广泛表达于各组织、器官,通过转录及非转录调节作用,参与细胞炎症反应、增殖、分化、凋亡、自噬、代谢等过程。近期研究发现,Nur77/NR4A1参与巨噬细胞多种功能的调控。对Nur77/NR4A1在巨噬细胞炎症反应中的作用及机制进行综述,有助于更好地了解巨噬细胞相关炎症性疾病的分子机制。

孤儿核受体Nur77参与AopE-/-小鼠颈动脉易损斑块的形成

目的:研究孤儿核受体Nur77在AopE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块形成中的作用。方法:AopE-/-小鼠左肾动脉和左颈总动脉联合部分结扎建立颈动脉易损斑块模型,采用HE染色观察斑块病理学改变,免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察斑块中Nur77蛋白的表达。同时,体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及其主要成分7-酮胆固醇(7-ketocholesterol,7-KC)或者游离胆固醇(FC),以及炎症介质(LPS、IL-1β)等条件刺激下,应用蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测Nur77蛋白表达变化。结果:AopE-/-小鼠颈动脉易损斑块局部有Nur77蛋白高表达,而oxLDL及其组成成分(7-KC和FC)以及某些炎症介质(如LPS、IL-1β等)均能在RAW264.7细胞中诱导Nur77蛋白表达上调。结论:孤儿核受体Nur77可能在动脉粥样硬化易损斑块发展进程中发挥着重要作用。

孤儿核受体Nur77在肝脏脂质代谢调控中的作用

核受体（nuclear receptor,NR）是一类配体依赖的转录因子,它在生物体内分布广泛、成员众多,是一个大家族。核受体一般可分为四大类：类固醇激素受体、甲状腺激素、维生素D受体及孤儿核受体（orphan nuclear receptors,ONR）[1]。通常,核受体都会含有氨基端（N端）的功能激活结构域、中间的DNA结合结构域以及羧基端（C端）的配体结合结构域,

孤儿核受体Nur77的多功能性及其相关药物靶点作用机制的研究进展

核受体Nur77(也称TR3)是立早基因NR4A1编码的产物,在细胞增殖、分化、凋亡、自噬、炎症以及代谢等生命活动过程中发挥重要的调控作用.Nur77不仅作为转录因子调控下游靶基因的转录和表达,还能作为不依赖于转录的调节因子,通过蛋白相互作用以及改变亚细胞定位的方式发挥作用.Nur77的配体至今尚未在生物体内发现,因此它被称为孤儿核受体.然而,近年的研究已发现数个靶向Nur77并调控其功能的小分子药物.本文重点综述Nur77的多功能性、其体外激动剂和拮抗剂的筛选及其靶向调控的研究进展.

孤儿核受体Nur77对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨孤儿核受体Nur77对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法体外原代培养大鼠血管平滑肌细胞,在ox-LDL及其相关成分7-酮胆固醇(7-KC)、9-HODE和13-HODE等条件刺激下,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、蛋白免疫印迹技术和免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测Nur77 mRNA和蛋白表达变化。用腺病毒感染血管平滑肌细胞过表达Nur77,通过细胞计数和Western Blotting观察Nur77对血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 ox-LDL可诱导血管平滑肌细胞中Nur77 mRNA表达上调,并且在1 h时达到高峰;同时ox-LDL及其相关成分(7-KC、9-HODE和13-HODE),均可诱导血管平滑肌细胞中Nur77的蛋白表达明显上调。在ox-LDL刺激下,Nur77过表达组(Ad-GFP-Nur77)平滑肌细胞的细胞密度[(2.70±0.14)×104]及细胞增殖相关蛋白cyclin D1的表达明显低于对照组(Ad-GFP)平滑肌细胞的细胞密度[(3.95±0.26)×104]及cyclin D1的表达(P<0.05)。结论孤儿核受体Nur77抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖。

孤儿核受体Nur77基因多态性与脓毒症易感性的关联研究

目的研究脓毒症患者与健康成人孤儿核受体Nur77基因多态性分布规律,并探讨其与脓毒症易感性的关系。方法选择207例脓毒症患者(脓毒症组)及210例健康体检者(对照组)作为研究对象。使用SNaPshot技术分析Nur77基因rs10876228、rs11169989、rs1283155、rs2242107位点基因型,比较两组Nur77基因位点多态性分布规律,探讨其与脓毒症易感性之间的关系。结果脓毒症组与对照组的Nur77基因rs10876228、rs11169989、rs1283155、rs2242107多态性位点的等位基因及基因型分布频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Nur77基因多态性或许与脓毒症易感性无明显相关。

孤儿核受体Nur77在卵巢癌组织中的表达及意义

卵巢癌在妇科恶性肿瘤中发病率居第三位,死亡率居首位,其发生发展机制一直是临床研究探索的重点。Nur77属于孤儿受体超家族,该家族有3个成员：Nur77、Nurr1和Nor-1。研究发现,Nur77对肿瘤细胞的生长是把双刃剑,既能促进肿瘤细胞增殖,又能导致其凋亡。而其在决定细胞死亡或生长方面表现出不同的作用主要依赖于其在线粒体或细胞核的不同定位。

孤儿核受体Nur77对哮喘小鼠气道重构的作用研究

目的研究调控孤儿核受体Nur77表达对哮喘小鼠气道重构的影响。方法(1)体外:将气道平滑肌细胞(ASMCs)分为2组:肿瘤坏死因子α(TNF-α)组和真菌聚酮(Csn-B)组。TNF-α组和Csn-B组分别用10 ng·mL^-1TNF-α、5μg·mL^-1Csn-B处理细胞1,3,6,12和24 h。用免疫印迹法检测细胞中Nur77蛋白水平。(2)体内:按照体重将雄性BALB/c小鼠随机分为3组:空白对照组、模型组和实验组,每组10只;以腹腔注射卵白蛋白致敏和雾化激发建立哮喘小鼠气道重构模型,实验组在每次激发前30 min腹腔注射10mg·kg^-1Csn-B。用免疫印迹法检测小鼠肺组织中Nur77蛋白的表达水平。苏木精伊红染色于光学显微镜下观察气道的病理学特征并以IPP软件分析各组小鼠气道壁厚度。结果(1)体外:TNF-α刺激前和刺激后3 h的Nur77蛋白表达量分别为1. 00±0. 00和2. 02±0. 33,刺激后与刺激前比较,差异有统计学意义(P <0. 01);Csn-B刺激前和刺激后6,12和24 h的Nur77蛋白表达量分别为1. 00±0. 00,3. 77±0. 93,4. 40±0. 46和5. 47±0. 99,Csn-B刺激后6,12和24 h与刺激前比较,差异均有统计学意义(P <0. 01,P <0. 001)。(2)体内:空白对照组、模型组和实验组小鼠肺组织中Nur77蛋白表达量分别为1. 00±0. 00,2. 96±0. 85和7. 29±0. 32;模型组与空白对照组相比或者实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 001)。空白对照组、模型组和实验组小鼠气道壁厚度分别为(11. 80±1. 40),(20. 23±2. 72)和(12. 01±1. 49)μm;模型组与空白对照组相比或者实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(均P <0. 001)。结论调控Nur77表达可以抑制ASMCs的激活,阻断哮喘小鼠气道重构的进程。

核孤儿受体TR3/nur77与一种新细胞凋亡机制

核孤儿受体TR3/nur77是一种立刻早期基因 (immediate earlygene)的产物 ,与固醇类激素受体结构相似 ,是核受体超家族的重要成员之一 ,可被多种生长因子或凋亡诱导剂诱导表达 ,具有复杂的生物学功能 ,涉及细胞增殖、分化发育和凋亡过程 .最近对其诱导凋亡机制的研究取得了重大进展 ,发现当细胞受到凋亡诱导剂刺激后 ,TR3基因表达升高 ,其产物从细胞核移位至线粒体膜 ,引起细胞色素c释放 ,从而导致细胞凋亡 .即TR3的转录激活功能和诱导凋亡功能是由其不同的亚细胞定位结合所决定的 ,其诱导凋亡过程与其对基因的反式激活功能无关 .核转录因子 p5 3也具有类似情况 .这种核转录因子由细胞核移位至细胞浆并发挥生物学功能的调控方式是一种新模式 。

孤儿核受体Nur77对缺/复氧损伤中心肌细胞自噬的调节

目的:研究孤儿核受体Nur77对缺/复氧损伤中心肌细胞自噬的调节作用。方法:差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞,经免疫荧光染色鉴定纯度。缺氧(1%O_2、5%CO_2和94%N_2)培养12 h后,常氧培养2 h构建心肌细胞缺/复氧损伤。实时定量PCR和western blot的方法检测Nur77的表达变化。通过siRNA转染抑制心肌细胞nur77表达,通过自噬标志蛋白表达改变作为细胞自噬水平的变化。结果:原代分离的心肌细胞纯度95%以上。缺氧12 h和缺/复氧(12 h/2 h)刺激后,心肌细胞中Nur77表达都明显升高(P<0.01)。与缺氧组相比,缺/复氧组细胞质中的水平明显增加(P<0.01),细胞核中Nur77水平无明显变化。抑制Nur77后,缺/复氧组自噬水平明显降低,缺氧组心肌细胞自噬水平无明显变化。结论:Nur77参与缺/复氧损伤中心肌细胞自噬水平的调节。

缺氧诱导内皮祖细胞中孤儿核受体基因Nur77的表达

孤儿核受体Nur77蛋白是早期反应转录因子之一,多种刺激因子如缺氧可诱导其迅速表达,参与调控细胞增殖、存活、分化等过程。内皮祖细胞移植可治疗缺血性疾病,缺氧是其移植后主要的早期刺激因素,缺氧诱导下内皮祖细胞的基因表达及其增殖、分化、凋亡的变化目前尚不清楚。本文研究了大鼠骨髓来源的内皮祖细胞缺氧诱导下Nur77基因的表达变化。通过RT-PCR和Western印迹方法检测Nur77mRNA、蛋白质的表达,发现正常氧浓度下内皮祖细胞中Nur77基因几乎不表达,而1%氧浓度诱导30min时Nur77基因即迅速表达,其mRNA表达量于缺氧1h达到峰值,随后下降,缺氧4h时表达量仍高于正常氧浓度下的表达量(P<0.05);其蛋白质的表达量持续增加并于4h达到峰值。本研究证实了大鼠骨髓来源的内皮祖细胞中存在Nur77基因,缺氧可诱导Nur77基因迅速表达,这种表达可能对内皮祖细胞生物学特性的改变产生影响。

核受体Nur77在结肠癌细胞奥利沙铂耐药中的作用及其机制研究

目的探索核受体Nur77在结肠癌细胞奥利沙铂耐药中的作用及其相关机制。方法构建空载、Nur77及其抑制物载体转染结肠癌细胞SW480,将正常结肠癌细胞SW480分为空白组与对照组、空载转染结肠癌细胞SW480设为空载组、Nur77载体转染结肠癌细胞SW480设为Nur77过表达组、Nur77抑制物载体转染结肠癌细胞SW480设为Nur77抑制组,取对数生长期各组结肠癌细胞SW480采用MTT法分别检测浓度0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、4.0μg/mL、8.0μg/mL的奥利沙铂作用下细胞增殖情况,Western blot检测各组细胞NF-κB-p65、NF-κB激酶复合体(IKK)、磷酸化IKK蛋白(p-IKK)表达水平,qRT-PCR法检测各组细胞NF-κB-p65、IKK、p-IKK mRNA表达水平。结果随着奥利沙铂浓度的增加,结肠癌细胞SW480存活率逐渐降低,且尤以Nur77抑制组存活率最低(P<0.05),Nur77过表达组生存率最高(P<0.05);转染Nur77后的结肠癌细胞内NF-κB-p65、IKK、p-IKK蛋白及其mRNA表达水平较其他各组细胞升高(P<0.05),而转染Nur77抑制物的结肠癌细胞内NF-κB-p65、IKK、p-IKK蛋白及其mRNA表达水平较其他各组细胞降低(P<0.05)。结论随着奥利沙铂浓度的增加,结肠癌细胞存活率逐渐降低,但转染Nur77的结肠癌细胞存活率却异常升高,Nur77的高表达可降低结肠癌细胞的药物敏感性;且转染Nur77的结肠癌细胞内NF-κB-p65、IKK、p-IKK表达水平也随之升高,通过增加IKK、p-IKK的表达水平,进而提高NF-κB信号通路活性可能是其降低结肠癌细胞药物敏感性的主要作用机制。

孤儿核受体Nur77在炎症反应中的作用研究进展

Nur77属于核受体中NR4A家族中的一个成员,Nur77在体内分布广泛,参与众多生理病理过程的调节。近几年来有较多关于Nur77在炎症过程中的调节机制陆续报道,发现Nur77在调节炎症反应的作用存在可能相反的双面性。本文查阅国内外最新相关研究报道,对Nur77在不同的研究背景下其抗炎作用和促炎作用的机制以及在不同生理病理背景下靶向药物治疗进行综述,旨在为进一步研究Nur77提供理论基础,并促进Nur77相关靶向药物的研究。

核受体Nur77基因缺失诱导再生肝细胞凋亡及肝损伤

目的研究肝大部分切除术(PHx)后核受体Nur77调控肝细胞进入增殖周期的分子机制。方法在Nur77基因敲除型(knockout,KO)和野生型对照组中构建PHx诱导的小鼠肝再生模型,用组织学染色、生化、定量PCR以及蛋白免疫印迹(western-blot,WB)等方法检测再生肝组织的形态学、血清学改变,以及相应基因的表达情况。结果PHx术后多个时间点KO组肝脏均出现组织坏死,KO组术后48 h、72 h的血清ALT均高于WT组(466.3±202.4 vs 72.0±58.8,486.2±156.3 vs 63.0±0.3,P<0.05)。凋亡细胞特异性染色示KO组术后3 h和48 h的凋亡细胞计数高于对照组(38.7±9.6 vs 2.8±0.2,87.3±19.4 vs 8.4±3.1,P<0.05)。PHx术后早期KO组肝脏的凋亡基因caspase-8与剪切caspase-3蛋白均上调。结论Nur77缺失诱导肝再生早期肝细胞凋亡。

核受体Nur77缺失促进肝再生早期肝细胞增殖

目的研究核受体Nur77对肝再生早期肝细胞进入增殖周期过程的影响。方法用肝大部分切除术诱导肝再生,对比Nur77基因敲除型(knockout,KO)与野生型(wild type,WT)小鼠术后肝脏体重比,用免疫组化和定量PCR检测再生肝组织中Ki67、细胞周期蛋白D1、Nur77和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的表达。结果PHx术后36小时和72小时KO组肝脏体重比值均高于WT组(2.69±0.22 VS.2.48±0.15,4.10±0.46 VS.3.47±0.12,P<0.05)。与WT组相比,KO组肝脏的细胞周期蛋白D1和Ki67抗原均被提前上调。PHx术后1小时Nur77基因的mRNA水平约为术前的23倍,其下游基因PAI-1在WT组肝脏1小时和3小时的mRNA水平均高于KO组(48.34±7.43 VS.19.21±8.59,P<0.05;67.41±8.94 VS.27.83±5.62;P<0.01)。结论 Nur77是肝再生早期应答基因,通过调控细胞周期蛋白D1以及PAI-1等基因表达影响肝再生进程。

动脉粥样硬化药物治疗的新靶点——核受体Nur77和类视黄醇X受体

核受体（nuclear receptor，NR）是一类在生物体内广泛分布、配体依赖的转录因子，其成员众多，构成了一个大家族，可分为4大类：类固醇激素受体、甲状腺激素和维生素D受体、孤儿核受体（orphan nuclear receptors，ONR）及可被代谢中间产物激活的受体。NR与相应的配体及其辅调节因子相互作用，调控基因的协调表达，从而在机体的生长发育、新陈代谢、细胞分化和凋亡、免疫反应及体内许多生理过程中发挥重要作用。

血小板源生长因子诱导核受体Nur77调节血管平滑肌细胞增殖

目的研究血小板源生长因子诱导血管平滑肌细胞中核受体Nur77表达机制及其与血管平滑肌细胞增殖的关系,探讨阿托伐他汀对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖和核受体Nur77表达的关系。方法分离培养鼠血管平滑肌细胞,分别与PD98059、阿托伐他汀、核受体Nur77 siRNA孵育后应用血小板源生长因子刺激,检测核受体Nur77、细胞外调节蛋白激酶表达;检测增殖细胞核抗原表达。结果血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞中核受体Nur77通过ERK-MAPK信号途径表达。阿托伐他汀减少血小板源生长因子诱导的核受体Nur77表达,抑制血管平滑肌细胞增殖。在核受体Nur77沉默后的血管平滑肌细胞中,血小板源生长因子诱导的细胞增殖减少。结论血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖受核受体Nur77调控,阿托伐他汀降低核受体Nur77表达,减少血管平滑肌细胞增殖,这可能是他汀类药物抗细胞增殖的新的途径。核受体Nur77可能是减少再狭窄的新的治疗靶点。

孤核受体Nur77在肿瘤治疗中的研究进展

孤核受体Nur77是核受体超家族成员之一,广泛参与细胞的生长、代谢、分化和衰老等生理过程。作为一种多功能转录因子,Nur77具有促进细胞增殖和诱导细胞凋亡的双重生物学功能,在肿瘤发生、发展过程中起着重要作用,已成为抗肿瘤药物开发的重要新靶点之一。本文概要介绍Nur77在肿瘤发生、发展中的生物学功能,以及靶向Nur77的抗肿瘤药物的研究进展。

孤儿核受体NR4A1在2型糖尿病患者外周血单个核细胞的表达及意义

目的探讨孤儿核受体NR4A1在2型糖尿病(T2DM)患者外周血单个核细胞(PBMCs)的表达及意义。方法选取就诊的34例健康受试者和30例初诊T2DM患者,进行体格检查,包括身高、体重、血压,计算体质指数(BMI);实验室检查:空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(Fins)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、超敏C反应蛋白(hs-CRP),计算HOMA-IR。采集外周血2~3 m L,收集血浆,用于检测游离脂肪酸(FFAs)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6),并采用密度梯度离心法获取PBMCs,real-time PCR检测NR4A1 mRNA在健康人群和初诊T2DM患者PBMCs中分布情况,并对NR4A1 mRNA相对表达水平和HOMA-IR、FFAs、TNF-α、IL-6进行相关性分析。结果两组人群在年龄、性别、身高、血压、血丙氨酸氨基转移酶、血尿素氮、血肌酐方面,差异无统计学意义(P>0.05);与健康受试者比较,初诊T2DM患者的PBMCs的NR4A1 mRNA相对表达水平增高,此外T2DM患者的BMI、FBG、Fins、HOMAIR、TG、TC、LDL-C、hs-CRP、FFAs、TNF-α和IL-6水平亦明显增高,血HDL-C水平则降低;T2DM患者的外周血白细胞计数及其分类计数与健康受试者差异无统计学意义(P>0.05);Pearson's相关分析显示,NR4A1 mRNA相对表达水平与HOMA-IR(r=0.761,P<0.01)、FFAs(r=0.560,P<0.01)、TNF-α(r=0.697,P<0.01)和IL-6(r=0.796,P<0.01)均呈正相关。同时,评价胰岛素抵抗程度的HOMA-IR也与FFAs(r=0.513,P<0.01)、TNF-α(r=0.728,P<0.01)和IL-6(r=0.590,P<0.01)呈正相关。此外,显著正相关也存在于FFAs和TNF-α(r=0.475,P<0.01)、IL-6(r=0.402,P<0.01)之间。结论 NR4A1在初诊T2DM患者PBMCs中表达增高,且与HOMA-IR、FFAs、TNF-α、和IL-6均呈正相关关系。

Nur77对葡萄糖代谢调控作用的研究进展

Nur77(Neuron-derived clone 77)是孤儿核受体家族成员之一,其表达和激活在多种生理及病理刺激下被迅速诱导,具有复杂的生物学功能。近年研究显示,Nur77以组织依赖的方式调控葡萄糖代谢,其过程可能在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发生发展中发挥作用。了解Nur77如何调控葡萄糖代谢及其如何影响ARDS的发生发展,将有望提供操纵Nur77调控葡萄糖代谢的机会并由此探寻ARDS药物治疗的新靶点。本文将围绕Nur77分子生物学功能及其表达、Nur77对葡萄糖代谢的调控及可能在ARDS中的作用的研究进展进行综述。