土壤环境因素对水稻纹枯病菌腐生定殖能力的影响

研究了土壤含菌量、温度、含水量和 p H值对水稻纹枯病菌在土壤中腐生定殖能力的影响。研究结果表明 :土壤含菌量越大 ,腐生后的定殖率越高 ,但未达到腐生处理前的水平 ;随着腐生温度的升高 ,定殖率逐渐下降 ,当腐生温度达到 4 0℃时 ,定殖率迅速下降到 8.0 % ;土壤含水量在 15 %时腐生能力最强、定殖率最高 ,达到 84 .0 % ,而在土壤含水量较大或较小时腐生定殖能力都不高 ;另外 ,该病菌喜好酸性的土壤环境 ,在 p H6 .0时腐生能力最强、定殖率最高 ,达到 85 .3%。

6种放线菌抗药性标记及其在植株体内定殖能力测定

用抗药性标记法对6种生防放线菌进行标记,并测定其在黄瓜、小麦、大麦以及大豆体内的定殖能力,发现15-3可以在黄瓜、小麦以及大麦的根部定殖,在黄瓜根部的定殖能力强于在其它两种作物根部的定殖能力。6种生防菌对黄瓜、小麦、大麦以及大豆种子萌发或苗期生长没有明显抑制作用;菌株15-3对大麦、黄瓜以及大豆具有不同程度的促生作用;菌株SE2和A4发酵液对黄瓜的生长有抑制作用。

棉花黄萎病拮抗细菌2-70(Bacillus subtilis)菌株定殖能力的研究

试验通过灭菌土和非灭菌土两种土样,试验前分别对这两种土样进行三种不同的处理,即:用拮抗菌芽孢液浸种,土壤全部混菌,部分混菌进行盆栽试验。主要通过盆栽试验,考察棉花黄萎病拮抗细菌2-70在土壤中的定植情况及在棉花根内和根际的定植情况。结果表明,在实验室条件下,拮抗细菌2-70能够在灭菌土和非灭菌土中定殖,且定殖数量达106cfu/g土左右,经过五个月后仍能保持较高的抑菌活性,并且菌株在灭菌土中的定殖数量高于非灭菌土中的数量。通过对棉苗根内细菌的回收,证实拮抗细菌2-70能在棉花根内定殖,数量达到103cfu/g。

铜绿假单胞菌株CR56在黄瓜和番茄根围的定殖能力

铜绿假单胞菌株 Pseudomonas aeruginosa CR56作为种子处理时 ,能有效地防治由腐霉 Pythiumspp.和茄丝核菌 Rhizoctonia solania引起的黄瓜和番茄的苗期猝倒病 ,利用该菌的抗利福平突变菌株CR56 R9和 lac ZY标记菌株 CR56 RL4 ,研究其在黄瓜和番茄根围的定殖能力、种群动态和在根区的分布 .研究表明 ,黄瓜根围比番茄根围更适合于该菌的定殖 ,其种群数量下降的幅度在番茄根围比在黄瓜根围更快 .播后 2 8d,菌株 CR56 R9和 CR56 RL4在黄瓜根围种群数量分别由 7.6 3× 10 7CFU/粒和4 .88× 10 7CFU/粒下降到 9.85× 10 6CFU/株和 8.87× 10 6CFU/株 ,在番茄根围则分别由 3.0× 10 7CFU/粒和 2 .13× 10 7CFU/粒下降到 4 .4 8× 10 5CFU/株和 4 .37× 10 5CFU/株 ;该菌主要分布在猝倒病的发生部位——根基部 ,在根尖处检测不到该菌的存在 .lac ZY标记菌株 CR56 RL4与抗利福平突变菌株 CR56 R9。

哈茨木霉Th-A和Th-B的存活力与定殖能力的测定

哈茨木霉Th-A和Th-B的孢子存活力受温度、贮藏期和调理剂的影响,并随时间的延长孢子的存活力明显下降。在室温条件下贮藏60d,Th-A和Th-B的孢子存活率分别达71 33%和73 33%,在4℃冷库里贮藏60d,两菌株孢子存活率分别达90 00%和92 67%.贮藏90d时,室温下Th-A和Th-B的孢子存活率分别为14 00%和18 00%,在冷库中孢子存活率为46 67%和32 67%.两个菌株与土壤调理剂混合时,在45d时,冷库中孢子存活率基本没有变化,但在室温下存活率很低,仅5 77%～57 14%,60d后,冷库和室温下存活率≤1%.2个菌株在马铃薯根围中定殖能力随着施用后的时间延长而下降,但在140d后,仍能检测到施入量的10%以上菌量,Th-A和Th-B比未施用木霉对照高出63 64倍和153 48倍。

一种初步判断细菌类微生物在土壤中定殖能力的方法

为了缩短功能微生物从筛选获得到生产利用的周期,研究一种简便的判断细菌类微生物在土壤中定殖能力的方法。基于功能菌株对21种抗生素的敏感性计算敏感值,利用盆栽试验检测功能菌株在土壤中的定殖能力,并分析敏感值与在土壤中定殖能力间的关系。结果表明,敏感值和功能菌株在土壤中的定殖能力呈负相关,当敏感值达到85时功能菌株在土壤中的定殖能力较差,通过功能菌株对21种抗生素的敏感值来初步判断其定殖能力具有可行性。

利用GFP标记研究秸秆还田对假单胞菌PW9土壤定殖能力的影响

【目的】本文利用GFP标记系统研究秸秆还田对假单胞菌PW9土壤定殖能力的影响。【方法】将可产生绿色荧光蛋白(GFP)的质粒pBBR1MCS2-Tac-EGFP电转化至假单胞菌PW9中,通过抗生素鉴定及质粒检测,获得了能够产生稳定的强烈绿色荧光且具有较高解磷能力的标记菌株PW9-gfp,并以此为试验菌株进行土壤定殖能力研究。【结果】标记菌株PW9-GFP施入土壤0~60 d时间内,两种处理方式的土壤样品中有效菌落数量均由109 CFU/g降至10 CFU/g;在植株同一生长时间时,标记菌株PW9-gfp单独施入的土壤样品中有效菌落数量均略低于与秸秆同时施入的土壤样品。【结论】秸秆还田对菌株PW9的土壤定殖能力具有一定的促进作用,其作用机理有待进一步研究,这一研究结果为解磷菌合理施用及微生物菌肥与秸秆还田协同作用深入研究奠定了一定的理论基础。

哈茨木霉强根际定殖能力菌株的筛选

用紫外线诱变哈茨木霉野生型菌株,经含多菌灵PDA培养基耐药性筛选,获得了耐药性菌株。用根际土壤木霉种群密度比较法对筛选的耐药性菌株和野生菌株进行根际定殖能力的比较测定,结果表明筛选的哈茨木霉耐药性菌株提高了根际定殖能力。在基本培养基上生长测定表明,由多菌灵诱变的耐药性菌株为营养缺陷型的突变体,对根际分泌物具有亲和性,只有聚居在植物根上才能生长得好。

两株植物内生放线菌在植株体内定殖能力的测定

用抗药性标记法对两株植物内生放线菌进行标记,并测定其在黄瓜、小麦、白菜以及番茄四种植物体内的定殖能力[1],发现在四种植物的茎中都检测到Fq24菌株的存在,在小麦、番茄根茎和黄瓜茎中发现有Lj20菌株。并且发现两种内生放线菌对四种植物种子的根、芽萌发有不同程度的促进或抑制作用,而只对番茄和小麦苗期的根茎生长有促进作用。

内生木霉P3.9菌株在枇杷根际土壤中的定殖能力测定

采用土壤稀释分离法与平板计数法测定内生木霉P3.9菌株在枇杷根际土壤中的种群密度,跟踪测试90 d内其在枇杷根际土壤中的定殖动态,结果表明,P3.9菌株在枇杷根际土壤中的定殖过程大致可划分为3个阶段,前25 d内,菌株相对含量以10 d为1个周期呈增减增减变化趋势,且于10 d时达到最大值,为9.52×10~5 CFU/g,该时期木霉P3.9菌株在根际土壤中快速适应并定殖存活;25~65 d期间,P3.9菌株相对含量的变化周期延长至20 d,也呈增减增减变化趋势,且波动幅度较5~25 d期间小,该时期木霉能够相对稳定地定殖存活于根际土壤中;65~90 d期间,P3.9菌株相对含量在65~75 d期间出现小幅度增加后呈近直线状下降态势;5~75 d期间,P3.9菌株相对含量维持在10~5 CFU/g水平上,且75 d时较接种量只下降1个数量级,说明木霉P3.9菌株在枇杷根际土壤中的持效期可达75 d。

甘蔗内生菌B9的鉴定及其促生长机制和定殖能力的研究

B9是一株分离于甘蔗品种“云蔗99-91”根部的内生菌,笔者对其种属鉴定与促生长机制开展研究,以期应用于甘蔗生产。试验通过传统方法与16S rRNA等看家基因片段测序对菌株进行分类鉴定;采用固体透明圈、酸性钼蓝比色法、火焰分光光度法、GFP荧光标记等方法测定与研究B9菌株固氮、溶磷、解钾、产IAA、嗜铁素等生物学活性及在甘蔗苗内的定殖情况;最后通过回接法研究菌液处理对玉米种子萌发与甘蔗幼苗生长发育的影响。结果表明B9菌属于芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),具有固氮、溶磷、解钾、产生IAA和嗜铁素的能力。用B9菌液处理后能提高玉米种子的发芽势与促进根芽组织生长,同时处理组甘蔗苗株在农艺性状与生理生化水平上明显优于无菌清水对照,并且发现B9菌能在甘蔗根茎叶内稳定定殖。本文鉴定了B9菌的种类和功能,阐明了B9菌的促生长机制和定殖能力,为开发生物菌肥并应用于生产提供理论依据。

艾草内生放线菌Ac10在植株体内定殖能力的测定

为研究艾草内生放线菌Ac10的选择性培养基及在植株内的定殖能力和对植物生长的影响,测定了Ac10对4种抗生素(萘啶酸、利福平、氨苄西林、链霉素)和5种杀菌剂(啶酰菌胺、啶菌噁唑、苯醚甲环唑、杀毒矾、多抗霉素)的抗性,筛选出标记Ac10的药剂及其浓度,并以加入相应浓度药剂的培养基为基础,测定Ac10在玉米、番茄、白菜和黄瓜4种植株体内的定殖能力及对这些植物胚轴和胚根生长的影响。结果表明:Ac10能在含500 mg/L多抗霉素和25 mg/L萘啶酸或50 mg/L氨苄西林的培养基上正常生长;Ac10在同一植株的根茎叶中定殖能力显著不同(由强到弱依次为根、茎、叶,P<0.05),在不同植株体内的定殖能力也显著不同(由高到低依次为玉米、番茄、白菜、黄瓜,P<0.05);Ac10对玉米、番茄、黄瓜胚轴和胚根的生长无促进作用(P>0.05),对白菜胚根的生长具促进作用(P<0.05)。可见,Ac10作为生防因子用于大田实践具有一定的可行性。

内生细菌B69定殖能力及其对人参根腐病防效研究

研究人参内生菌B69菌株在人参根、茎、叶及其根际土壤中的定殖规律,以及B69菌株对人参根腐病的防效,以期为新型人参根腐病生防制剂的开发提供理论依据。采用抗生素标记法,筛选出最佳标记菌株;采用盆栽和田间试验测定自然土与无菌土处理下B69菌株在人参植株内和根际土壤中的定殖能力。结果表明,标记菌株与未标记菌株在形态特征、拮抗能力、防病效果等方面无显著差异;B69菌株能够高效定殖在人参根部;B69菌株对人参根腐病有较好的防治效果,田间试验结果表明该菌处理后的病情指数为25.41,对根腐病的相对防效为58.56%。说明B69菌株是有防治人参根腐病潜力的生防菌。

木霉制剂在西瓜土壤中定殖能力及其对根际土壤微生物区系的影响

以连作8年的西瓜土壤为试材,采用盆栽试验方法,利用传统平板菌落计数法研究了施用4种木霉制剂后对西瓜根际的定殖能力,及其对根际土壤微生物区系和尖孢镰刀菌的影响。结果表明:施用4种木霉制剂后改变了西瓜根际土壤微生物种群数量,其中以Ty3制剂处理效果最为突出。施入42d时,与对照相比,西瓜根际土壤细菌和放线菌数量分别增加82.35%和295.23%;而真菌数量和尖孢镰刀菌数量减少24.29%和24.16%;定殖试验结果表明,Ty3制剂施入14d时,木霉在西瓜根际土壤中的定殖量最大,比对照增加14 077.08%,之后基本保持稳定,施入56d时仍比对照高出156.7倍。表明木霉制剂施用后可显著提高西瓜根际土壤中有益微生物数量,有效抑制尖孢镰刀菌数量的增长,减轻了连作障碍的根际微生态效应。

一株贝莱斯芽孢杆菌L21在薏苡植株体内的定殖研究

将含有抗生素的绿色荧光蛋白质粒标记在菌株L21(Bacillus velezensis)中,旨在深入研究内生细菌与薏苡植株的互作。采用自然转化法,将质粒pHT01-P43GFPmut3a转入薏苡内生菌L21中,获得了工程菌株L21-GFP,并测定了L21-GFP和L21的生长曲线、遗传稳定性、功能稳定性;用浇灌法将L21-GFP导入薏苡植株体内,并用荧光显微检测其定殖情况。结果表明:L21-GFP和L21的菌落形态、生长速度和拮抗活性之间无明显差异,均在培养8 h后从缓慢生长期进入对数生长期;pHT01-P43GFPmut3a能在L21中稳定遗传,转接40 h后的稳定性为63%;工程菌株L21-GFP能够稳定地定殖于薏苡植株体内,其中定殖于根部的菌体密度最大,达到106 cfu/g。由此可知,L21-GFP在薏苡体内定殖能力强且稳定,具有良好的应用前景。

多粘类芽孢杆菌HK18-8对辣椒炭疽病菌的抑制作用及其定殖能力

从健康的化香(Platycarya strobilacea Sieb. et Zucc.)根际土壤中分离获得生防菌HK18-8,为探究其对辣椒炭疽病的生防潜力,通过对峙培养和孢子萌发试验发现,HK18-8显著抑制短尖刺盘孢(Collectotrichum acutatum)的菌丝生长和分生孢子萌发,其抑菌带达到10mm,孢子萌发抑制率为70.15%;进行离体辣椒果实接种试验表明,HK18-8菌悬液对辣椒炭疽病的防治效果达到88.58%,其预防效果高于治疗效果,HK18-8的发酵液和菌悬液的防病效果显著;采用平板稀释法测定其在辣椒果实的定殖能力,处理9 d时仍能保持10~6 cfu·g^(-1)以上;根据形态特征、生理生化特性及16S rRNA序列同源性,HK18-8菌株鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)。

枯草芽胞杆菌XF-1的根围定殖能力分析

采用抗生素标记菌株与盆栽试验研究了对大白菜根肿病具有良好防治效果的枯草芽胞杆菌XF-1的定殖动态及影响其定殖的因素,以便了解该菌株的生防机制及其商品化应用前景。结果表明,XF-1的定殖能力较强,能在大白菜根围、根表和根内长时间定殖,接种60天后,根围和根表定殖密度仍能稳定在103CFU/g土壤,根内定殖密度也仍稳定在102CFU/g根(鲜重)水平,根围和根表定殖趋势为先下降后上升再下降,最后趋于稳定;根内定殖动态则呈先上升后下降的趋势。XF-1在根部组织内的皮层薄壁细胞和导管内均有分布。定殖受土壤质量影响,灭菌土中定殖能力最强;施入菌液浓度越高,定殖菌体数越多;在16℃光照培养箱中28天后,定殖仍可达到105CFU/g土壤;施入马铃薯汁蔗糖液体培养基(PS)发酵的菌液后,XF-1在根围中的定殖量大于施入马铃薯汁葡萄糖液体培养基(PD)发酵的菌液。XF-1还能很好地在玉米根围定殖。

绿针假单胞菌HL5-4对番茄灰霉菌的抑制活性及其定殖能力

为探讨绿针假单胞菌HL5-4对番茄灰霉病的生防潜力,通过对峙培养和孢子萌发试验测定其对灰葡萄孢菌的抑制活性;进行离体试验和苗期试验测定其对番茄灰霉病的防治效果;采用平板稀释法测定其在番茄果实和叶片的定殖能力;并根据形态特征、生理生化特性及16SrDNA序列同源性对其进行鉴定。结果表明:HL5-4显著抑制灰葡萄孢菌的菌丝生长和分生孢子萌发,萌发抑制率为70.74%;在离体试验中,对番茄果实和叶片灰霉病的防治效果分别达到72.36%和59.85%,在盆栽试验中,对番茄苗期灰霉病的防治效果为62.88%;HL5-4在番茄果实和叶片保持一定的定殖密度,处理7d时能保持10~4和10~3 cfu·g^(-1)以上;HL5-4菌株鉴定为绿针假单胞菌(Pseudomonas choloeaphtis)。

一株番茄青枯病生防菌的鉴定与防病、定殖能力

【目的】采用根系分泌物培养基筛选到一株番茄根际优势细菌YPP-9。本文分析测定该菌株对植物青枯病菌茄科雷尔氏菌的拮抗作用和控病能力,及其在番茄根际的定殖能力,并系统分析该菌株的分类学地位。【方法】以平板双重培养法和温室盆栽试验分别测定菌株对病原菌的拮抗能力和对番茄青枯病的控病能力;利用变性梯度凝胶电泳技术分析菌株在番茄根际的定殖能力;以形态学和生理生化特性以及16S rRNA基因序列分析确定菌株的分类地位。【结果】菌株YPP-9对茄科雷尔氏菌SSF-4的平板抑菌带宽为5mm,其盆栽控制番茄青枯病的效果达63.7%。菌株YPP-9在番茄根际具有较好的定殖能力。该菌株培养24h后菌落呈奶酪色,革兰氏染色阳性,菌体杆状、大小(1.8-4.1)μm×(0.9-1.1)μm,形成芽孢,芽孢中生或偏端生且为近似柱形,孢囊不膨大,无伴孢晶体,侧生鞭毛。菌株生长pH范围为pH5.5-8.5且最适生长pH为6.0,生长温度范围为20℃-45℃且最适生长温度为30℃。The BIOLOG GP2结果显示该菌为芽孢杆菌属。16SrRNA基因序列分析显示该菌株与Bacillus fumarioli的亲缘关系最近且序列相似性为97%,且其序列号为FJ231500。该菌株的G+C含量为41.9%,甲基萘醌主要类型为MK-7,细胞壁脂肪酸的主要种类为C14:0iso、C15:0iso和C16:0iso以及C16:1ω7 calcohol且含量分别为28.27%、19.59%、12.93%和10.88%。【结论】菌株YPP-9对茄科雷尔氏菌具有良好的拮抗作用和盆栽控病能力,且能良好的定殖于番茄根际。分类学上,该菌株归入芽胞杆菌属(Bacillus),并可能是一个新的种。

绛红褐链霉菌的根际定殖能力动态监测

腐皮镰刀菌(Fusarium solani)是铁核桃(Juglans sigllata Dode)根腐病的重要致病菌,绛红褐链霉菌YSSPG3(Streptomyces purpeofuscus)对其具有较强的拮抗作用。为了监测该生防菌在根际土壤中的定殖动态及在其作用下病原菌(F.solani)的动态变化,以盆栽铁核桃为研究对象,研究了S.purpeofuscus对接种F.solani植株的生防效果,并用实时荧光定量PCR技术分别对生防菌S.purpeofuscus和病原菌F.solani在铁核桃根际土壤中动态变化进行研究。结果表明,S.purpeofuscus对病原菌F.solani有较为明显的生防效果。监测结果表明:接种短期内S.purpeofuscus迅速生长繁殖,20 d其相对表达量达到最高值,随后呈下降趋势,40 d后趋于稳定;接种S.purpeofuscus后,F.solani的相对生长量显著下降,60 d时降低了11 500%,进一步表明S.purpeofuscus对F.solani生防效果显著,可以作为铁核桃根腐病的前景生防菌。