激活Nodal信号通路促进小鼠胚胎干细胞向定型内胚层分化

目的：探讨激活Nodal信号通路在小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESC）向定型内胚层（definitive endoderm,DE）分化中的作用,寻找小鼠ESC向DE分化的最佳培养体系。方法：根据培养基的不同,实验分为3组：胚胎干细胞组（基础培养＋LIF）、自然分化组（基础培养基）和activin A组（基础培养基＋50μg/L activin A）。细胞培养1~7 d,收集不同作用时点（1、3、5、7 d）的细胞及细胞爬片。用流式细胞术检测CXCR4阳性细胞的比例;免疫细胞化学法检测CXCR4蛋白的表达;Western blot检测OCT4及CXCR4蛋白的表达。结果：流式细胞术检测结果提示,随着培养时间的延长,CXCR4阳性细胞的比例,胚胎干细胞组在1~7 d无明显变化,自然分化组和activin A组逐渐增高,第5天达高峰（P〈0.05）,其中activin A组最高（P〈0.05）。细胞免疫组化结果显示CXCR4阳性细胞呈棕褐色或棕黄色。Western blot的结果提示,随着培养时间的延长,胚胎干细胞组OCT4和CXCR4蛋白表达无明显变化;自然分化组和activin A组的CXCR4蛋白的表达逐步增高,OCT4蛋白的表达逐步下降,第5天达高峰（P〈0.05）,其中activin A组的表达最明显（P〈0.05）。结论：在小鼠ESC分化过程中,在诱导培养的第5天,DE的比例最高。激活Nodal信号通路可以促进小鼠ESC向具有CXCR4分子标志的DE分化,有利于获取更多的DE细胞。

抑制LSD1对hiPSCs向定型内胚层分化的调控作用

目的:探讨抑制组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)对人诱导性多能干细胞(hiPSCs)向定型内胚层(DE)分化的调控作用。方法:利用LSD1抑制剂或shRNA抑制LSD1表达,观察hiPSCs形态变化并检测LSD1活性水平,CCK-8方法检测细胞增殖活性,qPCR检测hiPSCs多能性基因及各胚层标志基因的表达,IP-WB方法检测LSD1调控靶基因的复合体模式,Ch IP-qPCR方法检测DE标志基因启动子区域组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化和三甲基化(H3K4me2/me3)及第9位赖氨酸乙酰化(H3K9ac)水平。结果:(1)抑制LSD1可显著下调hiPSCs多能性基因OCT4、Y染色体性别决定区域盒2(SOX2)及Nanog同源盒(NANOG)的表达水平(P <0. 05);显著上调外胚层标志基因β3-微管蛋白(TUBB3),DE标志基因Y染色体性别决定区域盒17(SOX17)和叉头盒A2(FOXA2),以及中胚层标志基因骨形态发生蛋白2(BMP2)的表达水平(P <0. 05);(2)当LSD1活性为正常水平的53. 4%时利于DE分化;(3) LSD1在hiPSCs核内与组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及阻遏物元件1沉默转录因子辅阻遏物(CoREST)以复合体的形式调控靶基因;(4)抑制LSD1后,SOX17和FOXA2基因启动子区域LSD1与HDAC1结合水平均显著下降,同时H3K4me2/me3和H3K9ac富集水平显著提高(P <0. 01)。结论:LSD1通过调控DE分化关键基因启动子区域H3K4me和H3K9ac水平来影响hiPSCs向DE的分化能力。

小鼠拟胚体中定型内胚层的比例对小肠吸收细胞分化的促进作用

目的:探讨悬浮状态下小鼠拟胚体中定型内胚层的分化比例对其体内小肠吸收细胞分化的影响.方法:利用标志分子检测不同阶段胚体中定型内胚层的分化及ActivinA对其分化的促进作用.随后,接种含高比例定型内胚层的胚体至裸鼠皮下培育移植瘤,研究移植瘤中吸收细胞的分化.结果:培养5d的胚体中定型内胚层的比例较1、3、7d高(Gsc:0.9809±0.1001vs0.5435±0.0821,0.5525±0.0786,0.2234±0.0425;Tm4sf2:0.9231±0.1121vs0.0017±0.0007,0.0176±0.0058,0.6542±0.0742;Gpc1:0.8639±0.1098vs0.5882±0.1027,0.7112±0.0956,0.4239±0.0874,均P<0.05),50μg/L的ActivinA可使其分化比例进一步升高(均P<0.05).诱导组胚体细胞所形成的皮下移植瘤中,小肠吸收细胞标志分子的表达量显著高于对照组(均P<0.05),且含有较多表达Fabp2的细胞团及腺样结构.结论:ActivinA可通过提高悬浮状态下小鼠拟胚体中定型内胚层的分化比例促进其小肠吸收细胞的体内分化.

2010糖尿病治疗领域的研究进展和热点回顾

1 糖尿病预防研究方面的进展 美国糖尿病预防计划(diabetes prevention program,DPP )研究结束后,所有3组受试者在经过强化生活方式干预的集体辅导后进入DPP 结局研究(dpp outcome study,DPPOS ),该研究的目的是明确强化生活方式干预组糖尿病预防作用是否长期存在。所有受试者均接受生活方式干预,但仍保留原DPP 分组。经过6.8 年的随访,研究小组最近公布了DPPOS 研究结果。结果显示:在总共随访10 年后,强化生活方式干预组的平均体重较DPP 随机化时减少了2 kg (在DPP 的第1年,平均体重减少了7 kg )。