基于UPLC-Q-TOF-MS/MS法分析定心方Ⅳ号化学成分

目的检测定心方Ⅳ号水煎液中的主要化学成分,为其药理机制研究提供依据。方法应用超液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对定心方Ⅳ号的化学成分进行分析和鉴定。色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse-C 18(4.6 mm×100 mm,3.5μm),以0.1%甲酸和甲醇水溶液为流动相梯度洗脱,流速为0.5 mL/min。采用电喷雾(ESI)离子源,经正、负离子扫描模式搜集数据。结果经过文献检索与对照品对照,最终鉴定和推测出54个化合物,包括14个酚酸类化合物、10个生物碱类化合物、8个萜类化合物、6个苯丙醇类化合物、5个黄酮类化合物和11个其他类化合物。结论首次系统地分析了定心方Ⅳ号水煎液的化学成分,为定心方Ⅳ号的药效物质基础研究提供依据。

定心方Ⅳ上调ACE2减轻人脐静脉内皮细胞损伤机制

目的 研究由黄连、丹参、酸枣仁、灵芝组成的定心方Ⅳ(Dingxin Recipe Ⅳ,DXR Ⅳ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的作用机制。方法 正常培养HUVECs并随机分为5组,分别予以空白血清及定心方Ⅳ含药血清5%、10%、20%进行预处理4 h,再采用50μg·mL^(-1)ox-LDL诱导细胞损伤。采用CCK-8法观察HUVECs增殖情况;Western Blotting和q PCR法检测血管紧张素转换酶2(ACE2)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和E选择素(E-selectin)等蛋白和基因的表达;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素6(IL-6)水平。采用miR-421 mimics干预细胞,分别检测相关蛋白及基因表达情况。结果 定心方Ⅳ中剂量组可抑制IL-6分泌(P<0.01);同时,定心方Ⅳ可促进血管紧张素(1-7)、ACE2基因表达,抑制E-selectin、VCAM-1、MMP-9、ICAM-1、miR-421基因表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001);定心方Ⅳ可上调ACE2蛋白表达(P<0.05,P<0.01),高剂量组可抑制E-selectin、VCAM-1蛋白表达(P<0.05)。与模型组比较,过表达miR-421可降低ACE2蛋白和基因的表达(P<0.001),增加ICAM-1、MMP-9基因表达(P<0.05)。结论 定心方Ⅳ可能通过激活ACE2蛋白,抑制E-selection、VCAM-1和IL-6等炎性因子表达,起到保护内皮细胞的作用。