免疫亲和色谱定向偶联方法的研究

将初步纯化属小鼠ＩｇＧ１亚类的抗Ｇ３单克隆抗体（ＭＧ３１－随机偶联于ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４日凝胶，并成功地定向偶联于ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ凝胶，两种偶联反应的结合率分别达到９１．７％和８６．６％。ＭＧ３１－ｒＰｒｏｔｅｉｎＡＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ的抗原结合容量是ＭＧ３１－ＣＮＢｒ－Ｓｅｐｂａｒｏｓｅ４Ｂ的１．８倍，因此，单克隆抗体通过其Ｆｃ区与ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ结合，留出正确定向的抗原结合位点，能够提高免疫亲和吸附剂的结合容量。

酰肼介导的抗体定向偶联策略提高免疫层析试纸条检测性能

以酰肼功能团修饰的胶体金作为试纸条的标记材料,利用酰肼基团可特异性地与抗体Fc片段醛基发生亲核加成反应的特性,实现抗体在胶体金纳米粒子(gold nanoparticles,AuNPs)表面的定向偶联。对比于碳二亚胺介导的共价偶联法,酰肼功能团介导的定向偶联需要更少的抗体标记量,更短的偶联时间,酰肼化胶体金免疫层析试纸条(hydrazided gold nanoparticles-based immunochromatographic assay,hAuNPs-ICA)检测玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)展示出更好的检测灵敏度;将hAuNPs-ICA检测ZEN加标的玉米样品,结果显示加标回收率介于83.1%~118.0%,批内、批间变异系数为3.9%~13.1%,表明hAuNPs-ICA具有较好的精密度和准确性。

基于蛋白A-琼脂糖凝胶黄曲霉毒素B_1免疫亲和柱的制备

将初步纯化的抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体,定向偶联于蛋白A-琼脂糖凝胶,制备成免疫亲和层析柱。结果显示,辛酸-饱和硫酸铵纯化后的单抗质量浓度为17.5 mg/m L,纯度为45.1%,抗体亚型为Ig G1。取纯化后抗体48μL与1 m L蛋白A凝胶偶联,偶联率达98.1%,高效液相色谱测定其平均相对柱容量为105 ng/0.125 m L凝胶、柱空白为0,不同样品(玉米粉、面粉、花生油、酱油、醋等)平均加标回收率在80%以上。该亲和柱在2~8℃保存12个月后,相对柱容量仍可达72 ng/0.125 m L凝胶。该法制备的亲和柱相对柱容量大,稳定性好,可用于样品中黄曲霉毒素B1分离净化的要求。

抗体偶联药物设计及临床研究进展

抗体偶联药物由单克隆抗体、连接基和细胞毒性药物组成,兼具化疗药物和抗体药物各自的优点,是一种新型靶向肿瘤治疗药物,极具发展潜力。本文总结了近年来抗体偶联药物研究领域的重要研究进展,归纳了近期处于临床各阶段的ADCs药物及其特点,并对最新的临床研究进展进行了简要评述。

多合一真菌毒素免疫亲和柱的制备及其应用

以r Protein A-琼脂糖凝胶为载体,同时偶联抗黄曲霉素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单抗,制备了AFB1-ZEN-DON三合一免疫亲和柱,并对非特异性吸附、柱空白、柱容量、柱效及样品加标回收率等指标进行评价。结果表明,0.25 m L胶对应的柱容量分别为:AFB1295 ng,ZEN 905ng,DON 2342 ng;柱空白为0;r Protein A-琼脂糖凝胶(0.25 m L胶)对3种毒素的非特异吸附率均低于8%,3种毒素不同浓度的平均柱回收分别为97.4%、98.0%和98.4%。通过优化条件,选择80%甲醇-水(80∶20,V/V)为提取溶剂,PBST稀释;FAPAS质控样本经不同批次三合一亲和柱净化后测定结果接近靶心值。制备的三合一免疫亲和柱能满足食品及饲料样品的前处理,可替代常规单一亲和柱,为多种毒素的一步富集、净化、检测奠定基础。

脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物免疫亲和柱的研制

本实验采用抗DON杂交瘤细胞株SW-3 F4、SW-3 G12,分别制备出两种不同特性的单抗,然后与蛋白A-琼脂糖凝胶定向偶联,制备出了能同时分离净化DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)及其乙酰化衍生物的三合一免疫亲和柱(IAC),并对其性能进行了评价。结果表明:抗体1和抗体2均为IgG1亚型,亲和常数分别为3.0×10~8 L/mol和2.0×10~9 L/mol,与DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON的交叉反应率分别为100%、0.1%、453%和100%、101%、6%。制备的IAC柱,单标过柱的平均柱容量DON、3-Ac-DON和15-Ac-DON依次为3 243 ng/0.25 mL、1 285 ng/0.25 mL和1 527 ng/0.25 mL,非特异性吸附率小于2.3%,3种毒素在小麦基质中平均加标回收率均大于89%。本实验制备的IAC柱容量大、回收率高,适于DON及其乙酰化衍生物的纯化分离。