微板核酸杂交技术定量检测乙肝病毒的临床应用

目的 用微板核酸杂交技术准确定量检测患者血清乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)的含量 ,探讨其临床应用价值。方法 用聚合酶链反应 (PCR)法将患者血标本扩增后的产物 ,通过微孔板杂交显色对 5 4 0例不同临床表现的乙型肝炎患者血清中HBV DNA进行定量检测。结果 急性乙肝患者血清中HBV DNA含量为 (174 96± 5 0 2 0 ) μg/L ,乙肝病毒长期携带者血清中HBV DNA含量为(94 32± 4 1 31) μg/L ,乙肝恢复期患者血清中HBV DNA含量为 (39 6 2± 2 4 5 1) μg/L ,乙肝疫苗免疫组的HBV DNA含量 <1μg/L ,各组之间比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 微板核酸杂交技术—酶联免疫吸附试验检测方法能准确、快速进行HBV DNA定量 ,与临床诊断相符 ,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效观察有指导意义。

定量微板核酸杂交检测乙型肝炎患者血清中HBVDNA及其临床意义

采用定量微板核酸杂交技术检测448例肝病患者血清中HBVDNA含量.结果显示:其阳性率和病毒含量HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)组>HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组>抗-HBs(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组(P<0.05,P<0.01).血清HBVDNA含量与黄疸程度及转氨酶的高低无关.血清HBVDNA含量高低,阳性率大小与临床型的严重程度呈一定的相关性,从而指导临床诊断和治疗.

微板核酸杂交-ELISA方法对肝炎病人血清中HBV DNA的定量检测与分析

目的采用微板核酸杂交-ELISA技术测定肝炎病人血清中HBVDNA含量。方法用PCR法将病人血清标本扩增后，与两条特异性探针夹心杂交，然后通过酶联显色对69例不同临床表现的肝炎患者血清中HBVDNA进行定量检测。结果20例急性重型肝炎血清中的DNA含量超过2μg/L，88.24％的急性轻型肝炎患者和54.55％轻度慢性肝炎患者血清中的HBVDNA含量少于2μg/L,66.67％中度慢性肝炎患者血清HBVDNA含量在2-1000μg/L的范围，75％重度慢性肝炎和45％急性重型肝炎血清中的HBVDNA含量超过1000μg／L。结论做饭核酸杂交-ELISA检测方法能准确、快速进行核酸定量测定，特异性强，灵敏度高，稳定可靠，易自动化，对于研究病毒感染量与临床病程的关系具有较大的现实意义。

用微板核酸杂交-ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况

目的 :用微板核酸杂交 -ELISA技术检测皖北地区不同人群输血传播性病毒 (TTV )感染。方法 :用PCR法将患者血清标本中的TTVDNA扩增后 ,与两条特异性探针夹心杂交 ,通过酶联显色检测血清标本中的TTVDNA ,并进行分型。结果 :TTVDNA在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为 3 3 %、16 7%和 13 5 % ,前者与后两者差异显著 (P <0 0 5 )。 14例非甲非戊型 (NA -NE)肝炎的TTVDNA阳性率为 14 3 %。本地区流行的TTV可分为两个主要的基因型 ,其中 6 6 7%为Ⅰ型 ,2 5 %为Ⅱ型 ,8 3 %为混合感染。结论 :安徽省皖北地区流行的TTV基因型以Ⅰ型为主 ,一般人群、血透患者和肝病患者中均存在TTV感染 ,后两者为TTV感染的高危人群。TTV不是本地区NA -NE肝炎的主要病因。

用微板核酸杂交—ELISA技术检测不同人群TTV感染状况

目的 用微板核酸杂交—ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况。方法 用PCR法将病人血清标本中的TTV DNA扩增后,与两条特异性探针夹心杂交,通过酶联显色检测血清标本中的TTV DNA并进行分型。结果 TTV DNA在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为3.3％、16.7％和13.5％,前者与后两者比较差异均有显著性(P<0.05)。14例NA～NE肝炎的TTV DNA阳性率为14.3％。本地区流行的TTV可分为两个主要基因型,其中以Ⅰ型为主(66.7％),Ⅱ型次之(25％),少部分存在混合感染(8.3％)。结论 安徽省皖北地区一般人群、血透患者和肝病患者中均存在TTV感染,后两者为TTV感染的高危人群。TTV不是本地区NA～NE肝炎的主要病因。安徽省皖北地区流行的TTV的基因型以Ⅰ为主。

微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交 ELISA技术对HCVRNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术 ,首先将HCVRNA进行RT PCR扩增 ,并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的微孔板 ,再加入HCV各基因型显色探针 ,同时进行微板核酸杂交 ELISA显色 ,对江西地区 12 9例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为 1b、2a、2b、3a、3b、6a、1a/2a、1b/2a、1b/3a、1b/6a、3a/5a、2a/3a共 12种单一基因型和混合基因型 ,其中以 1b基因型为主 ,占 5 0 .39%;慢性丙肝患者的基因型较为复杂 ,存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以 1b基因型为主。PCR微板核酸杂交 ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型 ,在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。

用微板核酸杂交-ELISA技术检测皖北地区不同人群TTV感染情况

目的：用微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术检测皖北地区不同人群ＴＴＶ感染情况。方法：用ＰＣＲ法将 患者血清标本中的 ＴＴＶ ＤＮＡ扩增后，与两条特异性探针夹心杂交，通过酶联显色检测血清标本中的ＴＴＶ ＤＮＡ，进行分型并与套式ＰＣＲ方法比较。结果：ＴＴＶ在学生、血透患者、肝病患者中的阳性率分别为３．３％， １６．７％和１３．５％，前者与后两者比较差异均有显著意义（Ｐ＜０．０５）；１４例非甲－非戊（ＮＡ－ＮＥ）肝炎的ＴＴＶ阳性 率为１４．３％。本地区流行的ＴＴＶ可分为两个主要的基因型，即Ｉ型（６６．７％）、Ⅱ型（２５％），并存在混合感染 （８．３％）。微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ与套式ＰＣＲ方法的相符率为９８．ｌ％（２０５／２０９）． 结论：本地区一般人群、血透 和肝病患者中存在ＴＴＶ感染，后两者为感染的高危人群，ＴＴＶ的基因型以Ｉ型为主。ＴＴＶ不是本地 ＮＡ－ＮＥ肝 炎的主要病因。微板核酸杂交－ＥＬＩＳＡ技术具有灵敏性高、操作简单、易自动化的特点。

PCR-微孔板核酸杂交技术检测肺炎衣原体研究

建立一种新的PCR ELISA技术模式 ,简便、特异、敏感地检测肺炎衣原体 ,为肺炎衣原体的检测提供一种有效的新方法。采用链霉亲和素包被于聚乙烯微孔板 ,生物素标记的引物扩增目的DNA片段与荧光素标记的探针在微孔板内进行分子杂交 ,抗荧光素标记的辣根过氧化物酶可以与之结合 ,再加入底物即可产生颜色反应 ,通过测定其吸光度来进行结果判断。新建立的PCR ELISA方法与其它相关的六种病原体无交叉反应 ,临床标本检测检出率高 ,呼吸道感染者标本 42份检出率达 2 1 95 % ,肺炎患者标本 465份检出率为 42 1 5 % ,比套式PCR方法及其它检测方法的检出率都高。应用新建立的PCR ELISA方法检测肺炎衣原体特异、敏感 ,结果客观、稳定、可靠 ,对肺炎衣原体引起的疾病的诊断有十分重要的意义。

聚合酶链反应—微孔板杂交技术检测人乳头瘤病毒

目的 建立HPV诊断及分型技术。方法 用HPV通用型引物和型特异性探针作PCR 微孔板杂交检测法(PCR ELISA)。结果 特异性探针只与HPV阳性标本显色 ,A值为 0 32 7± 0 0 2 9;阴性标本均不显色 ,A值为 0 0 0 3± 0 0 0 1,与性传播性疾病相关的病原微生物 (淋球菌、解脲支原体、沙眼衣原体、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒 )均不显色。该法能检出 3 6个HeLa细胞含HPV 18型 144个拷贝 ,A值 0 2 37～ 0 2 0 6 ;空白对照A值为 0 0 0 5～ 0 0 15。结论 PCR ELISA方法快速、敏感、特异且可用自动化酶标仪多量标本检测 ,适合临床实验使用。

PCR-ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA

目的 采用PCR ELISA微孔板杂交技术检测结核杆菌DNA。方法 采用PCR技术扩增结核杆菌DNA ,并将扩增产物加入预先包被结核杆菌探针的微孔板 ,再加入结核杆菌显色探针 ,同时进行微孔板核酸夹心杂交ELISA显色。共检测肺部疾病患者痰标本 5 10例。结果 该法的灵敏度为 5 9.3% ,特异性为 95 .0 % ;阳性预测值为 96 .3% ,阴性预测值为 5 1.4 %。结论 PCR ELISA微孔板杂交技术可快速、准确地检测结核杆菌DNA ,是结核病早期诊断和鉴别诊断的可靠实验室方法。

多种PCR-微孔板核酸杂交法同时检测三种病原体DNA的临床应用

目的 :应用一种同时检测沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌三种病原体DNA的方法对临床标本进行检测。方法 :采用多重PCR 核酸探针杂交技术 ,对泌尿生殖系统传播疾病 (STD)有症状者分泌物 ,用同一份处理标本与常规PCR法比较。结果 :检测 186分标本 ,沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌检出率分别为 2 4 1%、5 0 0 %和2 9 0 % ,并有 2 5 2 %的双重感染和 6 6 %的三重复合感染。结论 :本法快捷、简便、特异性好 。

微板酶联夹心杂交法定量检测人IL-18 mRNA

目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,定量检测人IL 18mRNA。方法 :针对人IL 18mRNART PCR产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端为氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,“竖直”地包被在微孔板内 ;另一条为检测探针 ,3’端标记生物素。提取人外周血单个核细胞中总RNA ,进行RT PCR扩增IL 18mRNA ,产物热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交 ,再加入检测探针与已杂交的产物结合 ,最后经亲和素 辣根过氧化物酶 (SAV HRP)系统检测杂交信号。结果 :该法检测IL 18mRNART PCR产物的灵敏度明显高于琼脂糖凝胶电泳 ,重复性良好 ,且结果数据化。结论 :该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点 ,适合于PCR扩增产物的定量检测。

微板核酸杂交-酶联显色检测性病沙眼衣原体DNA

目的 建立微板核酸杂交-ELISA方法,检测性病沙眼衣原体。方法 采用PCR、核酸杂交和ELISA三大生物技术相结合,建立微板核酸杂交ELISA法,并用此法分别同McCoy细胞培养和免疫学方法检测307份性传播疾病标本进行比较。结果 微板核酸杂交-ELISA法检测的阳性率为40.39％(122/307),高于细胞培养的9.77％(30/307)和免疫诊断的12.05％(37/307)。结论 微板核酸杂交-ELISA技术检测性病沙眼衣原体灵敏度高、特异性好、简便快速。因此,该方法具有很强的实用价值和发展前景。

用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应扩增产物

用微孔板杂交技术检测聚合酶链反应(PCR)扩增产物是将PCR技术和类似ELISA的技术结合起来的一种方法,它使PCR的敏感性提高100倍,通过探针杂交使其更具特异性,并可通过酶联检测系统使结果客观化,同时又具有简便、快速的特点,在基础和临床应用上前景看好。

微板核酸杂交检测芽孢杆菌属的方法建立

以白酒发酵过程中的优势菌枯草芽孢杆菌为模式菌株,针对具有高保守性及特异性的16SrRNA设计一组核酸探针,建立了对芽孢杆菌属进行定性和定量分析的新型的微板核酸杂交检测方法,优化了关键检测条件。结果表明,当S1酶反应温度为42℃时,芽孢杆菌属检测探针能分开目标序列仅差一个碱基的近缘属。当捕获探针和信号探针工作浓度均为5nmol/L,与分析探针杂交温度都为50℃,杂交时间分别为60min和15min时,检测信号的强弱与细菌数呈良好的线性关系,能实现定量检测,灵敏度高达1.33×102cells/mL。本方法提供了一个快速定性定量的检测技术,具有很好的应用于白酒发酵过程中芽孢杆菌属实时监测的潜力。