酶底物定量法检测水中嗜肺军团菌

目的建立水中嗜肺军团菌定量检测法—酶底物定量法。方法通过加标比对试验确定酶底物定量法的样品保存条件以及试验条件;通过酶底物定量法与传统培养法对采集的水样加标前后测定结果的比对,获得该方法的准确度、精密度、特异性和灵敏度等技术指标,确定该方法的检测性能。结果酶底物定量法的样品应在含硫代硫酸钠的无菌采样容器中,常温条件下送往实验室完成检测;试验最适培养条件为36℃下培养7 d;准确度(回收率)范围在109%~113%;精密度RSD为0.37%~2.46%;方法特异性为94.59%,灵敏度为92.31%;50份实际样品测定时,酶底物定量法结果与真值的一致性为94%,准确度和灵敏度均高于传统培养法。结论酶底物定量法具有较好的准确度、精密度、特异性和灵敏度,适用于批量样品筛查以及较低水平嗜肺军团菌污染时的测定,是水中嗜肺军团菌标准检验方法的有益补充,同时为国标方法修订提供技术储备。

免疫荧光干式定量法检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白性能验证

目的 对免疫荧光干式定量法检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)进行临床分析性能验证。方法 依据国家卫生行业标准WS/T492-2016及参考美国临床和实验室标准化协会(CLSI)相关文件要求,对实验室免疫荧光干式定量法检测sST2的精密度、正确度、线性范围、参考区间进行评价。结果 sST2的高低两水平的批内精密度分别为3.48%和1.62%,实验室总精密度分别为4.19%和1.47%,两校准品偏倚分别为-1.95%和-0.40%,精密度与正确度均符合行业标准要求;在分析测量范围内线性良好(R2=0.9998),参考区间验证R=100%验证通过。结论 sST2免疫荧光干式定量法的各项性能指标均符合要求,适于临床样本分析。

核磁共振定量法测定利培酮含量

采用氢核磁共振定量法和氟核磁共振定量法测定利培酮含量。氢核磁共振定量法以利培酮δ7.29~7.35处质子峰为定量峰,马来酸δ6.02处为内标峰,在恒温300 K,采样时间4.0 s,弛豫延迟时间15 s,扫描次数为32次条件下采集氢谱。氟核磁共振定量法以4-溴-2-氟-乙酰苯胺为内标,在恒温300 K,谱宽12 500.0 Hz,中心频率-43 662.7 Hz下采集氟谱。测试结果显示,利培酮氢核磁共振定量法和氟核磁共振定量法的含量测定结果基本与质量平衡法的结果一致。因此,核磁共振法可用于利培酮绝对含量的测定,具有快速、简单、准确的优势。

平行五波长高效液相色谱指纹定量法测定柴胡舒肝丸化学指纹归属度和药效物质工艺收率

目的用柴胡舒肝丸(CHSGW)平行五波长HPLC指纹图谱研究其化学指纹归属度和药效物质工艺收率。方法以水煎混合样品指纹图谱为评价标准,采用归属度pi、逸出度qi、宏定性相似度Sm和宏定量相似度Pm进行化学指纹归属的整体定性定量分析,用指纹定量法测定CHSGW药效物质工艺收率。结果以S1模拟样为参照,按化学指纹贡献S16黄芩应为君药,S7甘草和S22大黄是臣药。用指纹定量法在五波长下评价出3批市售样品质量均较差。结论平行五波长指纹定量法更能够客观、准确地定量描述单味药对CHSGW化学指纹的贡献率和整体定性定量评价药效物质工艺收率,为CHSGW质量控制提供了新参考。

多级系统指纹定量法评价复方丹参片质量

目的建立多级系统指纹定量法(MSQFM)理论和技术并应用于复方丹参片(Fufang Dansen Pian,FFD-SP)280nm HPLC指纹图谱评价。方法从8个定量相似度(R、Q、M、W、P、QF、MF和C)中选取2个作平均作为宏定量目标函数,得到具有代表性的八级宏定量相似度,再与Sm及α评价中药质量等级分别构成一、二、三…八级系统指纹定量法,以均值P整合8个宏定量相似度,进而构成MSQFM,并对20批FFDSP-HPLC-FP进行评价。结果八级宏定量相似度P1,P2,…,P8都能良好地反映中药化学指纹的总体含量。用MSQFM评价S10质量(1级)极好;S9质量(2级)很好;S4、S12、S14和S19质量(3级)好;S7、S8、S11和S17质量(4级)较好;S13、S15、S16和S20质量(5级)中等;S18质量(6级)一般,其余5批为次品或劣质品。结论所建立MSQFM评价结果具有一致性,可清晰揭示FFDSPs-HPLC-FP反映的中药质量变异,是对SQFM的发展和完善。

核磁共振定量法测定恩曲他滨绝对含量

分别采用氢核磁共振定量法和氟核磁共振定量法测定恩曲他滨绝对含量。氢核磁共振定量法以恩曲他滨δ8.32-8.40处质子峰和对苯二甲酸二甲酯δ8.12处为定量峰,在恒温27℃,采样时间4.01 s,弛豫延迟时间10s,扫描次数为64条件下采集氢谱。氟核磁共振定量法以4′-溴-2′-氟-乙酰苯胺为内标,在恒温27℃,谱宽为29 296.87 Hz,中心频率为-54 667.50 Hz下采集氟谱。结果显示,氢核磁共振定量法和氟核磁共振定量法测定结果基本与质量平衡法结果一致。因此,核磁共振法测定恩曲他滨绝对含量具有专属性高、准确、快速等优势。

指纹定量法鉴定龙胆泻肝丸化学指纹归属度和药效物质差异归因

目的应用指纹定量法鉴定龙胆泻肝丸化学指纹归属度和药效物质差异归因。方法采用反相高效液相色谱法,以水(含1%醋酸)-乙腈(含1%醋酸)为流动相,线性梯度洗脱,以265 nm检测波长检测LDXGP(模拟样和市售品)、单味药HPLC指纹图谱。用归属度pi、逸出度qi、宏定性相似度Sm和宏定量相似度Pm等指标鉴定LDXGP化学指纹归属度和测定药效物质工艺收率。结果以S1模拟样为参照,鉴定出S3黄芩对LDXGP化学指纹贡献最大,其次是S2龙胆。用系统指纹定量法鉴定12批市售LDXGP大部分质量较差,用Sm相对误差分析各批市售LDXGP药效物质差异原因和可能的解决方案。结论指纹定量法可清晰鉴定LDXGP质量和鉴定化学指纹归属度及药效物质差异归因,可为LDXGP生产质量控制提供新的指导方法。

用荧光定量法检测Caspase-3的活性

目的通过检测Caspase3的活性反映Jurkat细胞凋亡。方法用放线菌素D诱导Jurkat细胞8h,裂解细胞,荧光分光光度计测定Caspase3的活性。同时,用Hoechst法进行检测,并进行平行的方法学比较。结果Ju-rkat细胞经不同浓度50μmol/L和100μmol/L的放线菌素D诱导后,Caspase3的活性显著增高,倍增值分别为10.091和10.818,相应的Caspase3活性单位为0.641和0.659;而未经诱导的Jurkat细胞仅为0.061。加入Cas-pase3抑制剂后,倍增值分别为0.101和0.119,Caspase3的活性单位为0.006和0.007。而用Hoechst法染色时,可见Jurkat细胞仅出现早期凋亡的形态学改变。结论荧光定量法是一种良好的定量检测Caspase3的方法,可用于检测早期的细胞凋亡。

指纹定量法测定中药复方指纹归属度和药效物质工艺收率

通过建立中药复方化学指纹有机加和模型来研究中药复方化学指纹成分归属度和药效物质工艺收率。该法首先进行指纹归属的定性分析,然后进行指纹归属定量分析。提出3种可供选择使用的判定单味药在复方中的化学成分数量和分布比例的方法。就紫外吸收成分来说,该法评价出S5黄芩对清热解毒注射液(QRJDI)的贡献最大,其次是S7龙胆、S4金银花、S8知母和S9栀子;评价出8批市售QRJDI药效物质工艺收率均很低。指纹定量法能够客观、准确地定量描述单味药对复方制剂化学指纹的贡献大小和定量评价中药复方药效物质的工艺收率。

高效液相色谱-线性指纹定量法评价人参归脾丸的三波长指纹图谱

以样品指纹向量与对照指纹向量的多元化学组分间存在线性函数关系为基础,引入相关系数r、斜率a、截距b及线性定性相似度SL、线性定量相似度ML等概念,建立线性指纹定量法(linearly quantified fingerprint method,LQFM)模型以定性、定量控制中药质量。用高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD)同时测定了10批人参归脾丸(Renshen Guipi Wan,RSGPW)分别在203、228和326 nm下的高效液相色谱指纹图谱,运用LQFM理论模型,鉴定RSGPW质量。LQFM能显著区别不同来源的产品,同一厂家产品质量控制一致。鉴定结果与已知的系统指纹定量法评价结果对比,LQFM对中药多元化学成分的复杂系统能实现客观的定性、定量评价。多波长指纹图谱能最大限度地兼顾中药各成分的紫外吸收特征,对中药质量控制具有更全面和可靠的特点。

粪便潜血检测定量法在结直肠癌及其他下消化道出血性疾病中的应用分析

目的比较与分析粪便潜血定量法与定性法在下消化道疾病检测中的阳性检出率以及定量法检测值与结直肠癌Dukes分期的关系。方法选择2014年7月至2015年7月在内镜室接受肠镜检查的患者,所有患者在做肠镜检查前均留取了标本同时进行便潜血定量与定性检测,根据肠镜和病理诊断结果,最终将1 002例纳入本研究,并按诊断分为5组,其中结直肠癌组196例,溃疡性结肠炎组247例,结直肠息肉组205例,其他炎性肠病组198例,正常组156例。分别比较两种方法在各疾病组的阳性检出率,观察定量法检测值在不同Dukes分期的分布。结果定量法与定性法检测在结直肠癌组、溃疡性结肠炎组、结直肠息肉组阳性检出率的差异均有统计学意义(P<0.001),在其他炎性肠病组差异无统计学意义(P<0.423)。FOBT定量法阳性的结直肠癌病例主要集中在B期和C期,且随着Dukes病理分期的进展,检测数值有增大趋势。结论粪便潜血定量法检测在下消化道出血性疾病的筛查及结直肠癌的Dukes分期中有很好的临床应用价值。

硅酸盐矿物中低含量元素的电子探针异点分步定量法

以电子探针分析硅酸盐矿物国家标准样品 ,研究了不同分析方法和实验条件对硅酸盐矿物的主量元素和质量分数<2 %的低含量元素的电子探针定量分析精度的影响;结果表明 ,在硅酸盐矿物的电子探针定量分析中 ,在假定不含低含量元素的情况下先用常规实验条件分析主量元素的含量 ,尔后用非常规实验条件异点分析低含量元素的含量 ,并让主量元素参与低含量元素定量计算的ZAF校正 ,可以保证不同含量的被测元素均具有较高的分析精度 ,并称该法为“异点分步定量法”。

基于整体化学键振动和价电子跃迁的光谱指纹定量法鉴定麻黄质量

目的本文以中药红外-紫外光谱(IR-UV)联用为基础,建立了麻黄IR-UV光谱指纹图谱,并以光谱指纹定量法评价其质量。方法将IR和UV光谱各数据点按平均值法分别生成对照指纹图谱,以光谱点为单位计算两类光谱的宏观定性定量信息并以等权融合。结果以光谱指纹定量法鉴定10批麻黄质量,结果9批质量均好,1批质量中等。结论基于整体化学键振动和价电子跃迁的光谱指纹定量法可便捷、准确、有效地评价麻黄质量。

红细胞一管定量法筛查地中海贫血的探讨

目的 :评价地中海贫血 (地贫 )红细胞一管定量筛查方法。方法 :对象 1～ 14岁儿童 5 0 0例 ;采用红细胞一管定量筛查法测定溶血度 <6 0 %者 ,进一步作琼脂糖凝胶电泳及基因分析。结果 :5 0 0例中溶血度 <6 0 %者80例 ,最后由电泳及基因确诊 β -地贫 12例 ,a-地贫 48例 ,其检出率达到 75 %。结论 :红细胞一管定量法操作简单、快速 ,无需复杂设备 ,结果可靠 ,为地贫诊断提供了一个初步的依据 。

UV-IR光谱指纹定量法鉴定六味地黄丸质量

目的建立六味地黄丸(LWDHW)浓缩丸UV-IR光谱指纹图谱,应用UV-IR光谱等权融合模型原理和系统指纹定量法评价其质量。方法将UV和IR光谱各数据点按平均值法分别生成对照指纹图谱,以光谱点为单位计算两类光谱的宏观定性和宏定量信息并以等权融合,计算各批样品的Sm和Pm值。结果以光谱指纹定量法鉴定10批六味地黄丸浓缩丸质量,鉴定出7批质量均为良好以上,2批质量一般,1批质量为次。结论所建立的UV-IR光谱指纹图谱用系统指纹定量法可全面有效地鉴别和控制LWDHW质量。

基于三波长融合谱的系统指纹定量法鉴定龙胆泻肝丸的真实质量

建立了龙胆泻肝丸(Longdanxiegan pill,LDXGP)三波长融合高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,以系统指纹定量法全面鉴定LDXGP的质量。采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),运用多波长融合指纹图谱技术对色谱图进行处理,以黄芩苷为参照物峰,确立了63个共有指纹峰,以宏定性相似度为参量对12个厂家的12批LDXGP进行聚类分析,确定用其中10批生成对照指纹图谱(RFP),以此RFP为标准用系统指纹定量法评价12批LDXGP的质量。结果鉴别出9批质量完全合格,1批含量明显偏高,2批化学成分数量和分布比例不合格。基于多波长融合技术的系统指纹定量法是评价中药真实质量的可靠方法。

系统指纹定量法鉴别龙胆泻肝丸质量

建立龙胆泻肝丸(Longdanxiegan pill,LDXGP)的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,以系统指纹定量法评价其质量。采用RP-HPLC法,以宏定性相似度为参量对12批LDXGP进行聚类分析,确定用其中10批生成对照指纹图谱(RFP),以此RFP为标准用系统指纹定量法评价12批LDXGP质量。以龙胆苦苷为参照物峰,确定60个共有指纹峰,建立了LDXGP的HPLC指纹图谱。用系统指纹定量法鉴别出8批质量合格,1批含量明显偏高,1批含量明显偏低,2批化学成分数量和分布比例不合格。系统指纹定量法将整体定性分析和整体定量分析密切结合,是评价中药质量的有效方法。

指纹定量法评估知柏地黄丸指纹归属度和药效物质工艺收率

目的建立中药复方化学指纹成分归属度和工艺药效物质收率的完全定性定量分析的指纹定量法。方法指纹定量法遵循中药复方化学指纹有机加和模型原理,首先进行指纹归属的定性分析,然后进行指纹归属定量分析,两者有机综合可解决中药复方化学指纹归属的定量问题和测定中药复方药效物质收率。使用相似性比Sb、拟合定性相似度Ssyn和双定性相似度及其均值判定单味药化学成分数量和分布比例;采用宏观定量相似度R和双定量相似度及其均值评判指纹归属度和工艺收率。结果该方法应用于知柏地黄丸的研究,评价出熟地黄对知柏地黄丸化学成分贡献最大,为君药,臣药是山茱萸、知母、泽泻和牡丹皮。用双定性双定量相似度及其均值,评价了10批市售知柏地黄丸的药效物质收率。结论指纹定量法能够客观、准确地定量描述单味药对复方制剂化学指纹的贡献大小和定量评价中药复方药效物质的工艺收率,是中药复方制剂化学指纹归属定量控制以及工艺优化的可行方法。

荧光原位杂交和基因组半定量法检测乳腺癌组织中c-erbB-2基因扩增

目的利用荧光原位杂交(FISH)与基因组半定量法检测乳腺正常良性和恶性组织中原癌基因c-erbB-2的扩增情况。方法收集50例临床切除的乳腺肿瘤组织,抽提收集样品基因组DNA并扩增c-erbB-2的特异序列构建转化子,以c-erbB-2的特异序列为探针进行间期核FISH检测乳腺肿瘤组织中c-erbB-2基因的扩增,并采用基因组半定量法比较不同组别乳腺组织中c-erbB-2基因的扩增。结果FISH检测发现正常乳腺组织中未出现c-erbB-2扩增,而良性与恶性组织中有不同程度的扩增,基因组半定量分析显示恶性肿瘤组织中c-erbB-2扩增程度高于良性与正常组织。结论c-erbB-2扩增是乳腺癌变的可靠的分子指标。可用荧光原位杂交与基因组半定量法对乳腺癌进行分子生物学诊断,且前者的敏感性与稳定性优于后者。