两段杨树叶绿体DNA片段的克隆及叶绿体定点转化载体的构建

利用PCR方法 ,从毛白杨 (PopulustomentosaC .)叶绿体基因组中克隆了 1.7kb和 1.6kb的相邻DNA片段 ,对其进行序列分析表明 ,扩增片段分别具有 176 6个和 16 0 1个核苷酸 ,前者包括 3’rps12 ,rps7基因的编码区及其边界序列 ,后者包含ndhB基因的第一外显子和内含子。本文还构建了杨树这两个片段的限制酶切图谱 ,并以这两个相邻片段为同源重组片段 ,分别将绿色荧光蛋白 (GFP)基因和苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白 (Bt)基因 ,及其原核表达框插入其间 ,构建了杨树叶绿体定点转化载体pPZG和 pPZB。这两个特异性载体将定位整合到杨树叶绿体基因组中反向重复区的rps7和ndhB基因的间隔区 ,并高效表达GFP和Bt基因。迄今为止 ,本文所报道的内容在国内。

粗糙脉孢菌BenR基因在哈茨木霉中的定点转化

以β_2-微管蛋白基因为定点整合位点,通过原生质体法将多菌灵抗性基因转化到哈茨木霉中,获得了具有多菌灵抗性的生物防治工程菌株.多菌灵抑制抗性转化子菌丝生长的EC_(50)值达471.26μg/mL,比哈茨木霉原菌株提高1 200倍以上;转化子对多菌灵的抗性具有遗传稳定性,且在无选择压力下菌丝生长速度及菌落形态与原菌株无显著差别;抑菌活性检测结果表明,3个转化子对立枯丝核菌均具有较强的抑菌活性,对菌丝生长的抑制率分别为87.5%、86.3%和85%.