表达毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6的一组基因的克隆

人源毒素源性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.Coil ETEC)是引起婴幼儿及旅游者腹泻的主要致病菌。ETEC的致病因子包括定居因子抗原 (Colonization factor antigens,CFAs)和肠毒素。大多数ETEC菌株均能产生抗原特异的菌毛,介导细菌与宿主小肠粘膜表面并在粘膜表面上受体的结合,使得细菌能定殖于粘膜表面并在粘膜的功能性清除中存活下来。已经报道的定居因子抗原包括CFA/Ⅰ,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅲ、CFA/Ⅳ(PCF8775)、PCF09和PCFO159等。CFA/Ⅰ和CFA/Ⅲ均由单一的菌毛亚基构成,CFA/Ⅱ、CFA/Ⅳ则由多种表面抗原(colisurface antigen,CS)复合而成。所有的CFA/Ⅳ阳性菌株均表达CS6抗原,其中有些同时表达CS4或CS5抗原。CS4和CS5都是直径6～7nm的菌毛,能引起人和牛血红细胞的甘露糖抗性的凝集反应(MRHA)。迄今为止,没有观祭到CS6明显的菌毛结构,CS6也不能引起MRHA阳性反应。然而动物实验的结果表明,CS6是CFA/Ⅳ复合抗原中一种对定居作用最重要的抗原”,。本研究组已经通过分子克隆的手段获得了能分别表达CFA/Ⅰ和CS3抗原的重组菌株,用于人源ETEC疫苗的研究。本文报道了表达CS6菌毛抗原的DNA片段的克隆,并用免疫吸附制备的CS6抗血清测定了重组菌株表达的菌毛蛋白。

应用斑点ELISA检测产肠毒素性大肠杆菌定居因子抗原

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)在发展中国家是引起婴幼儿和旅游者腹泻的最主要病原菌。据WHO预测,全世界每年因ETEC引起腹泻而致死的5岁以下婴幼儿多达80万。该菌的致病机制是,它能粘附并定居到宿主小肠表皮细胞,繁殖产生耐热肠毒素或不耐热肠毒素,前者主要由定居因子抗原(CFA)负责,

毒素源性大肠杆菌定居因子抗原CS6基因的克隆

通过构建人源毒素源性大肠杆菌野生株E519/66A大质粒的基因文库,成功地筛选出能表达定居因子抗原CS6菌毛的阳性克隆,初步确定了克隆DNA片段的限制性内切酶图谱。CS6抗原的编码和调控基因集中在一大小为4.6kb的DNA区段中,该片段能产生两种分子量大小不同、但抗原反应交叉的菌毛蛋白。本研究获得的CS6抗原阳性的重组菌株可用于人源ETEC多价疫苗的研制,克隆的基因片段亦可作为研究CS6菌毛蛋白基因表达及调控的基础。

携带定居因子抗原的非毒素原性大肠杆菌 CF138 株特性的鉴定

对自腹泻病人粪便标本中分离的携带定居因子抗原的菌株（命名为ＣＦ１３８）的特性，侧重从两个方面进行了鉴定。通过电子显微镜观察，发现其菌体表面具有ＣＳ１及ＣＳ３纤毛结构，聚乙烯珠粘附试验结果证实具有粘附作用，甘露糖抗性血凝试验呈抗性凝集，与ＣＦＡ／Ⅱ抗血清作用显示强凝集阳性，属０６：Ｈ１６血清型，采用家兔肠攀试验，乳鼠ＳＴ活性测定及用ＬＴ、ＳＴ放射性ＤＮＡ探针检测等现行测定ＬＴ及ＳＴ肠毒素的方法，证实该株不产生肠毒素，结果表明该株属具有定居因子抗原的非毒素原性大肠杆菌自然诱变株。灌注该株菌体的免疫豚鼠产生了抵抗肠毒原性大肠杆菌攻击的保护力，表明该株系一潜在的抗ＥＴＥＣ感染的侯选菌苗株。

产肠毒素大肠杆菌定居因子Ⅰ基因克隆与表达

目的:在大肠杆菌DH5α中表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenio escherichia coli,ETEC)定居因子CFA/Ⅰ,检测重组表达的ETEC CFA/Ⅰ。方法:以质粒pBV220为基础,构建pBV220-CFA/Ⅰ重组载体,表达产物用SDS-PAGE鉴定,免疫原性实验验证。结果:成功构建了pBV220-CFA/Ⅰ重组载体,表达产物的分子量与天然蛋白相同,动物免疫试验表明重组菌具有免疫原性。结论:CFA/Ⅰ基因的成功克隆为今后的ETEC CFA/Ⅰ候选疫苗研制奠定了基础。

表达CS3菌毛和CT-B抗原双价疫苗候选株的构建

人源肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起婴幼儿及旅游者腹泻的主要病原菌。ETEC的致病因子包括定居因子抗原和肠毒素。定居因子抗原多以菌毛的形式存在于细菌表面,是致病的先决条件;肠毒素则是致病的直接原因。理想的ETEC腹泻菌苗应具有定居因子抗原和肠毒素类毒素抗原,以便免疫接种后,使宿主既产生抗病原菌定居宿主肠道的抗定居因子抗体,又能产生中和肠毒素的抗肠毒素抗体。

CS3表面抗原基因的表达和纤毛装配元件的研究

在肠毒素大肠杆菌(ETEC)的已知定居因子抗原(colonization factor antigen,CFA)中,CFA Ⅰ、CFA Ⅱ和CFA Ⅳ分布较广,是优势血清型。在上述的CFAs中,CFA Ⅰ为单一抗原组分,而CFA Ⅱ则有3种抗原组分,分别称为CS1、CS2和CS3。临床分离株中常以CS1/CS3、CS2/CS3或单独以CS3的形式出现,可见CS3是CFA Ⅱ阳性菌株的共同抗原成分。已知CS3是由分子质量60Mu的质粒编码的。

产肠毒素性大肠杆菌毒力因子与疫苗

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)所致腹泻是发展中国家的主要公共卫生问题。本文简要介绍了ETEC毒力因子在致病机理中所起的作用,并对近年来ETEC疫苗的研制现状作了重点阐述。

CFA／Ⅰ重组克隆定居因子菌毛抗原的纯化及形态学观察

用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ（ＣＦＡ／Ⅰ）的重组克隆，通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化，再经超速离心及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析，得到了ＣＰＡ／Ⅰ的纯化样品，得率约为０．９ｍｇ／ｇ湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示一条蛋白质带，其分子量为１５ｋＤａ，与天然ＣＦＡ／Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明，纯化的重组克隆ＣＦＡ／Ⅰ与天然ＣＦＡ／Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了ＣＦＡ／Ⅰ的菌毛形态。

肠毒素性大肠杆菌疫苗研究现状

肠毒素性大肠杆菌（entertoxigenic escherichia coli，ETEC）是婴幼儿腹泻的主要病原菌。Wenneras等…估计每年全球5岁以下儿童因ETEC感染的病例高达2亿人次，ETEC也是到发展中国家旅游者腹泻的主要病原菌，30％～60％的旅游者腹泻由ETEC所致。一般认为ETEC属非侵袭菌，进入宿主体内后，由定居因子（colonization factor，CFs）黏附到小肠上皮细胞表面，

肠毒素大肠杆菌疫苗研究进展

肠毒素大肠杆菌是导致发展中国家婴幼儿及到这些国家旅游者腹泻的主要致病菌。致病机制是由ETEC表面的菌毛定居因子和肠毒素共同作用的结果。目前在研制和评价预防ETEC腹泻的候选菌苗方面已取得重大进展。本文对已研制的和正在研制的ETEC疫苗进行了概述 ,其中包括早期的亚单位疫苗、载体疫苗、减毒活菌苗、DNA疫苗和植物疫苗等。

肠毒素大肠杆菌CFA/1重组质粒的高效表达及其结构与功能分析

肠毒素大肠杆菌(ETEC)是婴幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。每年因 ETEC引起腹泻而死亡的婴幼儿多达百万人。ETEC 腹泻主要是由于细菌通过菌体表面定居因子定居于宿主小肠上皮细胞上,然后大量繁殖产生肠毒素而引起的。定居因子抗原1(CFA/1)是一种优势血清型菌毛,其相应抗体在阻止病原菌在宿主小肠上定居起十分重要的作用。CFA/1基因位于60MDa 的质粒上,在此质粒上有两个区域为 CFA/1表达和菌毛装配所必需。含有 CFA/1结构基因的区域称之 CFA/1-1区,含有调节基因的区域称之 CFA/1-2区。由于 CFA/1-1区和CFA/1—2区相距25MDa。

两株产肠毒素大肠杆菌减毒活疫苗在健康成年人中的安全性和免疫原性比较

产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是导致发展中国家婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌。研究表明，定居因子抗原（CFA）在致病过程中起重要作用，其中CFA／Ⅱ家族包含表面抗原（CS）1、CS2和CS3。能表达CFA／Ⅱ的无毒性自发突变株E1392／75-2A有较好的免疫原性，但致腹泻率为15％。