表达毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6的一组基因的克隆

人源毒素源性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.Coil ETEC)是引起婴幼儿及旅游者腹泻的主要致病菌。ETEC的致病因子包括定居因子抗原 (Colonization factor antigens,CFAs)和肠毒素。大多数ETEC菌株均能产生抗原特异的菌毛,介导细菌与宿主小肠粘膜表面并在粘膜表面上受体的结合,使得细菌能定殖于粘膜表面并在粘膜的功能性清除中存活下来。已经报道的定居因子抗原包括CFA/Ⅰ,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅲ、CFA/Ⅳ(PCF8775)、PCF09和PCFO159等。CFA/Ⅰ和CFA/Ⅲ均由单一的菌毛亚基构成,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅳ则由多种表面抗原(colisurface antigen,CS)复合而成。所有的CFA/Ⅳ阳性菌株均表达CS6抗原,其中有些同时表达CS4或CS5抗原。CS4和CS5都是直径6～7nm的菌毛,能引起人和牛血红细胞的甘露糖抗性的凝集反应(MRHA)。迄今为止,没有观祭到CS6明显的菌毛结构,CS6也不能引起MRHA阳性反应。然而动物实验的结果表明,CS6是CFA/Ⅳ复合抗原中一种对定居作用最重要的抗原”,。本研究组已经通过分子克隆的手段获得了能分别表达CFA/Ⅰ和CS3抗原的重组菌株,用于人源ETEC疫苗的研究。本文报道了表达CS6菌毛抗原的DNA片段的克隆,并用免疫吸附制备的CS6抗血清测定了重组菌株表达的菌毛蛋白。

ETEC多价定居因子对仔猪大肠杆菌病的预防试验

应用分子免疫学理论 ,将定居因子K88,K99,987P ,F4 1与其特异受体结合 ,封闭肠粘膜上皮细胞的受体 ,阻断致病菌的定居因子与肠粘膜上皮细胞特异受体的结合 ,使致病菌无法定居。试验结果显示 ,其仔猪攻毒保护率为 10 0 % ,预防试验保护率为 10 0 % ,可以有效控制仔猪大肠杆菌的发生 。

产肠毒素大肠杆菌定居因子Ⅰ基因克隆与表达

目的:在大肠杆菌DH5α中表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenio escherichia coli,ETEC)定居因子CFA/Ⅰ,检测重组表达的ETEC CFA/Ⅰ。方法:以质粒pBV220为基础,构建pBV220-CFA/Ⅰ重组载体,表达产物用SDS-PAGE鉴定,免疫原性实验验证。结果:成功构建了pBV220-CFA/Ⅰ重组载体,表达产物的分子量与天然蛋白相同,动物免疫试验表明重组菌具有免疫原性。结论:CFA/Ⅰ基因的成功克隆为今后的ETEC CFA/Ⅰ候选疫苗研制奠定了基础。

肠毒素源性定居因子CS6在减毒伤寒沙门氏菌中表达及免疫原性的研究

将编码肠毒素源性大肠杆菌定居因子抗原ＣＳ６ 基因克隆至ｐＸＬ６７０ ，转化ａｓｄ 基因突变的Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ６０９７ ，获得重组质粒ｐＳＳ６４ ，再将后者转化至减毒的△ａｒｏＡ、△ａｒｏＣ、△ａｓｄ 伤寒沙门氏菌，构建了无药物抗性且稳定的大肠杆菌和伤寒双价菌苗候选株。小鼠腹腔免疫和攻击实验表明，该菌株对伤寒沙门氏菌毒株的攻击具有良好的保护作用。家兔免疫实验证明，该菌株能产生抗ＣＳ６ 和伤寒菌Ｖｉ

酶联免疫吸附试验定量检测产毒性大肠杆菌定居因子

目的为了特异、敏感和方便地检测产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ。方法和结果我们用ＣＦＡⅠ或ＣＦＡⅡ阳性ＥＴＥＣ株免疫的兔抗血清所纯化的抗体，建立了检测ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ的ＥＬＩＳＡ试验方法，并且探索了简便的标本处理方法。结论本法特异、敏感、简单易行，适合于临床实验室和流行病学调查应用。

肠毒素大肠杆菌定居因子CS3和肠毒素融合抗原基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌中的共表达(英文)

不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)是产肠毒素大肠杆菌的主要致病因素 ,CS3为该菌的优势定居因子 ,是定居因子CFA/II菌毛抗原的共有抗原组分。采用基因操作技术将编码CS3和融合肠毒素蛋白基因转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗候选株X4 0 72中进行表达。用重组菌株口服免疫小鼠后 ,免疫动物能产生抗CS3、LT和ST的血清抗体。特别有意义的是 ,所产生的抗ST抗体能中和天然ST的生物活性。

应用斑点ELISA检测产肠毒素性大肠杆菌定居因子抗原

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)在发展中国家是引起婴幼儿和旅游者腹泻的最主要病原菌。据WHO预测,全世界每年因ETEC引起腹泻而致死的5岁以下婴幼儿多达80万。该菌的致病机制是,它能粘附并定居到宿主小肠表皮细胞,繁殖产生耐热肠毒素或不耐热肠毒素,前者主要由定居因子抗原(CFA)负责,

论匈奴社会中的定居因子

匈奴以畜牧为业、兼营狩猎的游牧生活形态已是学术之共识,土地的价值似乎远不及农业社会。实则,土地曾在匈奴社会经济、政治军事、精神信仰等方面发挥重要作用,其中蕴含的定居因子与匈奴社会发展之间存在较为密切的关系。这对于匈奴民族的汉化,乃至最终融入农耕文明社会产生了不容忽视的影响。以匈奴为代表的少数民族汉化和各民族大融合促进了中国古代和谐边疆之构建。

环境对产毒性大肠杆菌定居因子表达的调控

探讨几种环境因素对产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）两种主要定居因子ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ表达的影响。结果表明细菌的生长期以及细胞外渗透压、ｐＨ、气体组成的不同均可不同程度地影响ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ的表达，其中渗透压对两种定居因子的影响有所不同。研究结果提示ＥＴＥＣ的ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ的表达与环境适应有关。

毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6基因的克隆

通过构建人源毒素源性大肠杆菌野生株E519/66A大质粒的基因文库,成功地筛选出能表达定居因子抗原CS6菌毛的阳性克隆,初步确定了克隆DNA片段的限制性内切酶图谱。CS6抗原的编码和调控基因集中在一大小为4.6kb的DNA区段中,该片段能产生两种分子量大小不同、但抗原反应交叉的菌毛蛋白。本研究获得的CS6抗原阳性的重组菌株可用于人源ETEC多价疫苗的研制,克隆的基因片段亦可作为研究CS6菌毛蛋白基因表达及调控的基础。

肠毒素大肠杆菌定居因子CS6蛋白的纯化和抗体制备

将大肠杆菌E519/66A在CFA固体培养基上培养,收菌后经热水浴脱蛋白、硫酸铵分级盐析、超速离心及S-200柱纯化,获得了相对分子量约14600的高纯度CS6蛋白。用其免疫家兔,然后颈动脉采血。ELSIA法检测血清,测得效价为1∶32000。Western印迹证实CS6抗原蛋白可特异性结合抗CS6多克隆抗血清。本研究建立了分离纯化肠毒素大肠杆菌定居因子CS6抗原蛋白的有效方法;获得了高纯度的野生型定居因子抗原CS6蛋白及相应的多克隆抗血清。对于进一步研究肠毒素大肠杆菌腹泻疫苗具有重要意义。

携带定居因子抗原的非毒素原性大肠杆菌 CF138 株特性的鉴定

对自腹泻病人粪便标本中分离的携带定居因子抗原的菌株（命名为ＣＦ１３８）的特性，侧重从两个方面进行了鉴定。通过电子显微镜观察，发现其菌体表面具有ＣＳ１及ＣＳ３纤毛结构，聚乙烯珠粘附试验结果证实具有粘附作用，甘露糖抗性血凝试验呈抗性凝集，与ＣＦＡ／Ⅱ抗血清作用显示强凝集阳性，属０６：Ｈ１６血清型，采用家兔肠攀试验，乳鼠ＳＴ活性测定及用ＬＴ、ＳＴ放射性ＤＮＡ探针检测等现行测定ＬＴ及ＳＴ肠毒素的方法，证实该株不产生肠毒素，结果表明该株属具有定居因子抗原的非毒素原性大肠杆菌自然诱变株。灌注该株菌体的免疫豚鼠产生了抵抗肠毒原性大肠杆菌攻击的保护力，表明该株系一潜在的抗ＥＴＥＣ感染的侯选菌苗株。

CFA／Ⅰ重组克隆定居因子菌毛抗原的纯化及形态学观察

用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ（ＣＦＡ／Ⅰ）的重组克隆，通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化，再经超速离心及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析，得到了ＣＰＡ／Ⅰ的纯化样品，得率约为０．９ｍｇ／ｇ湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示一条蛋白质带，其分子量为１５ｋＤａ，与天然ＣＦＡ／Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明，纯化的重组克隆ＣＦＡ／Ⅰ与天然ＣＦＡ／Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了ＣＦＡ／Ⅰ的菌毛形态。

产肠毒素性大肠杆菌毒力因子与疫苗

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)所致腹泻是发展中国家的主要公共卫生问题。本文简要介绍了ETEC毒力因子在致病机理中所起的作用,并对近年来ETEC疫苗的研制现状作了重点阐述。

肠毒素性大肠杆菌疫苗研究现状

肠毒素性大肠杆菌（entertoxigenic escherichia coli，ETEC）是婴幼儿腹泻的主要病原菌。Wenneras等…估计每年全球5岁以下儿童因ETEC感染的病例高达2亿人次，ETEC也是到发展中国家旅游者腹泻的主要病原菌，30％～60％的旅游者腹泻由ETEC所致。一般认为ETEC属非侵袭菌，进入宿主体内后，由定居因子（colonization factor，CFs）黏附到小肠上皮细胞表面，

肠毒素大肠杆菌疫苗研究进展

肠毒素大肠杆菌是导致发展中国家婴幼儿及到这些国家旅游者腹泻的主要致病菌。致病机制是由ETEC表面的菌毛定居因子和肠毒素共同作用的结果。目前在研制和评价预防ETEC腹泻的候选菌苗方面已取得重大进展。本文对已研制的和正在研制的ETEC疫苗进行了概述 ,其中包括早期的亚单位疫苗、载体疫苗、减毒活菌苗、DNA疫苗和植物疫苗等。

我国预防幼畜腹泻大肠杆菌基因工程菌苗的研究现状

肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起新生幼畜(仔猪、犊牛、羔羊)腹泻在国内外都很普遍,是导致幼畜死亡的主要原因之一.ETEC的致病环节主要有两个方面:一是肠毒素,有不耐热性肠毒素(LT)和耐热性肠毒素(ST),可促使肠腔积液,引起腹泻;二是粘着素(定居因子).粘着素抗原是细菌细胞膜上长出的菌毛状结构,它们是由蛋白亚单位经装配而成。