具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选(英文)

目的建立一种高通量筛选具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选方法。原理3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)是安莎类抗生素生物合成的前体。在通过氨基莽草酸途径生物合成AHBA的过程中,AHBA合酶是催化5-氨基-3-脱氢-5-脱氧莽草酸形成AHBA的一个特异性关键酶。AHBA合酶基因的存在可以作为放线菌菌株具有合成安莎类抗生素能力的一个必要而非充分的条件。AHBA合酶基因高度保守,通过PCR方法可以建立一种针对AHBA合酶基因存在与否的、具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株高通量筛选方法。方法根据已知AHBA合酶序列的相似性,设计了针对AHBA合酶基因中高度保守的一段755bp片段大小的PCR筛选寡核苷酸引物,用于从土壤中分离的未知放线菌高通量筛选。结论从1900株土壤分离的未知放线菌中筛选获得33株AHBA合酶基因阳性菌株,即具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株。

缬草内生菌和根际放线菌的分离及安莎类抗生素的筛选

【目的】分离缬草内生菌及根际放线菌,筛选其中含安莎霉素类抗生素生物合成基因的菌株,挖掘其活性次级代谢产物资源。【方法】从缬草根、茎、叶及根际土壤中分离内生菌和根际放线菌,检测其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、核桃溃疡病菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌的抑菌效果。设计2种简并引物,用PCR方法从抑菌效果较好的菌株中筛选含安莎霉素类抗生素基因(AHBA)的菌株。分析目标菌株的最佳发酵培养基和最适发酵时长,对发酵分离物进行HPLC和质谱分析,检测其可能的次级代谢产物。【结果】试验共分离到145株菌,其中内生菌27株,占总菌株数的18.6%,根际放线菌118株,占总菌株数的81.4%;33株对病原菌有较好的抑菌效果,占总菌株数的22.8%。筛选到1株含AHBA基因的菌株AJ21,初步鉴定其为链霉菌。菌株AJ21最佳发酵培养基为SPY培养基,最佳发酵时间为6d。菌株AJ21发酵液经分离纯化、HPLC检测和质谱分析,初步确定其含有的安莎霉素类抗生素为放线菌素D。【结论】药用植物缬草内部及根际蕴含丰富的放线菌资源,具有良好的生物学活性。

安莎类抗生素电喷雾多级质谱裂解规律的研究

目的研究苯安莎类抗生素(格尔德霉素、除莠霉素A)和萘安莎类抗生素(利福平、利福喷丁)的电喷雾多级质谱裂解规律。方法采用电喷雾离子化源(Electron Spray Ionization Source,ESI源)多级质谱,极性检出模式为正/负离子模式(+/-MS)。结果初步归纳总结苯安莎类抗生素和萘安莎类抗生素电喷雾多级质谱裂解规律。结论该质谱裂解规律可应用于安莎类抗生素的快速结构解析、定量分析和药代动力学研究。

内生链霉菌Streptomyces sp.LC18中安莎霉素类化合物的发现

以一株红树林植物内生链霉菌Streptomyces sp.LC18为研究对象,通过固体发酵培养分离安莎霉素类代谢产物.采用凝胶柱层析和硅胶柱层析等对化学成分进行分离纯化,通过核磁共振和高分辨质谱对化学结构进行鉴定,初步研究了化合物抗菌和细胞毒活性.从10L固体发酵提取物中分离得到3个安莎霉素类化合物,分别鉴定为herbimycin A(1),herbimycin C(2),hygrocin A derivative 6(3),其中化合物1和3对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和前列腺癌PC3细胞IC50值均小于5μmol/L.化合物1和3分别属于8酮苯安莎和9酮萘安莎,是从植物内生菌中分离得到2种类型的安莎霉素.

安莎社和它的北京分社社长那塔里

安莎通讯社是意大利“全国报联社”(Agenzia Nazionale Stampa Associata)的缩写。它是世界八大通讯社之一。

安莎尔多(ANSALDO)看好中国铁路

在1996年3月29日召开的’96国际现代化铁路装备展览会上,来自意大利的安莎尔多(ANSALDO)公司以当今世界先进的自动化信号系统,证明了他们在中国京九铁路建设中不愧为重要的角色。 图1为ETR500意大利高速铁路列车。 中国京九线的建设吸引了世界各国先进的力 量,在SIMENS、ABB等数家世界大公司的竞争中,安莎尔多获得了7个承包项目中的2项,其工程总值占总量的40％,成交额达1500万美元。第一项是为任丘附近6个车站和九江以北7个车站提供自动化信号系统,该系统具有相当的灵活性与实用价值,能够适应不同国家铁路的特殊规定。

海洋放线菌Streptomyces sp．LZ35中的安莎霉素类化合物

目的对海洋放线菌Streptomyces sp.LZ35固体发酵提取物的化学成分进行研究。方法采用Sephadex LH-20,硅胶等色谱柱及重结晶进行分离纯化,用波谱技术鉴定化合物的结构。结果从14 L固体发酵提取物中分离得到7个安莎霉素类化合物,分别鉴定为geldanamycin(1),17-O-demethylgeldanamycin(2),herbimycin B(3),reblastatin(4),17-O-demethylreblasta-tin(5),autolytimycin(6),hygrocin A derivative(7)。结论化合物1～7均为首次从该菌株中分离得到,且首次从一株链霉菌中分离到2种类型的安莎霉素。

Geldanamycin产生菌生物合成相关基因的克隆与分析

目的 从 geldanamycin产生菌吸水链霉菌 (S.hygroscopicus)中克隆生物合成基因 ,为阐明生物合成机制及改造其结构奠定基础。方法 以链霉菌 /大肠埃希氏菌穿梭 cosmids p KC5 0 5为载体构建了插入片段为 2 0～ 30 kb的 S.hygroscopicus总 DNA文库。以利福霉素中与 3-氨基 - 5 -羟基苯甲酸 (AHBA)合成相关基因为探针 ,经菌落杂交 ,Southern杂交筛选同源基因片段。测序结果与 Genbank进行同源性比较分析 ,并以attp- 噬菌体载体 KC5 15利用基因阻断实验对克隆的基因片段进行功能鉴定。结果 构建的基因文库含重组基因比率高、基因组覆盖率高 ,稳定性好。经同源基因探针杂交 ,从文库中筛选出 9个阳性 cosmids克隆p CGB2 0、p CGB2 6、p CGB2 8、p CGB2 9、p CGB36、p CGB45、p CGB49、p CGB6 3、p CGB75。测序分析表明 ,cosmidp CGB2 0中 Bam HI- Bam HI 8kb片段两端的不完整 ORF编码蛋白与竹桃霉素 (oleandomycin) PKS Module 5、Module 6 (一致性为 79% )和红霉内酯合成酶 ORF2 (一致性为 75 % )、ORF1(一致性为 73% )、ORF3(一致性为 70 % )高度同源 ;Bam HI- Bam HI3kb片段一端与编码类结核分枝杆菌的磷酸吡哆醛依赖的氨基转移酶家族中半胱氨酸脱硫酶的 DNA有同源性 ,该家族与 AHBA合成酶关系密切。

微生物来源抗肿瘤活性化合物SIPI-100-2的研究

目的:分离链霉菌SIPI100菌株生物合成的具有抗肿瘤活性的化合物。方法:优化发酵条件,进行大规模发酵;发酵液经离心、乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析等处理,从发酵液中分离出化合物SIPI1002,并测定化合物的图谱数据和生物学活性。结果:通过理化性质、质谱、紫外、红外和核磁共振等图谱数据的分析,确定化合物SIPI1002的化学结构;生物学研究发现其具有中等强度的抗肿瘤活性。结论:链霉菌SIPI100产生的活性化合物SIPI1002属于安莎类抗生素,与文献报道的17Odemethylgeldanamycin结构一致。

Sterptomyces rochei 4089的L基因阻断变株的构建及功能研究

运用同源重组技术破坏了一株格尔德霉素产生菌Sterptomyces rochei 4089的L基因,该基因编码氧化还原酶。以Sterptomyces rochei 4089基因组总DNA为模板,PCR扩增AHBA-KLM基因簇,采取Red/ET重组技术,构建L基因阻断质粒pKC1139-KLM-KmR。采用大肠杆菌与链霉菌的结合转移将阻断质粒含AHBA-KLM基因簇和Kan表达单元的3.0 kb线性片段转化Sterptomyces rochei 4089菌株,在卡纳霉素的平板上筛选卡纳霉素抗性转化子,经PCR检测分离到L基因阻断突变菌株。对原、变株的发酵液进行TLC和HPLC分析显示,Sterptomyces rochei 4089基因组中的L基因失活后,导致该菌株不能合成安莎类抗生素格尔德霉素。通过阻断L基因,为筛查这类放线菌产生安莎类抗生素提供了明确的组分指示作用。

利福霉素产生菌诱变育种研究

用离子束及离子束和紫外复合因子诱变处理利福霉素产生菌 ,得到比对照菌株发酵效价提高 10 %以上的菌株共 13株 ,其中提高幅度最大可达 4 2 .70 % ,产生高产株最多的诱变剂量为 3× 10 1 4/ cm2 N+ ,而产量最高菌株的诱变剂量是 7× 10 1 5/ cm2 N+ .产生高产株较多的诱变剂量并不一定就是产生增产幅度最大菌株的诱变剂量 .

海洋细菌中活性化合物的筛选策略(英文)

目的从700多株海洋沉积物分离得到的细菌中筛选安莎类抗生素和6-脱氧己糖(6DOH)糖基化修饰的次级代谢产物产生菌。方法以3-氨基-5-羟基苯甲酸(AHBA)合酶基因和dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因为靶标,分别进行安莎类抗生素和6DOH糖基化修饰的次级代谢产物产生菌的分子筛选。对AHBA合酶及dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性的菌株发酵液及提取物进行抗菌、抗肿瘤、抗病毒活性分析。采用利福霉素抗性及氢氧化钠显色初步鉴定安莎类化合物;采用α-萘酚硫酸显色初步鉴定6DOH糖基化修饰的化合物。利用16S rRNA序列对部分阳性菌株进行系统发育分析。结果共获得39株AHBA合酶基因阳性和10株dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株。阳性菌株中,78%具有不同程度的生物活性。化学初步鉴定结果表明:49%的AHBA合酶基因阳性菌株产生安莎类化合物;50%的dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因阳性菌株产生6DOH糖基化修饰的化合物。系统发育分析表明,大多数阳性菌株属于放线菌中的链霉菌属。结论基因探针筛选可作为一种合理、有效的方法从海洋细菌中发现活性代谢产物。

抗菌药研究的进展(二)

四环素类抗生素四环素类抗生素应用广泛，存在的主要问题是耐药性，进入９０年代之后，出现２个值得注意的新苗头：放线菌Ｄａｃｔｙｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ产生的大器环素（ｄａｃｔｙｃｙｃｌｉｎ）在６位上连有糖，抗菌谱、抗菌活性与四环素相似，但对大部分四环素...

奇卡娜诗学与《黄色女人》的文学阐释

当代异质族群混杂而居的境况日益凸显,促使跨界研究日益成为文艺美学的重要领域。在当代欧美文学"批判性种族研究"领域,基于美国西南部"墨美"混杂族裔经验的"奇卡娜/奇卡诺"诗学,倡导边缘文化语境中后殖民批评和女性主义的混血意识,提供了迥异于西方本质主义主流理论的视野,丰富了文学阐释的空间。美国女性主义理论家安莎杜娃立足于"边界/荒界"的"新美斯媞莎"理论话语,有助于我们了解奇卡娜的问题框架。美国新墨西哥族裔的"黄色女人"故事群蕴含着印第安文化的"地方性知识"。奇卡娜文学批评家艾伦以"部落—女性主义"对其典型故事作了别开生面的释读。奇卡娜诗学凸显了文化混杂语境中文学批评的跨界价值与亚文化意义,富于理论启迪性。

利福霉素B发酵工艺研究

研究温度、溶氧、巴比妥、磷酸盐及补料方式对利福霉素B发酵的影响。结果表明在控制培养温度 2 7℃、溶氧 2 5 %以上的条件下 ,采用流加补料工艺 ,利福霉素B的发酵效价较原工艺有明显提高 ,此工艺已在 60m3 发酵罐中进行工业化生产 ,发酵效价比原生产工艺提高了一倍以上。

利用珍贵橙色束丝放线菌ATCC31565氨甲酰基化4,5-双氢-7-去氨甲酰基格尔德霉素

格尔德霉素（geldanamycin，GDM）和安丝菌素（ansamitocin，ASM）分别是由吸水链霉菌（如streptomyces hygroscopicus17997）和珍贵橙色束丝放线菌（如actinosynnema pretiosum ATCC31565）产生的具有抗肿瘤活性的安莎类抗生素.

利福霉素类抗生素的晶型与血(尿)药浓度

目的 :探讨利福霉素类抗生素的衍生物 (利福平 ,利福定 ,利福喷丁 )的晶型与血 (尿 )药浓度的关系。方法 :通过正常人空腹口服各不同型晶粉 ,定时收集血、尿标本 ,用杯碟法测定血、尿药含量。结果 :同一药物的不同晶型粉 ,显示出各自不同的结构图形、溶解度及生物有效度的特性。结论 :凡是稳定的晶型均具恒定的结构及生物有效度。利福霉素类药物的含水量 ,对其晶型的稳定性至关重要。干燥失重 ,不是越低越好。