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应用定量免疫印迹技术分析人类自身反应抗体库 被引量:1
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作者 党育平 张亮 武彩霞 《国外医学(免疫学分册)》 2002年第4期224-224,F003-F004,共3页
定量免疫印迹技术是近年来新兴的一门崭新技术 ,本文编译了应用该项技术分析人类自身抗体库所取得的一系列进展。研究发现 ,天然自身抗体仅与一组进化上保守的自身抗原反应 ,个体之间高度保守 ,并且天然自身抗体的选择需要正常T B细胞... 定量免疫印迹技术是近年来新兴的一门崭新技术 ,本文编译了应用该项技术分析人类自身抗体库所取得的一系列进展。研究发现 ,天然自身抗体仅与一组进化上保守的自身抗原反应 ,个体之间高度保守 ,并且天然自身抗体的选择需要正常T B细胞的相互作用 ,这种方法有可能用来区分器官特异性自身免疫疾病与免疫功能失调性自身免疫疾病。另外还观察到在一些自身免疫性疾病中 。 展开更多
关键词 定量免疫印迹技术 分析 自身反应抗体库 自身免疫
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大鼠大脑皮层损伤后N-甲基D-天门冬氨酸受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达研究
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作者 陈杰 朱丽君 +2 位作者 胡国庆 刘伟国 罗建红 《中国微侵袭神经外科杂志》 CAS 2003年第1期29-30,共2页
目的分析研究急性损伤后大鼠大脑皮层N-甲基D-天门冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR1,NR2A和NR2B的表达。方法建立开放式挫伤型机械脑损伤大鼠模型,采用NMDA受体的NR1,NR2A和NR2B3种亚单位的特异性抗体,对不同时间点的皮层组织3种亚单位蛋白作... 目的分析研究急性损伤后大鼠大脑皮层N-甲基D-天门冬氨酸受体(NMDA)亚单位NR1,NR2A和NR2B的表达。方法建立开放式挫伤型机械脑损伤大鼠模型,采用NMDA受体的NR1,NR2A和NR2B3种亚单位的特异性抗体,对不同时间点的皮层组织3种亚单位蛋白作定量免疫印迹分析。结果以健侧大脑皮层作为对照组,NR1亚单位在各时间点的含量保持基本稳定。NR2A的含量在3h内升高明显,至3h达到高峰,随后降至正常;NR2B在1h时略有上升后随即下降,至3h时最低,尔后又明显升高,于6h时达高峰,随后又恢复正常。结论大鼠脑皮层损伤NMDA受体NR2A和NR2B亚单位的表达发生了改变。 展开更多
关键词 大脑皮层损伤 N-甲基D-天门冬氨酸受体 NR1 NR2A NR2B 定量免疫印迹分析
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牛膝多肽促大鼠海马神经元突起的生长 被引量:4
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作者 袁颖 周松林 +1 位作者 顾晓松 丁斐 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期696-701,共6页
目的研究牛膝多肽(ABPP)对体外培养的大鼠海马神经元突起生长的促进作用及其对生长相关蛋-白43(GAP-43)和神经丝蛋白(NF-H)mRNA和蛋白表达的影响。方法以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测ABPP对海... 目的研究牛膝多肽(ABPP)对体外培养的大鼠海马神经元突起生长的促进作用及其对生长相关蛋-白43(GAP-43)和神经丝蛋白(NF-H)mRNA和蛋白表达的影响。方法以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测ABPP对海马神经元细胞活性的影响,通过免疫荧光细胞化学法,采用Image-Pro Express软件测量不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h,对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PCR法定量分析不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药6h,对海马神经元GAP-43和NF-H基因表达的影响;采用免疫印迹法观察不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43和NF-H蛋白表达的影响。同时应用胞外信号调节激酶(ERK)特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养海马神经元,分析ABPP对海马神经元的作用与ERK通路的关系。结果ABPP可有效地促进海马神经元突起的生长,加药后24h浓度为1.0mg/L,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和免疫印迹检测的结果表明,ABPP能增加体外培养的海马神经元GAP-43和NF-H的mRNA和蛋白表达,PD98059可抑制该过程。结论ABPP能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长,其作用与上调GAP-43和NF-H基因的表达相关,并可能与ERK通路有关。 展开更多
关键词 牛膝多肽 海马神经元 生长相关蛋白-43 神经丝蛋白-H 免疫荧光组织化学 实时荧光定量PCF免疫印迹 大鼠
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The quantitative expressions of lymphangiogenic factors and metastasis in human colorectal cancers 被引量:2
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作者 Jianyu He Yuanfang Lv 《The Chinese-German Journal of Clinical Oncology》 CAS 2011年第3期170-173,共4页
Objective: The purpose of this paper was to study the expression levels of newly described lymphatic endothelial markers – LYVE-1, Prox-1, podoplanin and 5’-nucleotidase, and their correlation with metastasis of hu... Objective: The purpose of this paper was to study the expression levels of newly described lymphatic endothelial markers – LYVE-1, Prox-1, podoplanin and 5’-nucleotidase, and their correlation with metastasis of human colorectal cancers. Methods: Tumor and corresponding tumor-side normal tissue samples were obtained from resected specimens immediately after operation. Expression level of each factor was determined by quantitative real-time PCR (RT-PCR) and Western blot technique. Results: Expression levels of lymphatic endothelial markers LYVE-1, Prox-1, podoplanin and 5’-nucleotidase were significantly different in tumor and tumor-side normal groups. Expression levels of Prox-1 and podoplanin were higher in patients with positive lymph node metastasis than those without metastasis. LYVE-1, but not 5’-nucleotidase expression level was higher in both cancer and normal groups. Conclusion: These results indicate that combined quantitative analysis of lymphangiogenic markers LYVE-1, Prox-1 and podoplanin in colorectal cancer specimens may be useful in predicting metastasis of colorectal cancer to regional lymph nodes. However, the role of 5’-nucleotidase in predicting metastasis of colorectal cancer still remains to be further analyzed. 展开更多
关键词 colorectal cancer lymphatic endothelial markers quantitative real-time PCR (RT-PCR)
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白斑综合征病毒(WSSV)基因VP28原核表达与检测 被引量:1
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作者 张正阳 张春莉 +3 位作者 施定基 贾晓会 贾睿 何培民 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期183-188,共6页
VP28是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的囊膜蛋白。将VP28基因序列密码子优化后合成,经限制性内切酶NdeⅠ、XhoⅠ酶切后,按正确的阅读框顺序插入到p ET-28a(+)表达载体上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经质粒... VP28是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的囊膜蛋白。将VP28基因序列密码子优化后合成,经限制性内切酶NdeⅠ、XhoⅠ酶切后,按正确的阅读框顺序插入到p ET-28a(+)表达载体上。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经质粒双酶切、测序鉴定后成功地构建了VP28基因原核表达载体p ET-28a-VP28。转化菌经IPTG诱导,SDS-PAGE显示含有与预期大小一致的约30 ku蛋白带,主要以包涵体形式表达。采用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,获得了纯度为95%的大肠杆菌重组蛋白VP28。该纯化蛋白作为绝对定量Western的标准品,梯度稀释建立标准曲线,以定量检测转基因鱼腥藻7120中的VP28绝对表达量。实验结果表明,大肠杆菌BL21(DE3)表达的重组蛋白VP28与鱼腥藻7120中表达的VP28分子量基本相同,纯化后的大肠杆菌重组蛋白梯度稀释作为绝对定量Western标准曲线,计算出转基因鱼腥藻7120在培养第17天时,VP28的表达量最大,为5.14μg/m L,占转基因鱼腥藻7120总蛋白浓度的1.45%。这不仅对转基因鱼腥藻的高效培养具有重要意义,也为日后确定投喂对虾口服疫苗有效剂量防治白斑综合征奠定了基础。 展开更多
关键词 对虾 白斑综合征病毒(WSSV) VP28 大肠杆菌 鱼腥藻7120 定量免疫印迹
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HIF-1α在人舌鳞癌组织中的表达及意义 被引量:1
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作者 刘黎 王稚英 《社区医学杂志》 2009年第5期10-11,共2页
目的研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在舌鳞癌组织、癌旁正常舌组织中表达状况及与舌癌进展之间的关系。方法采用半定量免疫印迹法(Western blot)检测40例舌鳞癌组织和癌旁正常舌组织中HIF-1α的表达。结果HIF-1α在舌癌组织中的表达水... 目的研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在舌鳞癌组织、癌旁正常舌组织中表达状况及与舌癌进展之间的关系。方法采用半定量免疫印迹法(Western blot)检测40例舌鳞癌组织和癌旁正常舌组织中HIF-1α的表达。结果HIF-1α在舌癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织中的表达水平(P<0.05)。HIF-1α表达与舌癌的临床TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、组织学类型无关(P>0.05)。结论HIF-1α在舌癌的进展中具有重要作用,与疾病发展进程密切相关。 展开更多
关键词 舌鳞癌 缺氧诱导因子-1Α 定量免疫印迹
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