宁夏布鲁氏菌系统鉴定及16SrRNA基因序列分析

目的鉴定宁夏地区布鲁氏菌历史菌株、近期分离菌株,检测分析16SrRNA基因序列,构建遗传进化树,为宁夏地区布鲁氏菌鉴定、传染源追溯和分子流行病学监测体系提供基础数据。方法利用传统生物学方法和分子生物学方法鉴定具有代表性的20株布鲁氏菌和参考菌株的种和生物型,从GeneBank下载与布鲁氏菌有共同抗原细菌的16SrRNA基因序列,并采用PCR扩增产物直接测序法对布鲁氏菌的16SrRNA扩增、测序,用DNAMAN软件进行序列拼接比对,构建遗传进化树。结果经传统生物学方法和分子生物学方法鉴定20株布鲁氏菌分别为羊种13株,牛种2株,猪种4株,犬种1株。布鲁氏菌历史菌株、近期分离菌株和部分参考菌株16SrRNA经PCR扩增均得到1 412 bp条带,所有菌株和布鲁氏菌有共同抗原细菌的16SrRNA经一致性分析,达到98.54%,进化树显示,选取的具有代表性的分离菌株与参考菌株在同一末端的分支上,遗传距离十分接近。布鲁氏菌与人苍白杆菌在进化树的同一次分支上,遗传距离为0.019,而与霍乱弧菌、大肠杆菌O∶157、耶尔森菌属O∶9的遗传距离较远,遗传距离均大于0.02。结论从遗传进化角度对布鲁氏菌分离株与标准菌株的亲缘关系进行分析,所有种型遗传距离接近,提示16SrRNA为高度保守序列,不宜做遗传进化分析的靶基因,可作为布鲁氏菌属的一个鉴定方法,布鲁氏菌与人苍白杆菌有较近的亲缘关系。

宁夏布鲁氏菌Omp31基因序列特征分析

目的目的对宁夏布鲁氏菌Omp31基因序列进行分析,为菌株种型鉴定和试剂研究奠定基础。方法根据Genebank公布Omp31基因序列设计引物,采用PCR扩增、电泳检测、胶回收、纯化、送基因公司双向测序,用Contig Express软件对测序结果拼接,用DNAstar软件进行结果分析。结果经PCR扩增测序得到Omp31基因全长序列大小为723 bp,编码240个氨基酸,与Genebank上羊种布鲁氏菌Omp31基因同源性达99.9%,氨基酸序列的同源性100%。通过遗传分析,分离株与参考菌亲缘关系相近,与羊种布鲁氏菌处在同一分枝。结论宁夏布鲁氏菌Omp31序列与发布的参考序列之间的同源性很高,而且与羊种布鲁氏菌处在同一分支。