志贺氏菌标准物质的制备方法

采用冷冻干燥法制备标准物质。通过正交试验法选择冻干保护率最高的保护剂配方方案。以鸡肉粉作为标准物质基质,按比例与保护剂配方混合,添加拟定菌数的新鲜菌液后进行冷冻干燥。实验制备的标准物质样品其特性值(含菌数)为530 CFU/瓶,不确定度为24 CFU/瓶。冷冻干燥样品在-20℃及4℃条件下保存12个月,特性值稳定;25℃条件下保存9个月,特性值稳定;60℃条件下保存,稳定性差。

2011年夏季某院分离志贺菌特点及某地区志贺菌血清型流行趋势分析

目的了解该院2011年分离的志贺菌及相关病例特点,结合其他区县志贺菌分离情况,总结北京市志贺菌血清型转变特点。方法 VitekⅡCompact鉴定志贺菌,血清玻片凝集法鉴定血清型,药敏试验采用K-B法。结果共分离获得志贺菌15株,其中宋内Ⅰ型14株,福氏F2a型1株;15株菌对复方新诺明、哌拉西林、氨苄西林均耐药,14株宋内Ⅰ型菌对环丙沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢西丁、亚胺培南、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦均敏感。结论宋内Ⅰ型志贺菌为主要分离菌,对环丙沙星、左氧氟沙星、阿米卡星、头孢他啶、头孢西丁、亚胺培南、头孢吡肟、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦保持高度敏感;宋内志贺菌已成为北京市流行志贺菌的主要血清型。

宋内志贺菌PFGE分型及耐药性分析

目的了解宋内志贺菌的耐药状况,并通过同源性分析研究其分子流行病学特征。方法利用K-B法对宋内志贺菌进行耐药性检测,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因分型。结果发现5株宋内志贺菌对氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、萘啶酸、四环素、复方SMZ耐药,对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、亚胺培南、氯霉素敏感。利用脉冲场凝胶电泳可将5株菌株分为4型。结论宋内志贺菌对氨苄西林、四环素、头孢菌素、复方SMZ等抗生素存在多重耐药。PFGE分型对宋内志贺菌分型能力较好,有助于分析追踪疫情和来源。

志贺菌261株菌型分布及耐药分析

目的了解上海市闵行区志贺菌菌型分布及药物敏感特点,为痢疾防治提供科学依据。方法将2007—2009年送检的肠道腹泻病人中分离出的志贺菌进行菌型分型,采用K-B法进行药物敏感试验。结果 2007—2009年间共检出261株志贺菌,主要为福氏志贺菌和宋氏志贺菌。其中福氏志贺菌190株(72.80%),宋氏志贺菌71株(27.20%)。190株福氏志贺菌中有10个血清型(F1 a14株,F2 a100株,F2b13株,F4 a4株,F4 c38株,FX变种7株,FY变种11株,F4b、F5 a、F6型各1株)。261株志贺菌对复方新诺明、氨苄西林、四环素、利福平、萘啶酸的耐药率分别为87.36%、88.12%、86.97%、81.23%、96.93%。结论该区志贺菌的耐药情况严重,且多重耐药,所以应加强耐药性监测和防治。

一起由宋内志贺菌引起感染性腹泻疫情的病原学分析

目的 对一起儿童感染性腹泻聚集性疫情进行病原学检测,以明确诊断.方法 采集病例粪便、水样、剩余食品、外环境、物表以及从业人员的肛拭子和手指涂抹液等66份样本,采用荧光定量PCR技术和细菌学分离方法,检测样本中的沙门菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、致泻性大肠埃希菌、诺如病毒、轮状病毒以及肠道腺病毒等主要感染性腹泻病原微生物,并对分离到的致病菌进行血清学分型、生化试验、药物敏感试验及脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型.结果 在发病儿童粪便中分离到的4株宋内志贺菌（宋氏志贺菌）菌株,Ct值在28.4～32.7之间,菌落形态、血清型、生化试验和药敏试验结果均相同.PFGE分型结果显示,3株菌株间无差异,另1株菌株与其余3株存有3条条带差异,但相似度较高.结论 本起聚集性感染性腹泻疫情是由宋内志贺菌引起的.

农村寄宿制学校宋内志贺菌菌痢暴发及全基因组溯源分析

目的对陕西省3起寄宿制学校感染性腹泻暴发事件进行流行病学调查、病原分离鉴定及分子溯源分析,为科学指导临床诊断治疗及流行病学调查工作提供参考。方法对陕西省3起寄宿制学校感染性腹泻事件开展现场调查,描述疫情三间分布,分析流行特征。采集病例肛拭子标本、剩余食物、环境及水源标本,进行病原分离鉴定。选择代表菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,全基因组多位点序列分型(MLST),单核苷酸多态(SNP)分析,预测毒力基因谱及耐药基因谱。结果 2017年8—9月报告的3起疫情共发病282例,以发热、腹泻为主,里急后重及粘液脓血便症状不明显,均为学生群体,性别间差异无统计学意义。病例肛拭宋内志贺菌检出率为62.22%(56/90),肛拭ipa H基因检测阳性率为69.70%(46/66),环境样本阳性率为12.31%(8/65);PFGE,全基因组MLST,SNP分析表明,3起疫情代表菌株不同源。毒力基因预测共有12种毒力基因。耐药基因预测有氨基糖苷类、甲氧苄啶类、磺胺类、β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类的耐药基因。结论陕西省3起寄宿制学校宋内志贺菌引起的细菌性痢疾暴发之间无直接关联,病原菌毒力基因谱与国内常见宋内志贺菌特征一致,存在多重耐药基因。

安徽省2008-2010年宋内氏志贺菌分子流行病学分析

目的对安徽省2008-2010年宋内氏志贺氏菌进行分子流行病学分析,为安徽省的菌痢检测和监测搭建分子平台。方法应用纸片扩散(kirby-bauer,K-B)法进行药物敏感试验;应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对20株宋内氏志贺氏菌进行基因分析;运用脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术进行亲缘性分析。结果 20株宋内氏志贺菌对氟哌酸(ciprofloxacin,CIP)和先锋必(cefoperazone,CPZ)最为敏感,敏感率达100%;多重PCR结果显示除志贺毒素1(shiga toxin 1,SET1)为阴性外,其余三种基因:侵袭性质粒H抗原(invasion plasmid antigen H,ipaH)、志贺肠毒素2(shiga toxin 2,SET2)、志贺菌增殖和侵袭相关的毒力基因(invasion associated locus,ial)皆为阳性;20株菌用XbaⅠ酶切后经PFGE电泳后可分为6个主要型别。结论安徽省受试20株宋内氏志贺菌多重耐药现象严重且基因型高度一致;菌型呈多种型别并存的趋势,说明安徽省宋内氏菌的来源属于多克隆系。

宋内志贺菌对氟喹诺酮类药物敏感性降低的相关耐药基因研究

目的研究宋内志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药物敏感性降低的相关耐药基因的变化情况。方法采用琼脂稀释法对131株宋内志贺菌进行药物敏感性检测，采用PCR法检测DNA旋转酶A亚单位（gyrA）、拓扑异构酶IVC亚单位（parC）基因的喹诺酮类药物耐药决定区（QRDR），并对PCR结果进行测序分析，同时用PCR法对质粒介导喹诺酮类耐药（PMQR）基因（qnr）和氨基糖苷乙酰转移酶变异基因[aac（6’）-Ib-cr]进行筛选。结果131株宋内志贺菌对萘啶酸的耐药率达100％，而对诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星全部敏感，对四环素、复方磺胺甲嚼唑和氨苄西林的耐药率分别为93．9％、92．8％和93．2％。94％的萘啶酸耐药宋内志贺菌株对氟喹诺酮类药物敏感性出现下降。萘啶酸耐药菌株gyrA均发生单点83位丝氨酸一亮氨酸（Ser→Leu）突变，但parC未发生突变；未检出qnr和nnc（6’）-Ib-cr基因。结论萘啶酸耐药宋内志贺菌对氟喹诺酮类药物敏感性降低，其产生的主要机制为gYrA发生83位Ser→Leu替换。

六家医院整合子介导宋内志贺菌多重耐药的形成和传播机制研究

目的 探讨我国多个地区宋内志贺菌的同源性与整合子介导其耐药的机制.方法 连续收集2010年我国六家医院分离的22株宋内志贺菌,采用纸片扩散法测定其对抗菌药物的敏感性.采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子同源性检测,PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)进行整合子检测及分类,联合RFLP和DNA测序技术分析整合子携带的耐药基因.结果 宋内志贺菌多重耐药率高达90.9％ (20/22),对四环素和复方磺胺甲噁唑耐药率最高,为95.5％,对青霉素类抗生素(氨苄西林、哌拉西林、阿莫西林)也呈高水平耐药,耐药率分别为86.4％,90.9％和90.9％.PFGE聚类分析结果显示,22株宋内志贺菌可分为10种PFGE亚型,且均属于同一群,其中优势型为F6型,在济南、长春和上海三市传播.59.1％(13/22)的宋内志贺菌中检出Ⅰ类整合子,其中7株Ⅰ类整合子阳性菌株可变区扩增阳性;86.4％(19/22)的宋内志贺菌检出Ⅱ类整合子,Ⅱ类整合子可变区扩增全部阳性;未检测到Ⅲ类整合子.22株宋内志贺菌中仅有1株(4.5％)检测到非典型Ⅰ类整合子,其可变区扩增亦阳性.DNA测序发现Ⅰ类整合子中携带耐药基因盒dfrA17-aadA5,Ⅱ类和非典型Ⅰ类整合子可变区分别携带耐药基因盒dfrA1-sat1-aadA1和bla oxa-30-aadA1.结论 多重耐药宋内志贺菌在我国不同地区间传播,整合子在宋内志贺菌中广泛存在,参与多重耐药的形成.

2011年江苏省六座城市宋内志贺菌整合子耐药基因的检测

目的 了解江苏地区宋内志贺菌中各类整合子的检出情况和携带耐药基因的种类.方法 收集2011年江苏省6座城市32株宋内志贺菌,纸片扩散法检测志贺菌对抗菌药物的敏感性,脉冲场凝胶电泳（PFGE）检测分子同源性,PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）进行整合子检测和分类,联合RFLP和DNA测序技术分析整合子携带的耐药基因.结果 多重耐药宋内志贺菌的检出率为87.5％（28/32）,对氨苄西林、萘啶酸和四环素的耐药率最高,均为87.5％,对诺氟沙星的耐药率为0.PFGE聚类分析结果发现,32株宋内志贺菌中,有3种为具有同源性的克隆,涉及31株菌,其中2株菌、5株菌和24株菌同源的各有1种克隆,分别在同一城市、两座和五座不同城市间传播.1类、2类和非典型1类整合子广泛分布于宋内志贺菌中,检出率分别为62.5％（20/32）、81.3％ （26/32）和21.9％（7/32）,未检测到3类整合子.DNA测序发现1类整合子中携带aacA4-cmlA1和dfrA1-aadA1耐药基因盒;2类和非典型1类整合子可变区分别携带耐药基因盒dfrA1-sat1-aadA1和blaaxa-30-aadA1.结论 2011年江苏省内各城市间存在同源性一致的宋内志贺菌株的传播,且多重耐药情况普遍存在,整合子在宋内志贺菌中普遍存在.

1起宋内志贺菌食源性疾病爆发的调查

目的对广西巴马县某幼儿园72名幼儿出现食源性疾患的原因进行调查分析,为及时有效控制疫情提供依据。方法对疫情现场及时进行流行病学调查和所收集样品进行实验室检测。结果通过对幼儿园疫情流行病学调查、患儿临床症状及所收集样品的实验室检测情况综合分析,认定该事件为1起宋内志贺菌污染食物引起的食源性疾病暴发疫情。结论幼儿由于食用了被宋内志贺菌污染的食物是引起本次食源性疾病疫情的主要原因,因此,应加强该园食堂卫生条件管理,避免类似事件发生。