不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

研究了猪体外成熟卵母细胞的电激活、离子霉素激活和乙醇激活的方法。3种不同激活方法筛选试验表明,猪卵母细胞电激活最佳参数为电场强度130V/min,脉冲时程80μs的1次脉冲激活,即130V/mm-80μs-1次,其囊胚(发育)率为18.92%±8.48%(P>0.05);离子霉素激活的最佳条件为15μmol/L、激活时间40min,其囊胚率为21.27%±8.54%(P>0.05);乙醇激活最佳参数以9%乙醇激活处理3min,囊胚率为13.33%±7.64%。进一步对比试验表明,电激活和离子霉素激活处理的囊胚率和囊胚细胞数无显著差异(P>0.05),电激活的卵裂率明显高于乙醇激活(P<0.05),而囊胚率和细胞数差异不显著(P>0.05)。

卵丘细胞对辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

为了进一步探索辽宁绒山羊卵母细胞体外成熟的方法,本试验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用抽吸法收集直径大于2 mm卵泡的卵母细胞,研究卵丘细胞对卵母细胞体外成熟和孤雌发育的影响。试验1,将一部分COCs经机械吹打脱除卵丘细胞成为机械裸卵(DOs),然后以4种方式培养,即COCs单独培养、DOs与COCs共培养(DOs(COCs))、DOs与卵丘颗粒细胞共培养(DOs(CCs)),以及DOs单独培养。试验2,根据包裹卵母细胞的卵丘细胞的完整性分为3组,有3层卵丘细胞紧密包围的卵母细胞复合体COCs3,有1-3层卵丘细胞包围的卵母细胞COCs1-3,无卵丘细胞包围的裸露卵母细胞NOs,3组各自单独培养。结果表明:COCs组的成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率最高,分别为83.25%、41.75%和29.25%,卵丘细胞的存在有利于卵母细胞体外成熟和随后的发育,COCs3组成熟率、孤雌卵裂率和囊胚率分别为83.25%、42.50%和29.75%,显著高于COCs1-3和NOs组,卵丘细胞的完整性也影响着卵母细胞的体外发育,自然裸卵已失去体外发育能力。

化学激活对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

探索了离子霉素结合细胞松驰素B(cytochalasinB,CB)、放线菌酮(cycloheximide,CHX)以及6-二甲基嘌呤(6-dimethylaminopurine,6-DMAP)等化学物质,对猪卵母细胞激活后发育的影响。试验1,体外成熟卵母细胞分别用15、20、25、30μmol·L-1的离子霉素处理40min或电激活(1.3kV·cm-1,80μs,1次脉冲),结果表明,20μmol·L-1组的激活率(69.93±5.80)%显著高于15μmol·L-1组(P<0.05),但与其它各组差异不显著(P>0.05)。试验2,卵母细胞采用20μmol·L-1离子霉素分别激活10、20、30、40、50min,再用2mmol·L-16-DMAP处理6h,其中,40min组的卵裂率、囊胚率[(72.40±13.02)%、(25.37±11.43)%]较高,但与其它各组差异不显著(P>0.05)。试验3,卵母细胞经离子霉素(20μmol·L-1、40min)激活后,分别用7.5μg·ml-1CB、10μg·ml-1CHX、2mmol·L-16-DMAP、7.5μg·ml-1CB+10μg·ml-1CHX和7.5μg·ml-1CB+2mmol·L-16-DMAP处理6h,2mmol·L-16-DMAP组的激活率、卵裂率和囊胚率[(86.05±4.29)%、(61.77±8.10)%和(21.62±3.31)%]显著高于7.5μg·ml-1CB组(P<0.05)与另外几组差异不显著(P>0.05)。试验4,卵母细胞由离子霉素(20μmol·L-1、40min)激活后,用2mmol·L-16-DMAP分别处理3.5、5.5、7.5h,5.5h组的卵裂率和囊胚率[(66.

卵母细胞激活及孤雌发育研究进展

综述了卵母细胞孤雌激活的机制、研究方法、孤雌胚发育及影响因素的研究进展,指出孤雌发育在人类及动物繁殖技术研究领域的意义。

体外成熟培养20～22h牛卵母细胞激活及孤雌发育的研究

本研究将体外成熟培养 2 0～ 2 2h的牛卵母细胞 ,用Ca2 + 上升因子单一激活或组合Ca2 + 上升因子和蛋白质抑制因子激活 ,其结果单一激活的卵子激活率在 19.2 %～ 2 8.0 % ,复合激活的卵子激活率在 84 .2 %～ 86 .8%。单一激活组的卵子激活率显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,复合激活组的卵子激活率显著高于单一激活组 (P <0 .0 1) ,而单一激活组之间和复合激活组之间无显著差异 (P >0 .0 5 )。复合激活组的卵裂率及孤雌发育都显著高于对照组。

牛卵丘细胞对卵母细胞体外成熟与孤雌发育的影响

试验以牛卵泡内卵丘-卵母细胞复合体(COCs)为材料,探讨了牛卵丘细胞包裹程度对卵母细胞体外成熟(IVM)和孤雌胚胎(PAEs)发育的影响。试验1,将COCs随机分为2组,在开展IVM前,将其中一组COCs的卵丘细胞机械吹打去除成为机械裸卵(DOs),研究卵丘细胞层存在与否对卵母细胞体外核成熟(排出第一极体)和孤雌激活后发育能力的影响;试验2,根据COCs卵丘细胞包裹层数将COCs分为3组,即卵丘细胞层少(1～4层)的COCs为A组、卵丘细胞层多(5层以上)的COCs为B组及包裹5层以上卵丘细胞且附带卵泡壁颗粒细胞层(FSP)的COCs为C组,研究卵丘细胞层包裹程度对卵母细胞的体外核成熟和孤雌激活后胚胎发育能力的影响。结果表明:卵丘细胞的存在更有利于卵母细胞体外成熟和孤雌胚胎发育;COCs中卵丘细胞包裹层数对卵母细胞体外核成熟率没有显著影响,但包裹卵丘细胞层数多且附带FSP的卵母细胞,其PAEs的囊胚率显著高于包裹卵丘细胞少的卵母细胞PAEs。

不同因素对小鼠卵母细胞电激活及孤雌发育的影响

研究了卵龄、电脉冲参数、氯化锶、亚胺环己酮(CHX)对小鼠卵母细胞电激活及孤雌发育效果的影响。结果表明,卵龄为17h的小鼠卵母细胞在场强1.0kV/cm,脉冲宽度30μs,2次电脉冲,激活液中含Ca2+、Mg2+和Sr2+的条件下激活后,再于含CHX的培养液中培养,可较好地激活卵母细胞,提高体外孤雌胚的发育率,激活率及桑囊胚率分别可达83.3%和57.5%。

不同活化方法对小鼠卵母细胞孤雌发育的影响(简报)

随着动物克隆技术的不断发展,核移植胚胎的活化成为一个很重要的研究领域,活化的效率直接影响到克隆的成功率。小鼠体细胞克隆研究大多采用卵胞质直接注射供体细胞核的方法构建重构胚,再经SrCl_2活化处理进行体外发育。也有经电融合,SrCl_2活化产仔的报道。已有研究表明单独SrCl_2处理或电刺激均能很好地活化小鼠卵母细胞,那么在小鼠核移植过程中采用的电融合条件是否能激活卵母细胞。

不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响

通过系统探讨不同孤雌激活方法对猪卵母细胞体外激活后发育效果的影响,比较了乙醇（Ethanol,EH）、离子霉素（Ionomycin,Ion：5μmol/L）、氯化锶（Strontium chloride hexahydrate,Sr^2＋：10 mmol/L）、6-二甲氨基嘌呤（6-dimethylaminopurine,6-DMAP：2 mmol/L）和放线菌酮（cycloheximide,CHX：10 mg/L）对猪卵母细胞激活发育的效果。结果表明：（1）9%EH激活处理10 min效果好于15 min;（2）使用9%EH激活处理10 min,再结合CHX、6-DMAP、Sr^2＋、CHX＋Sr^2＋、Sr^2＋＋6-DMAP、CHX＋6-DMAP或CHX＋6-DMAP＋Sr^2＋组处理3～4 h,以EH＋6-DMAP组效果最好,分裂率及囊胚率分别达到82.86%和22.86%;（3）在使用化学激活（Ion＋6-DMAP组和9%乙醇10 min＋6-DMAP组）和电激活（50 V/mm,50μs,2t）的方法中,Ion法激活猪卵母细胞效果较好,囊胚率达到37.50%;（4）卵母细胞包被的卵丘细胞层数不同对卵母细胞成熟激活有显著的影响,卵丘细胞层数4～6层和多于6层的卵丘-卵母细胞复合体孤雌激活的分裂率和囊胚率分别为（68.99%,32.56%）和（75.36%,37.68%）,2组之间差异不显著（P〉0.05）;但其显著高于其他组（P〈0.05）,这2组细胞在猪孤雌激活发育研究中是最佳的实验研究材料。

小鼠卵激活过程中胞质游离Ca^(2+)的变化及孤雌发育研究

乙醇和电刺激均可使小鼠MⅡ期卵母细胞激活并在体外孤雌发育至囊胚。小鼠卵对乙醇十分敏感。用7%—8%乙醇处理5min后95%以上的卵母细胞(卵龄为HCG注射后18—19h)内形成原核。3—4次电刺激后卵的激活率为71.58%;仅刺激1次卵的激活率为63.63%。乙醇刺激可诱导卵内游离Ca^(2+)浓度出现多次升高;单一电刺激仅能诱导卵内游离Ca^(2+)浓度出现1次升高;多次电刺激可诱导卵内游离Ca^(2+)浓度多次升高,而且电刺激次数与Ca^(2+)浓度升高成一一对应关系。对于电刺激,介质中足够量的Ca^(2+)对卵激活至关重要。在无Ca^(2+)的介质中,电刺激很难使卵激活。正常受精刺激诱导卵内游离Ca^(2+)浓度出现多次有规律的升高。实验结果表明,卵母细胞激活过程中胞质游离Ca^(2+)浓度重复多次升高可促使卵母细胞恢复成熟分裂。

不同化学激活方法和电激活参数对猪体外成熟卵母细胞早期孤雌发育的影响

利用屠宰场猪卵巢卵母细胞,在体外成熟培养44～48h后,对核成熟卵母细胞进行激活。试验1为不同化学激活方法：10%乙醇＋10mg/L放线菌酮组、2.5mmol/L氯化锶＋10mg/L放线菌酮组、5μmol/L离子霉素＋2.5mmol/L6-二甲氨基嘌呤（6-DMAP）组、200μmol/L硫柳汞＋8mmol/L二硫苏糖醇组和对照组（不用任何激活剂）。试验2为用不同电场强度和脉冲时程进行电激活之后放入胚胎培养液中进行体外培养7d。结果显示,（1）4种不同化学激活方法处理卵子的1原核形成率、2原核形成率和原核形成率都显著比对照组高（P〈0.05）,其中离子霉素＋6-DMAP组的2原核形成率和总原核形成率最高,分别为（23.1±3.5）%和（65.2±3.5）%,显著高于其他处理组（P〈0.05）;（2）4种不同化学激活方法处理组的囊胚率都比对照组高（P〈0.01）,其中离子霉素＋6-DMAP组的卵裂率及囊胚率最高,分别为（46.6±18.5）%和（5.6±4.2）%;（3）本试验所用的4种不同化学激活方法对猪4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱没有显著影响;（4）电场强度为1.7kV/cm、脉冲时程为50、70μs时猪体外成熟卵母细胞激活效果最好,卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数分别为：（77.4±9.7）%、（12.4±3.7）%、（17.6±5.9）%和（75.1±10.6）%、（12.3±2.6）%、（19.1±8.1）。以上结果说明：本试验所用的4种化学激活方法均能有效激活猪体外成熟卵母细胞,其中离子霉素＋6-DMAP的激活效果最理想;在本实验室条件下,采用1.7kV/cm的电场强度、50～70μs的脉冲时程均能有效地激活猪体外成熟卵母细胞;本试验所用的4种不同化学激活方法对猪4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱没有显著影响。

6-DMAP对小鼠卵母细胞减数分裂启动及孤雌发育作用

小鼠卵泡卵母细胞体外培养过程中加入2 mmol/L 6-DMAP可抑制卵母细胞自发的染色质浓缩和生发泡破裂(GVBD)。源自超排的MⅡ期卵母细胞则能为6-DMAP所激活。hCG注射后18—19h的卵母细胞置于2 mmol/L6-DMAP的CZB溶液中培养0.5 h、1h、2h、3h,卵母细胞的激活率分别为26.1%、75.2%、75.8%、77.3%、;卵裂率分别为88.2%、73.2%、67.0%、58.4%。与乙醇激活法相比,6-DMAP处理引起了不同的孤雌激活类型。

哺乳动物卵的激活与孤雌发育

哺乳动物卵的激活与孤雌发育范必勤，邓满齐（江苏省农业科学院，南京，２１００１４）自然界孤雌生殖是一种繁殖方式，在无脊椎动物较为普遍，脊椎动物中除哺乳类外均有孤雌生殖现象［１］。孤雌生殖（Ｐａｒｔｈｅｎｏｓｅｎｅｓｉｓ）一词最早由Ｏｗｅｎ（１８４９）提...

激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响

系统探讨了几种激活方法对水牛卵母细胞孤雌发育的影响。体外成熟 (IVM) 2 6 h的水牛卵母细胞经 7%乙醇(EH)、钙离子载体 (A2 3187)或离子霉素 (Ion)激活处理 5 min后 ,在 2 m mol/ L 6 -甲二氨基嘌呤 (6 - DMAP)中培养 3～4 h,然后再继续培养 6～ 11d,观察其胚胎发育情况。结果发现 ,5μmol/ L Ion激活处理的水牛卵母细胞分裂率显著高于 EH处理的卵母细胞 (6 3.0 % vs5 4 .2 % ,P<0 .0 5 ) ,其原核形成率也显著高于 EH处理的卵母细胞。激活处理前 ,无Ca2 + 培养液孵育时间的长短 ,对水牛卵母细胞孤雌发育无显著影响 (P>0 .0 5 )。如用 A2 3187激活处理水牛卵母细胞 ,其激活分裂率则随着浓度的升高而提高。从而表明 ,5 μmol/ L

不同化学激活方法和电激活参数对猪体外成熟卵母细胞早期孤雌发育的影响

本研究探讨了不同化学激活方法和不同电激活参数对猪体外成熟卵母细胞早期孤雌发育的影响。利用屠宰场猪卵巢卵母细胞，在体外成熟培养44～48h后，将核成熟卯母细胞分别用：（1）不同化学激活方法[①10％乙醇＋10μg／mL放线菌酮；②2．5mmol／L氯化锶＋10μg／mL放线菌酮；③5μmol／L离子霉素＋2．5mmol／L 6-二甲氨基嘌呤（6-DMAP）；④200μmol／L硫柳汞＋8mmol／L二硫苏糖醇进行激活处理；⑤对照组——不用任何激活剂（试验1）]；（2）用不同电场强度和脉冲时程进行电激活（试验2），之后放入胚胎培养液中进行体外培养7d。研究结果显示：（1）4种不同化学激活方法处理卵子的1原核形成率、2原核形成率和原核形成率都显著比对照组的高（P〈0．05），其中离子霉素＋6-DMAP组的2原核形成率和总原核形成率最高，分别为（23．1±3．5）％和（65．2±3．5）％，显著比其他处理组的都高（P〈0．05）；（2）4种不同化学激活方法处理组的囊胚率都比对照组的高（P〈0．01），其中离子霉素＋6-DMAP组的卯裂率及囊胚率最高，分别为（46．6±18．5）9／5和（5．6±4．2）％；（3）本研究所用的4种不同化学激活方法对猪4-细胞孤雌胚SDS—PAGE电泳的蛋白质表达图谱没有显著影响；（4）电场强度为1．7kV／cm、脉冲时程为50和70μs时猪体外成熟卯母细胞激活效果最好，卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数分别为：（77．4±9．7）％，（12．4±3．7）％，17．6±5．9和（75．1±10．6）％，（12．3±2．6）％，19．1±8．1。以上结果说明：（1）本研究所用的4种化学激活方法均能有效激活猪体外成熟卵母细胞，其中离子霉素＋6-DMAP的激活效果最理想；（2）在本实验室条件下，采用1．7kV／cm的电场强度、50～70μs的脉冲时程均能有效的激活猪体外成熟卵母细胞；（3）本研究所用的4种不同化学激活方法对猪4-细胞孤雌胚SDS—PAGE电泳的蛋白质表达图谱没有显著影响。

电激活参数和培养基对猪卵母细胞孤雌发育的影响

为优化电激活和胚胎培养的相关技术体系,研究电激活参数和培养液对猪卵母细胞孤雌胚胎发育的影响。结果表明:在脉冲电压为150 V(以每1 mm电激槽宽计,下同)、脉冲持续时间为100μs、脉冲1次的电激活条件下,猪卵母细胞孤雌激活的效果较好;在脉冲持续时间和脉冲次数恒定的条件下,脉冲电压150 V组的囊胚率显著高于100 V组和125 V组(P<0.05),达46.3%;在脉冲电压和脉冲次数恒定的条件下,脉冲持续时间100μs的囊胚率显著高于75、125μs组(P<0.05),达50.5%;在脉冲电压和脉冲持续时间恒定的条件下,1次脉冲的卵裂率和囊胚率显著高于2次脉冲组(P<0.05),分别达82.7%、50.3%;PZM3和NCSU23培养液对猪孤雌激活胚胎发育的影响差异不显著(P>0.05),但PZM3培养液组的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数均略高于NCSU23组。

哺乳动物卵母细胞孤雌发育研究

哺乳动物卵母细胞孤雌发育研究刘红林（南京师范大学生物系南京２１００９７）范必勤（江苏农科院牧医所南京２１００１４）关键词哺乳动物卵母细胞孤雌发育孤雌发育（Ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｓｉｓ）被解释为没有雄性配子参与由雌性配子进行的发育［１］。孤雌生...

牛孤雌发育胚胎干扰素-τ基因的表达规律

采用地高辛(DIG)标记的DNA探针,对体外生产的不同日龄(3,5,6,7,9d)的牛孤雌发育胚胎细胞中干扰素(IFN)τ基因表达产物mRNA进行原位杂交,研究牛孤雌发育胚胎中IFNτ基因的表达情况。结果显示IFNτ基因从第6d的早期囊胚开始表达,第7d囊胚的IFNτ表达量明显提高。胚龄相同而发育阶段不同的胚胎IFNτ表达量有差异,第9d的孵化囊胚IFNτ表达量要高于未孵化囊胚的。

滇型杂交水稻雄性不育系子房孤雌发育的观察

作物杂种优势利用与固定研究中的一个重要方面之一,是利用孤雌生殖固定杂种优势。水稻雄性不育系的花粉败育,雌性器官正常,若不授粉,子房、胚珠均不发育,不能产生果实(种子),其颖壳将保持绿色。但是在不育系的研究中,发现一些未授粉的不育系穗子下垂,穗上的一些颖壳饱满,壳色黄绿,似结实一般,R C Chaudhary等称之为“假粒”。假粒的产生可能与水稻雄性不育系的孤雌发育有关。繁殖、制种工作中,如果对此现象缺乏了解,会对结实率作出过高的估计。在这方面研究的还很少。拟通过本试验对不育系的生殖发育特点有更多的了解,对今后水稻杂种优势利用与固定的工作有所帮助。

有无透明带牛卵母细胞孤雌发育研究

研究探讨了不同浓度的钙离子载体 (A2 3187)结合 6 二甲氨基嘌呤 (DMAP)或丁内酯I (BL -I)激活处理对有或无透明带牛卵母细胞孤雌发育的影响。结果表明 :使用A2 3187浓度从 0 .6 2 5～ 10 .0 0 0 μmol/L配合 2 .0mmol/LDMAP孤雌激活牛具透明带卵均能获得良好的卵裂及早期胚胎发育效果 ;对于去透明带卵来说 ,使用 0 .6 2 5 μmol/L浓度的A2 3187激活效果最佳。BL I的激活效果则明显差于DMAP ;当采用 0 .3%PVA取代激活液中的 5 %血清时 ,BL I的激活效率显著提高。