内生链霉菌Streptomyces sp.LC18中安莎霉素类化合物的发现

以一株红树林植物内生链霉菌Streptomyces sp.LC18为研究对象,通过固体发酵培养分离安莎霉素类代谢产物.采用凝胶柱层析和硅胶柱层析等对化学成分进行分离纯化,通过核磁共振和高分辨质谱对化学结构进行鉴定,初步研究了化合物抗菌和细胞毒活性.从10L固体发酵提取物中分离得到3个安莎霉素类化合物,分别鉴定为herbimycin A(1),herbimycin C(2),hygrocin A derivative 6(3),其中化合物1和3对人乳腺癌MDA-MB-231细胞和前列腺癌PC3细胞IC50值均小于5μmol/L.化合物1和3分别属于8酮苯安莎和9酮萘安莎,是从植物内生菌中分离得到2种类型的安莎霉素.

海洋放线菌Streptomyces sp．LZ35中的安莎霉素类化合物

目的对海洋放线菌Streptomyces sp.LZ35固体发酵提取物的化学成分进行研究。方法采用Sephadex LH-20,硅胶等色谱柱及重结晶进行分离纯化,用波谱技术鉴定化合物的结构。结果从14 L固体发酵提取物中分离得到7个安莎霉素类化合物,分别鉴定为geldanamycin(1),17-O-demethylgeldanamycin(2),herbimycin B(3),reblastatin(4),17-O-demethylreblasta-tin(5),autolytimycin(6),hygrocin A derivative(7)。结论化合物1～7均为首次从该菌株中分离得到,且首次从一株链霉菌中分离到2种类型的安莎霉素。

具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选(英文)

目的建立一种高通量筛选具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的分子筛选方法。原理3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)是安莎类抗生素生物合成的前体。在通过氨基莽草酸途径生物合成AHBA的过程中,AHBA合酶是催化5-氨基-3-脱氢-5-脱氧莽草酸形成AHBA的一个特异性关键酶。AHBA合酶基因的存在可以作为放线菌菌株具有合成安莎类抗生素能力的一个必要而非充分的条件。AHBA合酶基因高度保守,通过PCR方法可以建立一种针对AHBA合酶基因存在与否的、具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株高通量筛选方法。方法根据已知AHBA合酶序列的相似性,设计了针对AHBA合酶基因中高度保守的一段755bp片段大小的PCR筛选寡核苷酸引物,用于从土壤中分离的未知放线菌高通量筛选。结论从1900株土壤分离的未知放线菌中筛选获得33株AHBA合酶基因阳性菌株,即具有安莎类抗生素产生潜能的放线菌菌株。

利福霉素产生菌诱变育种研究

用离子束及离子束和紫外复合因子诱变处理利福霉素产生菌 ,得到比对照菌株发酵效价提高 10 %以上的菌株共 13株 ,其中提高幅度最大可达 4 2 .70 % ,产生高产株最多的诱变剂量为 3× 10 1 4/ cm2 N+ ,而产量最高菌株的诱变剂量是 7× 10 1 5/ cm2 N+ .产生高产株较多的诱变剂量并不一定就是产生增产幅度最大菌株的诱变剂量 .

缬草内生菌和根际放线菌的分离及安莎类抗生素的筛选

【目的】分离缬草内生菌及根际放线菌,筛选其中含安莎霉素类抗生素生物合成基因的菌株,挖掘其活性次级代谢产物资源。【方法】从缬草根、茎、叶及根际土壤中分离内生菌和根际放线菌,检测其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、核桃溃疡病菌、苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌的抑菌效果。设计2种简并引物,用PCR方法从抑菌效果较好的菌株中筛选含安莎霉素类抗生素基因(AHBA)的菌株。分析目标菌株的最佳发酵培养基和最适发酵时长,对发酵分离物进行HPLC和质谱分析,检测其可能的次级代谢产物。【结果】试验共分离到145株菌,其中内生菌27株,占总菌株数的18.6%,根际放线菌118株,占总菌株数的81.4%;33株对病原菌有较好的抑菌效果,占总菌株数的22.8%。筛选到1株含AHBA基因的菌株AJ21,初步鉴定其为链霉菌。菌株AJ21最佳发酵培养基为SPY培养基,最佳发酵时间为6d。菌株AJ21发酵液经分离纯化、HPLC检测和质谱分析,初步确定其含有的安莎霉素类抗生素为放线菌素D。【结论】药用植物缬草内部及根际蕴含丰富的放线菌资源,具有良好的生物学活性。

Geldanamycin产生菌生物合成相关基因的克隆与分析

目的 从 geldanamycin产生菌吸水链霉菌 (S.hygroscopicus)中克隆生物合成基因 ,为阐明生物合成机制及改造其结构奠定基础。方法 以链霉菌 /大肠埃希氏菌穿梭 cosmids p KC5 0 5为载体构建了插入片段为 2 0～ 30 kb的 S.hygroscopicus总 DNA文库。以利福霉素中与 3-氨基 - 5 -羟基苯甲酸 (AHBA)合成相关基因为探针 ,经菌落杂交 ,Southern杂交筛选同源基因片段。测序结果与 Genbank进行同源性比较分析 ,并以attp- 噬菌体载体 KC5 15利用基因阻断实验对克隆的基因片段进行功能鉴定。结果 构建的基因文库含重组基因比率高、基因组覆盖率高 ,稳定性好。经同源基因探针杂交 ,从文库中筛选出 9个阳性 cosmids克隆p CGB2 0、p CGB2 6、p CGB2 8、p CGB2 9、p CGB36、p CGB45、p CGB49、p CGB6 3、p CGB75。测序分析表明 ,cosmidp CGB2 0中 Bam HI- Bam HI 8kb片段两端的不完整 ORF编码蛋白与竹桃霉素 (oleandomycin) PKS Module 5、Module 6 (一致性为 79% )和红霉内酯合成酶 ORF2 (一致性为 75 % )、ORF1(一致性为 73% )、ORF3(一致性为 70 % )高度同源 ;Bam HI- Bam HI3kb片段一端与编码类结核分枝杆菌的磷酸吡哆醛依赖的氨基转移酶家族中半胱氨酸脱硫酶的 DNA有同源性 ,该家族与 AHBA合成酶关系密切。