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利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库
被引量:
1
1
作者
武景阳
李朝翠
+1 位作者
孔清华
毛炳宇
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期368-372,共5页
描述了一种新的构建cDNA文库的方法,其中用来合成cDNA第一链的随机引物5′-端被加上碱基d(AC),在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d(GTCG)。在cDNA双链3′-端,连接头连接上后会形成一个完整的SalI酶切位点d(GTCGAC),而在5′...
描述了一种新的构建cDNA文库的方法,其中用来合成cDNA第一链的随机引物5′-端被加上碱基d(AC),在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d(GTCG)。在cDNA双链3′-端,连接头连接上后会形成一个完整的SalI酶切位点d(GTCGAC),而在5′-端几乎不会形成SalI位点。在SalI酶切后利用形成的3′-粘性末端与5′-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒载体,再通过转化细菌获得cDNA文库。利用此方法构建了一个不同发育时期非洲爪蟾胚胎酵母双杂交cDNA文库。检测了文库中空载体的比例,插入片段大小和不同基因的表达水平几个指标,都符合预期,但是同时发现定位于mRNA的3′-端的插入片段比例比较低。这种倾向性符合文献报道,应该是实验系统的倾向性,不影响进一步的酵母双杂交实验。这些数据证明成功地构建了定向非洲爪蟾酵母双杂交cDNA文库。
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关键词
非洲爪蟾
酵母双杂交
随机引物
定向cdna文库
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职称材料
题名
利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库
被引量:
1
1
作者
武景阳
李朝翠
孔清华
毛炳宇
机构
中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室
出处
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期368-372,共5页
基金
国家杰出青年科学基金(30425011)
国家自然科学基金重点项目(30530380)
文摘
描述了一种新的构建cDNA文库的方法,其中用来合成cDNA第一链的随机引物5′-端被加上碱基d(AC),在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d(GTCG)。在cDNA双链3′-端,连接头连接上后会形成一个完整的SalI酶切位点d(GTCGAC),而在5′-端几乎不会形成SalI位点。在SalI酶切后利用形成的3′-粘性末端与5′-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒载体,再通过转化细菌获得cDNA文库。利用此方法构建了一个不同发育时期非洲爪蟾胚胎酵母双杂交cDNA文库。检测了文库中空载体的比例,插入片段大小和不同基因的表达水平几个指标,都符合预期,但是同时发现定位于mRNA的3′-端的插入片段比例比较低。这种倾向性符合文献报道,应该是实验系统的倾向性,不影响进一步的酵母双杂交实验。这些数据证明成功地构建了定向非洲爪蟾酵母双杂交cDNA文库。
关键词
非洲爪蟾
酵母双杂交
随机引物
定向cdna文库
Keywords
Xenopus laevis
Yeast two-hybrid
Random primer
Directional eDNA library
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库
武景阳
李朝翠
孔清华
毛炳宇
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
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