反义AT1R腺病毒重组体的构建及鉴定

目的 构建含人血管紧张素Ⅱ1型受体反义cDNA(AS-AT1R)的重组腺病毒载体，为AS-AT1R抗高血压及其并发症的研究。方法 用定向克隆法将人AT1RcDNA反向插入到穿梭质粒pACCMVPLPA的CMV启动子之下，获得重组质粒pAd—AS—hAT1R。后者与pJM17通过脂质体共转染293细胞，经同源重组获得含反义人AT1R基因的重组腺病毒Ad—AS—hAT1R。通过PCR共扩增法鉴定Ad—AS—hAT1R。根据260nm紫外光吸收值计算病毒滴度。结果 AT1RcDNA成功地反向插入pACCMVPLPA载体，以重组病毒DNA为模板，同时扩增出670bp的AT1RcDNA片段和860bp的腺病毒骨架基因片段，证实了Ad—AS—hAT1R的正确性。病毒滴度为0．82×10^12pfu／ml。结论 成功构建了携带反义人AT1RcDNA的腺病毒，为AS-AT1R抗高血压的治疗研究奠定了基础。

瘦素与肝纤维化

1994年Zhang等应用定向克隆法首次从肥胖和糖耐量异常的动物ob／ob小鼠中成功克隆出肥胖基因（obese gene，ob基因）和人类的同源序列，人与小鼠间ob基因的编码序列同源性高达84％，基因的高同源性提示ob基因及其表达产物功能的高度保守性。1995年Halaas等应用DNA重组技术，由大肠杆菌合成了人和小鼠ob基因的表达产物，因其基本作用能使动物体重降低而变瘦，故被命名为瘦素（leptin）。

乙型肝炎肝硬化患者血清和腹水瘦素测定

瘦素是由肥胖基因（ob基因）编码的一种由167个氨基酸组成的分泌型蛋白质，于1994年由Zhang等应用定向克隆法从肥胖与糖耐量异常的ob／ob小鼠中首次克隆成功。近年发现，瘦素与肝纤维化和肝硬化的发展密切相关。但由于研究对象、病因及病情不同，结果尚存争议。本研究通过观察我国发病率最高的乙型肝炎肝硬化患者血清和腹水瘦素水平变化，探讨瘦素在评价肝硬化患者肝功能储备状况及腹水鉴别中的应用价值。