基于胶质细胞GR/CX3CR1双信号探讨柴金解郁安神片含药血清减轻体外抑郁模型大鼠ACC神经元突触损伤的机制

目的:基于胶质细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)/CX3C趋化因子受体1(CX3C chemokine receptor 1,CX3CR1)双信号探讨柴金解郁安神片(CJJY)含药血清对体外抑郁模型中大鼠前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)神经元突触损伤的保护机制。方法:原代培养SD大鼠ACC脑区星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元,并分别进行鉴定;采用200μmol/L皮质酮(corticosterone,CORT)联合1 mg/L脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立模拟抑郁环境的体外细胞模型,实验设正常组、模型组(CORT+LPS)、GR阻断剂(GR-)组(CORT+LPS+RU486)、GR激动剂(GR+)组(CORT+LPS+dexamethasone)、CX3CR1阻断剂(CX3-)组(CORT+LPS+AZD8797)、CX3CR1激动剂(CX3+)组(CORT+LPS+fractalkine)、CJJY组(CORT+LPS+CJJY含药血清)、CJJY联合GR激动剂(CJJY/GR+)组(CORT+LPS+CJJY含药血清+dexamethasone)组和CJJY联合CX3CR1激动剂(CJJY/CX3+)组(CORT+LPS+CJJY含药血清+fractalkine);高内涵细胞成像分析技术观察星形胶质细胞、小胶质细胞和ACC神经元形态学变化;ELISA法检测细胞上清液中促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)、CORT、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6和谷氨酸(glutamate,Glu)水平;免疫荧光染色检测星形胶质细胞中GR和囊泡谷氨酸转运体1(vesicular glutamate transporter 1,VGluT1)表达水平,以及小胶质细胞中CX3CR1和腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor,A2AR)表达水平;Nissl染色和β-tubulin染色观察神经元突触损伤情况。结果:CJJY含药血清能减轻体外抑郁模型中大鼠星形胶质细胞损伤,抑制小胶质细胞激活,同时抑制细胞上清液中ACTH、CRH、CORT、TNF-α、IL-1β、IL-6和Glu水平异常增高(P<0.05或P<0.01),有效调控GR、VGluT1、CX3CR1和A2AR表达异常(P<0.05或P<0.01),并减轻大鼠ACC神经元树突和树突棘损伤。结论:CJJY含药血清通过调控胶质细胞GR/CX3CR1双信号而减轻体外抑郁模型中大鼠ACC神经元突触损伤。

柴金解郁安神片调控CaMKII和Cofilin双信号通路改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑

目的探讨柴金解郁安神片调控钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)和Cofilin双信号通路,改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑的分子机制。方法皮质酮联合脂多糖建立抑郁症体外细胞模型,实验设正常组、模型组、GR阻断剂组、GR激动剂组、CX3CR1阻断剂组、CX3CR1激动剂组、柴金解郁安神片组、柴金解郁安神片联合GR激动剂组、柴金解郁安神片联合CX3CR1激动剂组,观察星形胶质细胞、小胶质细胞、前扣带皮层(anterior cingulate cortex,ACC)和海马神经元形态结构变化;检测ACC和海马谷氨酸能神经元激活及突触重塑情况;免疫荧光、Western blot分别检测海马谷氨酸能神经元内突触重塑相关谷氨酸受体2A(GRIN2A)、GRIN2B、CaMKII、MK2、Cofilin蛋白表达水平。结果柴金解郁安神片能明显改善胶质细胞、ACC和海马神经元损伤,并抑制ACC和海马谷氨酸能神经元异常激活,同时下调GRIN2A、GRIN2B、MK2蛋白,上调CaMKII、Cofilin蛋白,继而改善海马谷氨酸能神经元突触可塑性损伤和突触重塑。结论柴金解郁安神片能有效改善抑郁症海马谷氨酸能神经元突触重塑,其分子机制与调节突触重塑相关NR/CaMKII、MK2/Cofilin信号通路有关。

朱砂安神片质量标准研究

目的建立朱砂安神片的质量标准。方法参考《中华人民共和国卫生部药品标准:中药成方制剂》,对10批样品进行性状鉴别;对样品粉末进行显微鉴别;采用薄层色谱法对样品中的黄连药材进行定性鉴别;采用滴定法对硫化汞进行含量测定;以盐酸小檗碱为参照峰,建立10批样品的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,确定共有峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)评价其相似度;采用HPLC法测定样品中盐酸小檗碱的含量,色谱柱为Welch ultimate XB-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶1,V/V,每1 mL混合液中含十二烷基硫酸钠4 mg)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为345 nm,柱温为30℃,进样量为10µL。结果10批样品均为红棕色,气微香,味苦。样品粉末纤维束呈鲜黄色,壁稍厚,纹孔明显;不规则细小颗粒呈暗红棕色,有光泽,边缘黑色;纤维束周围薄壁细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维。薄层色谱特征斑点清晰,分离度较好,且阴性对照无干扰。样品中硫化汞平均含量为22.78%。共确定9个共有峰,且相似度均不低于0.898。盐酸小檗碱质量浓度在0.00859~0.859 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=1.000,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均回收率为99.96%,RSD为1.29(n=6)。结论所建立的方法稳定、结果准确、专属性与重复性较好,可用于朱砂安神片的质量控制。

梦醒安神片的药理研究

采用小鼠激怒打斗、“失望”行为及平衡运动，去水吗啡 攀爬行动、大鼠定型活动、苯丙胺引起小鼠自发活动增强及小鼠脑中多巴胺含量的变化等实 验 ，观察梦醒安神片的主要药效学作用，实验结果表明梦醒安神片明显减少小鼠激怒打斗次数 ，使小鼠“失望”不动时间延长，显著抑制动物的攀爬行动，使动物定型活动次数减少，明 显减少苯丙胺引起的亢进小鼠的自主活动次数，明 显减少小鼠脑中多巴胺的含量。表明梦醒安神片有明显安定作用，对多巴胺系统亢进功能有 明显抑制作用。

高效液相色谱法测定健脑安神片中淫羊藿苷的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)法测定健脑安神片中淫羊藿苷含量的方法.方法:Alltima C18色谱柱(5 μm,150mm×4.6 mm),乙腈-水(30:70)为流动相,检测波长270 nm.结果:淫羊藿苷在0.020～0.50μg范围内线性关系良好(r=0.999),平均回收率为98.84%,RSD=1.06%.结论:该方法简便,快捷,灵敏,准确,重现性好,可作为健脑安神片的质量控制标准.

高效液相色谱法测定萝藤安神片中钩藤碱的含量

目的:建立藤安神片中钩藤碱的HPLC测定方法。方法:Diamonsil ODS C18(200mm×4．6 mm,5μm)柱,甲醇-水(48:52)含10 mmol·L-1三乙胺溶液,用醋酸调pH=5．0为流动相,流速1．0 ml·min-1检测波长为254 nm。结果:钧藤碱的线性范围是0．20-0．99μg(r=0．999 8),平均回收率为97．9％,RSD=1．0％。结论:方法简单准确,可作为该制剂的质量控制。

HPLC色谱法测定枣仁安神片中五味子醇甲的含量

目的:建立用高效液相色谱法测定枣仁安神片中五味子醇甲的含量。方法:采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18(5μm,250mm×4.6mm),以甲醇-水(63∶37)为流动相;流速为1.0mL/min;检测波长为250nm。结果:五味子醇甲的线性范围为0.05984-0.53856μg,r=0.9996;本品的平均回收率为101.21%,RSD%为1.0%。结论:本法简便、灵敏、准确,可用于枣仁安神片中五味子醇甲的含量测定。

HPLC测定补脑安神片中的β-葡萄糖苷

目的建立测定补脑安神片中2，3，5，4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的方法。方法采用HPLC法，色谱柱为Kromasil C18（250mm×4．6mm，5μm）；以乙腈-水（25：75）为流动相，检测波长320nm，用峰面积外标法定量。结果平均回收率为100．6％，RSD=1．4％（n=9）；进样量0．0481～0．7699μg与峰面积的线性关系良好。结论所建方法简便、快速、准确，可作为测定补脑安神片含量的方法。

高效液相色谱法测定壮肾安神片中淫羊藿苷含量

目的建立测定壮肾安神片中淫羊藿苷含量的高效液相色谱法。方法采用Shimadzu C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以乙腈-水(30:70)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长270nm。结果淫羊藿苷进样量在8.56～136.96ng范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.60%,RSD=2.57%(n=6)。结论高效液相色谱法简便、灵敏、准确,可用于壮肾安神片的质量控制。

RP-HPLC法测定参茸安神片中人参皂苷Rg1的含量

目的：用RP-HPLC法检测参茸安神片中人参皂苷Rg1含量,为制定质量标准中含量测定方法及含量限度提供了依据。方法：以ODS为填充剂,乙腈-0.05%磷酸溶液（20∶80）为流动相,检测波长为203nm,流速1.0mL·min^-1。结果：人参皂苷Rg1进样量在1.024-12.800μg范围线性关系良好,r=0.9998;加样回收率为99.1%,RSD为1.38%。结论：本法能很好地对人参皂苷Rg1分离检测,准确可靠,重现性好。

参益安神片改善小鼠学习记忆的作用及其机制

目的探讨复方制剂参益安神片改善记忆作用的药效学及其作用机制。方法采用水迷宫试验、避暗实验、跳台实验观察空白对照组、阳性对照组、复方制剂参益安神片高(1.607 g/kg)、中(0.536 g/kg)、低(0.269 g/kg)剂量组对小鼠改善记忆的作用;采用荧光法对小鼠脑内5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)进行含量测定,初步研究复方制剂参益安神片改善小鼠记忆的作用机制。结果避暗试验中剂量组、高剂量组小鼠的潜伏期明显延长(P<0.05),错误次数、进入暗室的动物数也明显减少(P<0.05);水迷宫试验高剂量、中剂量组小鼠2 min内到终点的动物明显增加(P<0.05);跳台试验潜伏期有明显延长作用(P<0.05);脑5-HT、DA、NE含量与空白组比较显著增加。结论复方制剂参益安神片具有明显改善记忆的功能,其机制可能与5-HT、DA、NE的相互调节有关。

乌枣健脑安神片的定性定量研究

目的对乌枣健脑安神片进行定性定量分析,为其质量标准的制定提供方法和依据.方法采用TLC法对处方中的制何首乌、补骨脂、酸枣仁、五味子等4味药材进行定性鉴别,采用HPLC法测定乌枣健脑安神片的君药制何首乌中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量.结果在TLC鉴别中能检出制何首乌中的大黄素、大黄素甲醚,补骨脂中的补骨脂素、异补骨脂素,酸枣仁中的齐墩果酸以及五味子和五味子甲素,在HPLC测定中,进样量在0.0481～0.7669μg范围内有良好的线性关系,r=O.9999(n=8),平均回收率97.6%,RSD=1.4%(n=9).结论该方法简便、准确、专属性强,重现性、回收率好,可作为控制乌枣健脑安神片质量的方法.

梦醒安神片质量标准研究

梦醒安神片是由我院研制的中药三类新药，也是１９９６年申请的国家新药基金重点资助的项目之一。由黄连、大黄、胆南星、金礞石、石菖蒲、郁金、丹参、酸枣仁、缬草、香附等１０味药材组成的复方制剂，为了控制产品质量，对其进行了质量标准研究。制定了薄层鉴别方法和薄...

健脑安神片中10个成分的含量测定及其主成分分析和聚类分析

目的建立HPLC法同时测定健脑安神片中的10个成分的含量,并结合主成分分析与聚类分析评价其质量。方法采用HPLC法测定10种成分,对测定结果导入SPSS Statistics 26.0软件进行主成分分析和聚类分析。结果5-羟甲基糠醛、远志[口山]、毛蕊花糖苷、3,6’-二芥子酰基蔗糖、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、淫羊藿次苷I、宝藿苷I的浓度分别在2.94~220.50、1.27~90.55、1.96~147.00、1.57~117.60、1.47~110.25、1.61~120.54、1.08~80.85、1.76~132.30、0.88~66.15、0.98~73.50μg/mL范围内,线性关系良好(r>0.9990);10种成分的平均回收率均在97%~99%之间,其RSD均小于2%。15批样品聚为2类,前4个主成分累积贡献率达87.968%。结论该方法操作简便、稳定可靠、重复性好,可用于健脑安神片的质量控制。

不同澄清剂对复方安神片水提液精制效果的影响

目的:考察甲壳素和ZTC1+1-II型澄清剂法对复方安神片水提液的精制效果。方法:以固形物去除率、总皂苷保留率为考察指标,采用单因素考察法,优选最佳精制方法并作对比研究。结果:甲壳素澄清剂处理后的溶液固形物去除率54.57%,总皂苷保留率为81.21%,ZTC1+1-II型澄清剂处理后的溶液固形物去除率42.75%,总皂苷保留率为83.73%,两组总皂苷保留率无明显差异,但前者固形物去除率明显高于后者。结论:本实验选择甲壳素澄清法精制复方安神片水提液。

佐匹克隆联合七叶安神片治疗老年失眠42例

目的:观察佐匹克隆联合七叶安神片治疗老年失眠的临床效果。方法:选取老年失眠患者84例,年龄≥60岁,按照随机数字表法分为对照组和治疗组,每组42例。对照组给予佐匹克隆治疗,治疗组给予佐匹克隆联合七叶安神片治疗。结果:治疗组有效率为90.5%,对照组有效率为69.0%,治疗组优于对照组(P<0.05);治疗组不良反应发生率显著低于对照组(P<0.05);治疗组治疗后SDRS评分低于对照组(P<0.05)。结论:佐匹克隆联合七叶安神片治疗老年失眠疗效显著。

高效液相色谱法测定补脑安神片中二苯乙烯苷含量

目的 建立测定补脑安神片中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法 色谱柱为Lichrom C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-水（20∶80）,流速为1 m L/min,检测波长为320 nm。结果 2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷进样量在0.209 2~3.347 2μg范围内与峰面积积分值线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为98.89%,RSD=0.76%（n=6）。结论 该方法简便、准确,可用于补脑安神片中制何首乌的质量控制。

补脑安神片质量标准提升的研究

目的：对补脑安神片质量标准进行提升，以更好地控制药品质量。方法：增加当归、制何首乌、黄精的薄层鉴别方法；增加制何首乌中二苯乙烯苷的HPLC含量测定方法，所用色谱柱为DIONEX Acclaim 120 C18（4．6 mm ×250 mm，5μm），流动相为乙腈－水（18∶82），流量为1．0 mL· min－1，检测波长为320 nm；增加朱砂中HgS的含量测定方法。结果：薄层斑点清晰，阴性对照无干扰；二苯乙烯苷进样量在0．03～0．68μg范围内线性关系良好（ r＝0．9999），平均回收率为95．2％，其RSD为0．80％（n＝6）；朱砂的平均回收率为97．4％，其RSD为3．1％（n＝6）。结论：所建方法简便、准确，能更好地控制补脑安神片质量。