微囊藻毒素-LR完全抗原的设计及制备

从偶联位点、偶联剂、载体蛋白和偶联步骤等分析出发,设计了微囊藻毒素-LR (Microcystin- LR ,MC- LR)完全抗原的制备方法.在半抗原分子第7位氨基酸分子上引进1个自由的氨基;再用戊二醛2步法将此中间产物(H2 N etMC- LR)分别与BSA和OVA偶联.中间产物和偶联产物分别经固相萃取和透析纯化后,经SDS凝胶电泳、紫外扫描及生物质谱技术鉴定,结果表明MC- LR与BSA的平均偶联比能达到5以上,满足了进一步免疫的要求.

2,4-二氯苯氧乙酸完全抗原和抗体的制备

以小分子环境污染物2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)为半抗原,牛血清蛋白(BSA)为载体蛋白,通过与水溶性碳化二亚胺(EDC)的偶联反应,合成适当结合比、性能良好的2,4-D完全抗原,并制备了2,4-D的多克隆抗体.完全抗原合成方法为:在pH6、0.05mol/L的磷酸盐缓冲溶液中进行偶联反应,2,4-D的最终浓度控制为12mg/mL,于4℃条件下反应18h,EDC的加入量控制在6~9mg之间.以结合比为16:1的完全抗原免疫新西兰白兔,获得了效价达到6.55×106兔抗血清.抗血清稀释2000倍,剂量-反应曲线在2,4-D浓度为0.5~2000mg/L的范围内线性度最好,相关系数R=0.9946.抗血清稀释8000和16000倍,2,4-D的检测范围为8μg/L^125mg/L,线性相关系数R分别为0.9352和0.9655.经过免疫检测条件的优化,制备的抗血清可以用于饮用水中2,4-D的检测.

绿原酸完全抗原的制备及鉴定

目的制备绿原酸完全抗原,对完全抗原进行鉴定。方法通过碳二亚胺(EDC)法把绿原酸与载体蛋白牛血清白蛋白和卵蛋白进行偶联制备,采用紫外扫描法对合成抗原进行了鉴定;用绿原酸完全抗原免疫豚鼠,设生理盐水对照组,绿原酸标准溶液对照组。间接酶联免疫法测定免疫豚鼠抗血清的效价。结果完全抗原偶联成功,测定偶联比20,符合动物免疫的要求。ELISA法检测豚鼠抗血清效价,完全抗原组豚鼠抗血清稀释1∶128为阳性,大于空白复孔A值2倍。结论成功制备绿原酸完全抗原。

玉米赤霉醇完全抗原的制备及质量鉴定

旨在合成玉米赤霉醇(ZER)人工抗原,并用其免疫小鼠以获得含高滴度ZER多克隆抗体的小鼠血清,为ZER单克隆抗体的制备奠定基础。改造ZER第16位上的羟基,合成半抗原ZER-16-羧丙基丁醚,然后分别采用混合酸酐法和碳二亚胺(EDC)法将改造后的半抗原与载体蛋白BSA或OVA偶联,制备免疫原ZER-BSA和包被原ZER-OVA,并采用凝胶电泳、动物免疫对人工抗原进行质量鉴定,间接ELISA测定抗血清效价,间接竞争(阻断)ELISA测定抗血清的敏感性和特异性。结果表明,用制备的免疫原免疫小鼠血清效价均已达到1∶104以上。6号鼠的血清敏感性最高,对ZER的半数抑制质量浓度(IC50)达15.77ng/mL,获得的血清除与α-玉米赤霉醇特异性反应外,与其结构类似物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮分别有12.5%、100%、12.5%、25%、100%的交叉反应,与其他霉菌毒素交叉反应性均小于0.5%。表明试验成功获得ZER人工抗原,通过动物免疫制备敏感性好、特异性强的ZER多克隆抗体,为ZER单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。

渔药恩诺沙星完全抗原合成方法及效果的研究

采用牛血清白蛋白(BSA)和鸡血清白蛋白(OVA)为免疫用载体蛋白,匙孔血蓝蛋白(KLH)为包被抗原用蛋白,采用不同的方法合成完全抗原,对BALB/C小鼠进行免疫,并通过紫外光谱特征、抗血清检测等手段对完全抗原的合成效果进行了分析。实验表明蛋白-恩诺沙星偶联物的紫外光谱特征可以较为准确、简便地提示完全抗原的合成效果,并能够与抗血清的酶联免疫吸附试验(ELISA)分析结果吻合。用乙二胺(EDA)对载体蛋白进行处理,可以明显提高完全抗原的合成效果;而偶联方法对于不同载体蛋白的影响也存在差异,OVA采用活化酯法效果较好,而BSA采用碳二亚胺法得到的血清效价较高。

己烯雌酚完全抗原的合成及分析

以己烯雌酚(DES)?氯乙酸钠(CH2ClCOONa)和牛血清蛋白(BSA)等为主要原料,首先用氯乙酸钠修饰DES分子中的一个酚羟基从而合成单羧甲醚己烯雌酚(DES-MCME),然后以混合酸酐法将DES-MCME与载体蛋白(BSA?OVA)偶联形成完全抗原,并以紫外扫描分析完全抗原的偶联比率,再将得到的免疫原DES-BSA按免疫程序免疫新西兰白兔。结果表明己烯雌酚及其衍生物存在着顺反异构转化现象,极性有机溶剂的溶剂化作用促使顺反异构体的转化。高分辨质谱测得合成的DES-MCME相对分子质量为325。人工免疫原及包被原的最适结合比为13和10。采用间接酶联免疫测定,产生的抗血清的稀释度可以达到102400。从而建立了DES-MCME的制备方法,并通过高分辨质谱和ELISA检测方法验证了DES人工抗原的有效性,为研制DES残留免疫检测试剂盒奠定了基础。

除草剂2,4-D完全抗原的合成与鉴定

通过活化酯法和混合酸酐法,用牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）合成2,4-D免疫抗原和包被抗原,再分别采用紫外分光光度法和酶联免疫吸附法（ELISA）进行鉴定.结果是：2种方法合成的完全抗原中2,4-D和蛋白质的偶联比分别为24：1和17：1,抗血清效价为1.28×10^4～2.56×10^4.

2,4-D完全抗原的合成及其免疫性能评价

以2，4-D为半抗原，BSA为载体蛋白，通过EDC的偶联反应条件优化试验，合成了多种结合比的完全抗原，制备了小分子环境污染物的多克隆抗体．结果表明，偶联反应优化步骤是2，4-D、BSA和EDC同时反应，4℃条件下反应18h，偶联反应可以在2，4-D的浓度为10．0～12．0mg／mL的0．05mol／L的磷酸盐缓冲溶液中进行，反应缓冲体系pH控制在5．4～6．1之间，EDC的加入量低于12mg时，采用2，4-D和多聚赖氨酸的偶联物为包被抗原．通过balb／c小鼠免疫试验评价结合比分别为6、12、18和25的完全抗原的免疫性能，结果表明结合比为12和18的完全抗原具有很好的免疫原性．其中以结合比为18的完全抗原免疫小鼠获得的抗血清对包被抗原载体的非特异性吸附低于阴性血清，2，4-D特异性血清含量高，适于作为完全抗原免疫小鼠进一步制各单克隆抗体．

双酚A完全抗原的制备

采用重氮化法在双酚A(BPA)上引入羧基,将其与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备双酚A完全抗原BPAH-BSA。紫外扫描光谱和红外光谱实验表明偶联成功,为进一步制备抗BPA抗体提供了良好的免疫原。

黄曲霉毒素B_1完全抗原合成及鼠源多抗血清的制备

为了合成黄曲霉毒素B1(AFB1)完全抗原,制备鼠源AFB1多克隆抗体血清。通过琥珀酰亚胺酯法在黄曲霉毒素B1(AFB1)分子上引入羧基,生成黄曲霉毒素B1肟(AFB1O)。用EDC法和DCC法合成AFB1-BSA和AFB1-OVA。采用薄层层析技术、紫外光谱技术(Uv)、SDS-PAGE鉴定完全抗原的合成。通过免疫BALB/c小鼠,获得鼠原多克隆血清,采用间接ELISA方法测定多抗血清的免疫效价,用竞争ELISA检测多克隆血清的敏感性和特异性。结果表明:免疫小鼠血清效价都在1:3200以上,其中6号鼠效价最高,到达1.28×10-4,敏感性好,半数抑制浓度IC50为22.268 ng/mL,交叉反应率低。本研究成功制备了AFB1完全抗原,获得了敏感的AFB1多克隆抗体血清,为以后制备AFB1单克隆抗体及免疫学快速检测方法奠定了基础。

赭曲霉毒素A完全抗原的制备及鉴定

赭曲霉毒素A(OTA)是一种对人和动物具有广泛毒性的霉菌毒素,为建立OTA在食品和饲料中的快速检测方法,采用活性酯法(NHS)将OTA与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,分别制备了免疫原OTA-BSA和包被原OTA-OVA。紫外扫描和SDS-PAGE鉴定表明,OTA与BSA和OTA与OVA偶联成功,偶联物OTA-BSA和OTA-OVA的偶联比分别为7∶1和4.5∶1。用免疫原OTABSA免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体,用OTA-OVA包被ELISA板进行检测,小鼠血清中抗OTA的抗体效价最高可达1∶51 200。表明制备的免疫原OTA-BSA具有良好的免疫原性,为OTA单克隆抗体的制备奠定了基础。

百草枯完全抗原及多克隆抗体的制备

目的改造百草枯(Paraquat PQ)半抗原,制备百草枯完全抗原及多克隆抗体,为建立酶联免疫吸附方法及其在食品安全快速检测中的应用奠定基础。方法改造半抗原PQ-hap,混合酸酐法合成免疫原(PQ-BSA)和包被原(PQ-OVA),采用SDS-PAGE电泳和质谱对其鉴定,免疫家兔2只,制备多克隆抗体;间接ELISA对其进行效价、灵敏度和特异性检测。结果成功合成百草枯免疫原和包被原,6次免疫后2只家兔血清的效价分别达到1∶40 000和1∶160 000,抗体的半数抑制浓度(IC50)分别为281.6 ng/ml和98.4 ng/ml,与百草枯类似物没有明显交叉反应。结论合成的百草枯完全抗原具有较好的免疫原性,产生的抗百草枯多克隆抗体具有较好的灵敏度和特异性。

青霉素钠完全抗原制备及其抗体水平检测

利用戊二醛法偶联青霉素钠(Penicillin,PEN)与BSA和OVA,制备完全抗原PEN-BSA和PEN-OVA。经紫外扫描及SDS-PAGE电泳鉴定完全抗原PEN-BSA和PEN-OVA偶联成功,并进行动物免疫制备抗血清,建立间接ELISA法测定免疫血清效价,经测定抗原PEN-BSA和PEN-OVA均达到理想的免疫效价,为进一步制备青霉素钠单克隆抗体及其青霉素钠药物残留快速检测试剂盒奠定基础。

米诺环素完全抗原的制备与表征

研究制备能有效用于米诺环素(MNC)残留检测的完全抗原。采用戊二醛合成法和重氮化合成法,将米诺环素与牛血清白蛋白(BSA)偶联,分别制备MNC完全抗原MNC-BSA。经红外和紫外光谱扫描结果表明:两种物质已经偶联,两种完全抗原的平均偶联比分别为9.9和5.9。采用戊二醛法合成的完全抗原免疫兔,检测抗血清效价为1:16000,表明合成的完全抗原可以作为免疫原用于制备抗体及检测时的包被原进行ELISA检测。

三聚氰胺半抗原及完全抗原的合成与鉴定

本研究合成了三聚氰胺半抗原及完全抗原并鉴定合成是否成功,为制备三聚氰胺抗体奠定基础。将2-氯-4,6-二氨基-1,3,5-三嗪和3-巯基丙酸的反应合成半抗原3-(4,6-二氨基-1,3,5-三嗪-2-基硫代)丙酸,采用质谱鉴定和红外光谱鉴定;通过活性酯法将半抗原分别与牛血清白蛋白、卵清蛋白进行偶联制备完全抗原,采用紫外光谱法初步鉴定,后经动物免疫进一步验证。结果表明半抗原与完全抗原合成成功,为后续的抗体制备奠定了基础。

构建磺胺二甲氧嘧啶完全抗原的研究

采用重氮偶合法将磺胺二甲氧嘧啶(SDM)与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,构建SDM完全抗原,以紫外扫描光谱进行鉴定。并对重氮偶合法反应体系中SDM浓度,NaNO2浓度,及pH对SDM-BSA结合比的影响进行了观察。

羧化孔雀石绿完全抗原的构建与鉴定

以对醛基苯甲酸和N,N-二甲基苯胺为原料,合成了羧化无色孔雀石绿和羧化孔雀石绿;通过薄层色谱分离纯化了合成产物,对各组分进行了高效液相色谱-质谱鉴定,结果表明m/z为375.2和373.2的碎片峰分别为羧化无色孔雀石绿的[M+H]+和羧化孔雀石绿的[M]+准离子峰;将合成的羧化半抗原通过碳化二亚胺与阳离子化BSA偶联,制备完全抗原,经紫外-可见光谱分析计算,两种完全抗原中的羧化无色孔雀石绿和羧化孔雀石绿与BSA的摩尔比分别为9.2∶1和11.1∶1。完全抗原的成功构建为后续抗体制备奠定了物质基础。

四环素与金霉素完全抗原的制备研究

采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA与金霉素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四种完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法测定出抗四环素与金霉素特异性抗体的效价最高达1∶320000,这为进一步制备抗四环素与金霉素抗体提供了良好的免疫原,同时为食品中四环素类残留的免疫学检测方法的建立奠定了基础。

阿莫西林完全抗原的合成与鉴定

目的:制备阿莫西林完全抗原并鉴定。方法:采用碳二亚胺两步法将半抗原阿莫西林与牛血清白蛋白偶联制备免疫原,采用混合酸酐法将阿莫西林与卵清蛋白偶联制备ELISA包被原。采用紫外光谱分析和动物免疫试验鉴定偶联产物。结果与结论:紫外光谱分析和动物免疫试验证实阿莫西林抗原合成成功,该抗原可用于阿莫西林ELISA检测试剂盒的研制。