呕吐毒素和玉米赤霉烯酮二合一时间分辨荧光定量快速检测卡的研发和优化

成功研发及优化一种基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素二合一荧光定量快速检测卡(简称DZ检测卡),同种样本仅需一次提取检测,8 min内即可得到两个项目的检测结果,快速、简单易操作。本项目成功优化了基于时间分辨纳米微球的呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素二合一荧光定量快速检测卡的制备工艺,玉米赤霉烯酮(简称ZEN)的均一性差、呕吐毒素(简称DON)的灵敏度低、C线波动大、样本前处理等问题。通过对时间分辨荧光微球不同粒径标记抗体,确定了DZ检测卡中DON胶乳所用的荧光微球为298 nm,解决了DON灵敏度低的问题;通过对喷膜稀释倍数的优化,确定了胶乳的稀释倍数,解决了ZEN均一性差的问题;通过对划膜位置的筛选,确定了ZEN、DON、C线的划膜位置NC膜距样品垫的距离依次为T1(14 mm)、T2(10 mm)、C(6mm);通过对划膜液体系的优化,确定C线划膜液为10 mM NMS+2%蔗糖,解决了C线值波动大的问题;通过对样本前处理提取液的优化,确定了提取液为50%乙醇+2%NaCl,检测ZEN的准确度在95.83%~116.71%,检测DON的准确度在96.53%~110.36%。玉米、小麦样本的检测可用一条标准曲线。

黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一时间分辨荧光定量快速检测卡的优化

改进了一种基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一荧光定量快速检测卡,一次提取,一次检测,8 min内即可得到三个项目的检测结果,快速、简易、省时省力。本项目成功优化了黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一荧光定量快速检测卡的时间分辨纳米微球的整个制备工艺,解决了玉米赤霉烯酮(简称ZEN)的灵敏度低、黄曲霉毒素B1(简称AFB1)的均一性差、样本检测C线线条扩散等等问题。通过对微球制备工艺、微球表面修饰不同数量碳原子手臂,确认了ADZ检测卡中ZEN胶乳所用的荧光微球,即南京微测生物的200原子手臂的时间分辨荧光微球,解决了ZEN灵敏度低的问题;通过对样品垫的选择、样品垫缓冲液配方的优化,确认了样品垫工艺,即用上海捷宁生物的G-6玻纤垫,并处理样品垫缓冲液配方3,解决了AFB1的均一性差问题;通过对抗原稀释液的优化,确认了用50 mM PBS+5%蔗糖划膜液,解决了样本C线线条扩散问题。

基于胶体金试纸条定量快速检测系统的粮食中重金属铅检测和验证

本研究结合胶体金快速定量法,研发了重金属离子铅快速检测及监测分析系统。通过全国11家检验检测机构利用该系统测定粮食中铅,证明其适用于大米、糙米、玉米、小麦等粮食中铅的快速定量检测,对结果进行统计分析,验证方法的重复性和再现性。测定大米/糙米中重金属铅的检出限为12.36μg/kg,定量限为35.38μg/kg;测定小麦中重金属铅的检出限为11.89μg/kg,定量限为35.28μg/kg;测定玉米中重金属铅的检出限为12.26μg/kg,定量限为36.34μg/kg。其能够满足国标检测要求。通过对不同粮食中重金属铅进行实验室协作测试,重复性的变异系数小于10%,再现性变异系数小于15%,说明该系统可以实现粮食中重金属铅的检测。

高灵敏度玉米赤霉烯酮时间分辨荧光快速定量检测卡的研发和应用

成功研发了一种灵敏度高、准确度好、快速、简易的双T线的玉米赤霉烯酮(ZEN)时间分辨荧光快速定量检测卡。通过对比ZEN检测卡检测线数量(单T线、双T线)的灵敏度,主要利用双T线的增补作用优势抬高灵敏度。对比了独立C线、非独立C线体系工艺,利用非独立C线工艺,C值与T值呈现负相关来提高灵敏度。筛选出羊抗鼠-自身鼠抗非独立C线工艺,在其基础上进一步筛选标记抗体量(5、10、20、30μg/mL),选择标记抗体量10μg/mL效价25429,10~500μg/kg抑制率33.57%~98.30%,灵敏度、效价最佳。用液相色谱与玉米赤霉烯酮(ZEN)时间分辨荧光快速定量检测卡同时检测不同基质的样本,两者的符合度很高,准确度在90.89%~119.33%,浓度CV6.18%。研究表明,用荧光层析检测卡检测粮食谷物中玉米赤霉烯酮的分析方法稳定性好,货架期符合要求,可测范围宽,具有很好的应用前景。

基于时间分辨荧光快速定量检测谷物中的T-2毒素

研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的T-2毒素快速定量检测卡,并对其在谷物中的检测性能进行了研究。本研究对标记工艺、划线工艺进行了探索,通过对微球偶联时间、封闭时间等优化,确认了最佳偶联时间为30 min,最佳封闭时间为60 min;通过对NC膜的筛选、划线湿度的摸索,确认了最佳NC膜为140膜,最佳划线湿度为45%~55%。同时,对该T-2毒素快速定量检测卡进行了性能验证:该检测卡的检测限为0.480μg/kg,定量限为1.020μg/kg,添加回收定量范围为1~100μg/kg,准确度86.09%~119.57%,重复性在11.95%以内,交叉反应率<5%。具有快速定量、简单便捷、高灵敏度、高特异性、可靠性强、重复性好等优点,适合对谷物中T-2毒素进行快速定量测定。

农产品混合样品中农药残留的快速筛选定量检测方法

为提高农产品的检测效率,本文首次提出了农产品混合样品中农药残留快速筛选定量检测方法的概念和技术条件,同时提出了基于超高效液相色谱-串联质谱的农产品混合样品中108种农药残留快速筛选定量检测方法。本文依据色素含量进行分类制备混合样品开展筛选检测,结果显示,样品前处理中氮吹复溶溶剂丙酮-水-甲醇选择2∶3∶5 (体积比)的配比最为适合;108种农药化合物的定量限在0.5~5.0μg/kg之间,全部低于GB 2763-2021 《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》规定的各农药最大残留限量,满足检测要求;方法的线性范围为0~20.0μg/L,相关系数大于0.990。低浓度0.5~5.0μg/kg的加标水平下108种农药化合物的回收率在60%~120%范围内,中浓度10.0μg/kg、高浓度20.0μg/kg的加标水平下其回收率在80%~110%范围内,低浓度和中高浓度加标水平下变异系数分别≤20%和<11%,上述指标完全符合GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范食品理化检测》对检测方法回收率和精密度的要求。本文选择的108种农药有广泛代表性和针对性,因此在实际检测工作中本方法有很强的应用价值。

气相色谱法快速定量检测丙烯腈的生物催化产物

利用微生物催化丙烯腈生产丙烯酰胺在工业上已经得到了广泛的应用。生产中反应液同时含有底物丙烯腈、产物丙烯酰胺以及副产物丙烯酸。为了控制产品质量,需快速定量检测反应液中各组分。采用毛细管柱PEG-20M(30 m×0.25 mm i.d.,2μm),以20 g/L的乙酰胺作为内标物对反应液进行气相色谱分析,优化分析条件为:进样口为SPL,温度260℃;FID检测器,温度260℃;柱温190℃;载气为氮气,流速25 cm/min;分流进样,进样量0.4μL,分流比为50∶1。在4 min内,3个组分得到完全分离,该方法具有良好的重现性和线性关系,回收率分别为98.5%、102.1%、105.0%,相对标准偏差分别为9.1%、5.3%、1.7%。该方法分析速度快,适合实验室与工厂生产中大量快速定量检测样品。

建立快速定量检测猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR技术

在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样品的变异系数为2.3%-5.1%(n=10),疫苗样品组内实验变异系数为0.85%-2.8%(n=5)、组间实验为2.5%-7.3%(n=5),对同一样品分5次RNA提取和逆转录,其变异系数为5.0%;对9份疫苗样品进行了检测,与兔体定型热反应方法相比较,有很好的相关性;整个检测过程仅需4h。该法可望取代传统的兔体定型热反应用于疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。

基于上转换发光技术的尿液中吗啡及甲基苯丙胺快速定量检测方法研究

目的利用上转换发光免疫层析技术（UPT-LF）建立一种尿液中吗啡（MOP）及甲基苯丙胺（MET）快速定量检测方法并对其进行系统评价。方法以上转换发光纳米颗粒（UCP-NPs）作为生物示踪物,竞争模式免疫层析作为检测平台,建立可对尿液中MOP及MET进行定量检测的UPT-LF,即MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF。以MOP-UPT-LF为代表,评价UPT-LF对痕量毒品检测极限,通过系列浓度标准品测定,评价定量检测能力。根据常规检测阈值,调整MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF检测敏感性及线性范围,并评价其定量检测能力。以LC-MS、GC-MS分别作为MOP、MET检测的金标准,以胶体金免疫层析作为对照,对执法现场收集尿样进行检测,确定UPT-LF定性检测性能。对系列浓度MOP模拟阳性样本同时进行LC-MS及MOP-UPT-LF定量检测,对系列浓度MET模拟阳性样本同时进行GC-MS及MET-UPT-LF定量检测,评价UPT-LF定量检测性能。结果在痕量检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性可达1ng/m L,线性范围为1~5000ng/m L（r=-0.98172,P〈0.0005）。在常规检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性为50ng/m L,线性范围调整为50~3000ng/m L（r=-0.98464,P〈0.0005）;MET-UPT-LF敏感性为100ng/m L,线性范围为100~5000ng/m L（r=-0.99964,P〈0.0005）。就定性检测而言,MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF均较优,灵敏度及特异度均为100%,与胶体金结果一致。就定量检测而言MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF与定量确证方法LC-MS及GC-MS无显著差异。结论本研究建立MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF方法,在满足快筛试剂快速简便的基础上,进一步实现了现场快速定量检测,为尿液中毒品的现场快速定量检测提供了技术保障。

快速定量检测CA72-4的超顺磁性免疫层析试纸条的研制

目的:建立一种简单、实用的磁性免疫层析试纸条来检测人血清中糖链抗原72-4(CA72-4)水平。方法:采用水热合成法制备羧基化水溶性纳米磁珠,利用EDC/NHS偶联技术制备纳米磁珠探针,优化并组装试纸条,对其灵敏度、特异度及稳定性进行测试及评价。结果:构建的试纸条不仅能提供定性的检测结果,还可以通过稳定的磁信号进行高灵敏度的定量分析,定量检测限值为0.83 IU/m L。检测100例临床血清样本,结果与电化学发光法一致性较高,其灵敏度为99%,特异度为93%,差异具有统计学意义。试纸条及磁信号强度稳定性良好。结论:初步实现了利用免疫层析试纸条快速定量检测CA72-4,且检测灵敏度高、特异性好,试纸条及磁信号强度稳定性良好。检测过程简单、快速,适合大样本的初筛或者作为胃癌患者进行病情监测的自检测手段。

禽白血病病毒抗原高敏荧光微球快速定量检测方法的建立

为建立快速定量检测家禽样本中禽白血病病毒抗原的方法,对禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体细胞株2E5和3D5进行复苏、鉴定,通过反应条件优化,建立了禽白血病病毒抗原高敏荧光微球快速检测方法。该方法能够快速定量检测家禽样本中禽白血病病毒,敏感性高、特异性强,对其他家禽病原无交叉反应且具有良好的检测重复性。对采自全国的240份临床家禽样品进行检测,同时用美国IDEXX公司生产的ELISA抗原试剂盒开展比较,结果发现两种方法符合率达93.98%,其中阳性样品符合率为90.83%,阴性样品符合率为95.83%;组内与组间变异系数分别低于10%和15%。本研究建立的禽白血病病毒p27抗原高敏荧光微球快速检测方法,特异性高、敏感性强,操作简单、快速,具有较高的应用推广价值。

钻井液中可溶性硫化物快速定量检测方法研究

针对目前碘量法、快速测定管法等可溶性硫化物定量测定方法存在操作程序复杂、耗时长等问题,不利于现场钻井液中可溶性硫化物快速测定。因此,室内开展了电位滴定法测试原理分析,并针对硫化物标准溶液、干扰离子存在条件下的硫化物标准溶液以及钻井液滤液存在条件下的硫化物标准溶液开展了电位滴定法测试实验。测试结果表明:本法不受测试样品色度、浊度影响,操作简单且耗时短,测定结果误差绝对值小于5%,满足现场快速定量测定要求。

D-二聚体单克隆抗体制备及其在免疫荧光快速定量检测中的应用

D-二聚体（D．dimer，D．D）是纤维蛋白单体经活化因子XIII作用后形成的交联纤维蛋白凝块，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，医学应用上将它作为一个特异性的纤溶过程标记物，反映纤维蛋白溶解功能。与纤维蛋白破坏有关的疾病，如深静脉血栓形成（DVT）、肺栓塞（PE）和弥漫性血管内凝血（DIC）等，均可导致体内D—D水平升高。近年来D．D的临床应用范围越来越广，除了以上提及的疾病外，在恶性肿瘤、糖尿病、肝脏疾病。

免疫层析法快速定量检测植物油中玉米赤霉烯酮

建立了免疫层析法快速定量检测植物油中玉米赤霉烯酮的分析方法。方法的检出限为10μg/kg,相对标准偏差低于14.6%,回收率为79.6%~92.9%。该方法简便快速、灵敏准确、重现性好,可以用于对植物油中玉米赤霉烯酮进行快速定量筛查检测。

掺假芝麻香油的快速定量检测

目前,芝麻香油掺假的现象日趋严重,亟需建立一种能适用于现场测定的快速检验方法。本文选取了浓硫酸显色法、蔗糖盐酸显色法及糠醛显色法三种方法进行对比。结果发现,浓硫酸显色法不需要任何特殊试剂和设备,快速可行,但准确度不高;蔗糖盐酸显色法准确度有所提高,但由于显色反应颜色不稳定,使得该方法仍具有一定的局限性;糠醛显色法可操作性强,准确度高。具体应用中,根据实际需求选择适宜的检测方法。

尿碘快速定量检测试剂在基层卫生机构推广应用研究

目的:研究在农村基层卫生机构应用尿碘快速定量检测试剂的可行性。方法:在吉林省蛟河市计划生育服务站应用尿碘快速定量检测试剂对90例小学生进行尿碘检测。结果:尿碘中位数为163μg/L,碘摄入适宜,碘营养理想,与地方病监测结果相符。结论:尿碘快速定量检测试剂适宜在基层卫生机构应用。

胶体金免疫层析法快速定量检测玉米中黄曲霉毒素

建立了胶体金免疫层析法快速定量检测玉米中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量的分析方法。方法的检出限为1.0μg/kg,定量限为3.0μg/kg,相对标准偏差低于18.1%,回收率为82.4%~95.8%。该方法简便快速、灵敏准确、重现性好,可以用于对玉米中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2总量进行快速定量筛查检测。

荧光原位杂交和流式细胞术结合(FISH-FCM)对肉食品中肠杆菌科细菌的快速定量检测

为建立一种新的荧光原位杂交与流式细胞术相结合(FISH-FCM)的方法,以快速鉴定肉食品中的肠杆菌科细菌,采用与肠杆菌科细菌16S rRNA保守序列互补的探针Enter1432并验证其特异性。结果表明:6种肠杆科细菌与探针Enter1432杂交率均在90%以上,而5种非肠杆菌科细菌与探针杂交率均低于1%;与SN/T 0738—1997《出口食品中肠杆菌科检验方法》传统培养法相比,FISH-FCM定量检测法全程约需4~5 h,检测8份猪肉样品中肠杆菌科细菌数为1.4万~640万个/g,4份鸡肉样品中肠杆菌科细菌数为5.0万~21万个/g,检出率为100%。综上所述,研究建立的FISH-FCM法可快速检测肉品中的肠杆菌科细菌,适于食品卫生、临床实验室推广使用。

基于时间分辨荧光纳米微球的玉米赤霉烯酮快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的玉米赤霉烯酮快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该产品的最低检出限LOD为3.65μg/kg,最低定量限LOQ为8.51μg/kg,线性范围为10.00~1 000.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为94.00%~118.33%,3次重复的变异系数在13.11%以内。与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对玉米赤霉烯酮的分析标准的技术要求,且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,可用于不同粮食谷物饲料中玉米赤霉烯酮的快速定量检测分析。

基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该试纸条的检出限为25μg/kg,最低定量限为82μg/kg,线性范围为100~5 000μg/kg,线性范围内的添加回收率为83.51%~113.84%,同一个样本检测3次的CV<14.75%,与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%,与其代谢物的交叉反应率在20%以内。具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点,适合对粮食谷物饲料中呕吐毒素进行快速定量测定。