生长激素释放因子肝脏定向表达复合物在家兔体内的表达

外源基因在体内的转染及表达存在转染效率低、表达时间短等缺点 ,利用受体介导基因转移技术 ,可以将基因定向转入到特定组织 ,并且能提高转染效率和表达时间。在本试验中 ,利用肝脏去唾液酸糖蛋白受体 (ASGR)将生长激素释放因子 (GRF)基因定向转入到家兔肝脏组织并得到了表达。首先通过 DNA阻滞试验确定质粒 DNA与多聚赖氨酸 (poly- L- lysine,PL L)的结合比例及反应液的最佳 Na Cl浓度 ,然后将 PL L 与 α- D-吡喃半乳糖苯基异硫氰酸盐 (α-D- galactopyranosylphenyl isothiocyanate) (物质的量之比为 8∶ 1)在 p H9.0的 Na2 CO3溶液中进行糖基化反应 ,得到糖基化的 PL L(gal PL L)后透析除去未反应的糖并测定反应物糖含量。将糖基化的 PL L 与克隆有 GRF基因的 pc D-NA3- GRF质粒 (质量比为 3.16∶ 1)在 1.0 31m ol/ L的 Na Cl溶液中进行连接 ,最终得到 DNA- gal PL L复合物 ,电镜观察其结构。耳缘静脉注射质粒复合物到家兔体内 (1.5 mg/只 ) ,用 RT- PCR和 EL ISA检测不同组织的表达情况。结果注射后 7d家兔的肝脏 RT- PCR结果呈阳性 ,2 7d仍能检测到 GRF蛋白 ,但同时在其他的组织也检测到表达。并且进行了增重试验 ,发现定向转移

硫化物醌氧化还原酶定向表达载体的构建及细胞转染表达检测

为建立硫化物醌氧化还原酶(SQR)的肠道定向表达载体,同时通过转染小鼠肠道上皮细胞确定载体的有效性,本试验采用重叠PCR、中间载体法、酶切连接法获得重组载体,通过脂质体转染法将重组载体转入小鼠肠道上皮细胞,并鉴定重组载体的特异性表达。结果显示,成功构建了以肠脂肪酸结合蛋白质(IFABP)为启动子的SQR肠道定向表达载体pc DNA3.1(-)-IFABP-SQR-GFP,并在小鼠肠道上皮细胞中检测到表达的融合绿色荧光蛋白质(GFP)。表明IFABP启动子能够在肠道细胞中定向启动SQR的表达。

基因的组织定向表达

California大学(San Francisco)的Yuet Wai Kan研究小组成功地在血红细胞中定向表达了重组蛋白。这项研究将在基因疗法中起作用并有助于家畜疾病的治疗。 经基因工程手段将多肽激素促红细胞生成素的基因和莫洛尼氏白血病毒部分病毒外壳蛋白基因接入逆转录病毒载体。病毒对带有促红细胞生成素受体的鼠类和人类细胞(即血红细胞前体)的感染性增强了。基因导入效率高。该小组相信这种配体-受体相互作用可扩展到多种其它系统。

人胃癌细胞定向克隆表达cDNA文库的构建及鉴定

目的：克隆胃癌的相关基因。方法：提取人胃癌细胞总RNA，分离其mRN。以NatI／oligo（dT）12-18为引物合成双链。cDNA，除去小于400bp的cDNA片段后，连接EcoRⅠ人工接头，经NotⅠ酶酶切，插入定向克隆表达载体λExcellNotI／EcoRI／CIP，体外包装后转染大肠杆菌NM522，构建了人胃癌细胞MGC－803定向克隆表达。cDNA文库。结果：文库含1．2×106个重组子，重组率为96．7％。用PCR技术鉴定，文库中插入cDNA的平均大小为1kbc结论：该文库适于筛选各种丰度mRNA的cDNA克隆。

After Effects中利用表达式实现信号发射器的制作

After Effects中制作普通动画效果通常是改变对象的属性和进行关键帧设置来完成,也可以利用表达式制作一些复杂的效果精确的动画。After Effects中表达式的种类较多,时间表达式是使用效率频率较高的表达式,结合其他表达式如轴定向表达式、索引表达式等可制作出效果较好的动画。

VD_3羟基化酶的定向研究进展

维生素D3羟基化酶(Vdh)作为细胞色素酶P450s(CYP)蛋白家族成员,催化VD3形成有生物活性的1α,25(OH)2VD3。但是,由于VD3并不是Vdh的天然底物,Vdh羟基化活性较低。采用定向构建Vdh重组质粒的方法对Vdh催化活性位点给予优化,从而提高其羟基化能力。就目前对Vdh的结构特性和定向研究进行综述。

黑曲霉作为分泌蛋白细胞工厂的研究进展

黑曲霉具有极强的分泌蛋白的能力,其分泌的木质纤维素降解酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等广泛应用于食品、饲料和生物技术等相关工业中。本文围绕黑曲霉生产同源和异源分泌蛋白,阐述黑曲霉作为分泌蛋白细胞工厂的巨大潜力。首先,通过总结黑曲霉表达系统的优越性,确定了黑曲霉作为分泌蛋白细胞工厂的开发前景。随后,介绍了初步构建黑曲霉分泌蛋白细胞工厂的一般流程。接着,总结了近十年来黑曲霉作为同源分泌酶细胞工厂的研究进展,提出在黑曲霉中定向表达分泌酶是深入研究黑曲霉自身分泌酶性质、功能和结构的理想策略。最后,总结了近年来黑曲霉作为异源分泌蛋白细胞工厂的研究进展,并从异源蛋白表达中遇到的难点出发介绍了完善黑曲霉细胞工厂来提高异源蛋白产量的对策。

国人正常睾丸组织定向克隆表达cDNA文库的构建及意义

目的 研究精子发生相关基因的结构与功能 ,构建中国人正常睾丸组织定向克隆表达cDNA文库。 方法 提取国人正常睾丸组织mRNA ,逆转录合成cDNA ,SalI/NotI酶切后基因重组法定向克隆于质粒表达载体pSPORT1中 ,转化细菌后扩增。 结果 文库大小为 7× 10 5,SalI/NotI酶切鉴定 ,插入的cDNA片段多为 0 .5～ 2 .0kb。 结论 国人正常睾丸组织定向克隆表达cDNA文库构建成功 ,质量较好 ,可进行包括低丰度mRNA在内的所有丰度mRNA的cDNA克隆筛选 ,为进一步研究精子发生相关基因的结构与功能提供了实验依据。